一種低聚古羅糖醛酸磷酸酯及其制備方法和應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于海洋藥物和免疫增強劑領(lǐng)域,具體地說,涉及一種低聚古羅糖醛酸磷 酸酯及其制備方法和應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 多糖是一類天然的生物應答調(diào)節(jié)劑(Biological response modifier, BRM),它對 機體的特異性和非特異性免疫功能均具有增強作用,例如,香菇多糖和黃芪多糖因顯著的 免疫增強作用而作為免疫增強劑應用于藥品或功能制品中。然而,這些多糖的分離、純化工 藝大都較為繁瑣,產(chǎn)業(yè)化成本較高。
[0003] 近年來,多糖磷酸酯作為一類具有特殊結(jié)構(gòu)的多糖衍生物,被報道具有免疫調(diào)節(jié)、 抗腫瘤、抗氧化等生物活性。1998年,日本東北大學的Kitazawa小組從德氏乳桿菌保加利 亞亞種(Lactobacillus delbrueckii ssp. Bulgaricus)中分離得到一種胞外磷酸化多糖 (APS),研宄表明APS可以明顯促進C57BL/6小鼠脾臟淋巴細胞的增殖,同時還可以激活巨 噬細胞而抑制S180和P388腫瘤細胞的增殖;然而將APS水解掉磷酸基之后,其活性明顯下 降甚至消失,證明磷酸基在該多糖的免疫增強作用中發(fā)揮重要的作用(Kitazawa H,Harata T,Uemura J,et al.Int J Food Microbiol, 1998, 40 (3): 169 ~175)?;谝陨习l(fā)現(xiàn), 2004年日本東北大學的Sato等發(fā)現(xiàn)通過化學的手段將右旋糖酐上共價接入磷酸基之后, 可以顯著促進小鼠脾臟B淋巴細胞的增殖,促進B淋巴細胞表面CD分子的表達,以及促進 IL_10、IFN-y 等細胞因子 mRNA 的表達(Sato T,Nishimura_Uemura J,Shimosato T,et al.J Food Protect, 2004, 67 (8): 1719~1724)。這些發(fā)現(xiàn)初步揭示了多糖磷酸酯具備開 發(fā)成為多糖類免疫增強劑的潛力。
[0004] 低聚古羅糖醛酸是一種由海洋褐藻中提取、分離、純化的均聚酸性多糖,是由 L-古羅糖醛酸通過a_(l,4)-糖苷鍵連接形成的線性聚合物。目前,文獻報道了低聚古羅 糖醛酸及其衍生物具有抗凝血、抗病毒、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性,然而關(guān)于低聚古 羅糖醛酸磷酸酯及其在免疫增強劑中的應用未見文獻報道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 針對目前多糖類免疫調(diào)節(jié)劑的產(chǎn)業(yè)化成本高,以及多糖磷酸酯和低聚古羅糖醛酸 免疫調(diào)節(jié)作用的研宄現(xiàn)狀,本發(fā)明提供了一種低聚古羅糖醛酸磷酸酯及其制備方法和應 用。本發(fā)明方法制備得到的低聚古羅糖醛酸磷酸酯能夠用于多糖類免疫調(diào)節(jié)劑藥品、食品 或功能制品中,具有原料易得、工藝簡單、成本低等特點。
[0006] 為實現(xiàn)上述發(fā)明目的,本發(fā)明采用下述技術(shù)方案予以實現(xiàn):
[0007] -種低聚古羅糖醛酸磷酸酯,它的結(jié)構(gòu)式如下:
[0008]
【主權(quán)項】
1. 一種低聚古羅糖醛酸磷酸酯,其特征在于它的結(jié)構(gòu)式如下:
其分子骨架為L-古羅糖醛酸通過α -(1,4)-糖苷鍵連接形成的線性聚合物,式中R1=H 或Li、Na、K、Ca、Mg藥用鹽,R2=H或Ρ032-,1? 2取代基為-PO 32-時的成鹽形式與1^取代基為 藥用鹽時一致,η彡20。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯,其特征在于:所述低聚古羅糖醛酸 磷酸酯的有機磷質(zhì)量百分比>2%。
3. 權(quán)利要求1所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯的制備方法,其特征在于它包括以下步 驟:將低聚古羅糖醛酸加入到反應器中,然后加入尿素,低聚古羅糖醛酸與尿素的質(zhì)量比為 1 :5~25 ;接著加入N,N-二甲基甲酰胺,低聚古羅糖醛酸與N,N-二甲基甲酰胺的質(zhì)量體積 比為1 :50~100 ;再加入質(zhì)量體積比為85%的磷酸,低聚古羅糖醛酸與磷酸的質(zhì)量體積比為 1 :1~10 ;上述組分混合形成的混合物在110°C~150°C攪拌反應0. 5~6小時;反應結(jié)束后,收 集反應沉淀,用95%乙醇反復洗滌后,溶于水中,調(diào)節(jié)溶液的pH至8~9 ;除去反應過程中殘 留的尿素以及磷酸鹽后,噴霧干燥,得到低聚古羅糖醛酸磷酸酯。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯的制備方法,其特征在于:所述低聚 古羅糖醛酸的重均分子量〈20 kDa,純度> 80%。
5. 權(quán)利要求1所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強作用的藥品、食品或 功能制品中的應用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強作用的藥品、食 品或功能制品中的應用,其特征在于:所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著提高免疫功能低 下小鼠的脾臟/體重比值和胸腺/體重比值,能夠抑制環(huán)磷酰胺引起的小鼠免疫器官的萎 縮。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強作用的藥品、食 品或功能制品中的應用,其特征在于:所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著增加免疫功能低 下小鼠血清溶血素的釋放,能夠改善因環(huán)磷酰胺而引起的小鼠體液免疫功能的下降。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強作用的藥品、食 品或功能制品中的應用,其特征在于:所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著增強免疫功能低 下小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應,具有恢復因環(huán)磷酰胺所致的小鼠細胞免疫低下的作用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強作用的藥品、食 品或功能制品中的應用,其特征在于:所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著增加免疫功能低 下小鼠的廓清指數(shù)和吞噬指數(shù),具有增強小鼠單核-巨噬細胞功能,恢復因環(huán)磷酰胺導致 的單核-巨噬細胞功能低下的作用。
10. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強作用的藥品、 食品或功能制品中的應用,其特征在于:所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著增加免疫功能 低下小鼠外周血象中白細胞、淋巴細胞和紅細胞的數(shù)量,對環(huán)磷酰胺所致的外周血中白細 胞、淋巴細胞、紅細胞數(shù)量下降具有恢復作用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種低聚古羅糖醛酸磷酸酯及其制備方法和應用,低聚古羅糖醛酸磷酸酯的分子骨架為L-古羅糖醛酸通過α-(1,4)-糖苷鍵連接形成的線性聚合物,式中R1=H或Li、Na、K、Ca、Mg藥用鹽,R2=H或PO32-,-PO32-的成鹽形式與R1取代基為藥用鹽時一致,n≤20。本發(fā)明提供的低聚古羅糖醛酸磷酸酯能改善小鼠因環(huán)磷酰胺所致的免疫功能低下,主要表現(xiàn)在升高免疫臟器/體重比值,增強體液免疫和細胞免疫能力,增強單核-巨噬細胞的吞噬能力,對外周血象中白細胞和淋巴細胞的數(shù)量也有明顯的升高作用。藥理實驗結(jié)果證明,本發(fā)明提供的低聚古羅糖醛酸磷酸酯可以用于制備具有免疫增強作用的藥品、食品或功能制品。
【IPC分類】C08B37-00, A23L1-09, C07H1-00, C07H11-04, A61P37-04
【公開號】CN104650253
【申請?zhí)枴緾N201510102665
【發(fā)明人】李春霞, 管華詩, 李全才, 辛萌, 李?;? 于廣利
【申請人】中國海洋大學
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年3月9日