一種從深海魚(yú)中提取甘油三酯型dha和epa的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從深海魚(yú)中提取甘油三酯型DHA和 EPA的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 深海魚(yú)，如金槍魚(yú)等是一種大型遠(yuǎn)洋性重要商品食用魚(yú)。由于深海魚(yú)必須時(shí)常保 持快速游動(dòng)，才能維持身體的供給，加上只在海域深處活動(dòng)，因此肉質(zhì)柔嫩鮮美，且不受環(huán) 境污染，是現(xiàn)代人不可多得的健康美食。深海魚(yú)的加工業(yè)成為一個(gè)重要的產(chǎn)業(yè)，但是深海魚(yú) 在加工過(guò)程中存在品質(zhì)難以控制、邊角料利用程度低、生產(chǎn)能耗高、原料損失嚴(yán)重等一系列 重大問(wèn)題，企業(yè)經(jīng)濟(jì)損失較大。因此對(duì)深海魚(yú)加工過(guò)程產(chǎn)生的下腳料增加營(yíng)業(yè)收入，實(shí)現(xiàn)經(jīng) 濟(jì)價(jià)值。魚(yú)油的應(yīng)用非常廣泛，可應(yīng)用于保健、醫(yī)藥、食品、化工以及飼料等領(lǐng)域。通過(guò)將深 海魚(yú)的下角料用于制備魚(yú)油是一種非常好的實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)效益的方式。
[0003] 魚(yú)油中n-3多不飽和脂肪酸（n-3PUFA)在人體中具有重要的生物學(xué)意義，其特征 脂肪酸二十碳五烯酸（EPA)和二十二碳六烯酸（DHA)的生理活性已經(jīng)明確，EPA具有預(yù)防冠 心病、降血壓、消除疲勞、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和腦血栓、抗癌等生理活性，DHA能顯著地促進(jìn) 嬰兒的智力發(fā)育，改善大腦機(jī)能，提高記憶力，EPA和DHA是生產(chǎn)預(yù)防心血管疾病和嬰兒益 智食品的良好基料。
[0004] 魚(yú)油中的多烯脂肪酸，包括EPA和DHA，是屬熱及化學(xué)不穩(wěn)定物質(zhì)，將其分離提純 及其困難，現(xiàn)有常用的分離純化的技術(shù)有精餾分離技術(shù)、分子蒸餾技術(shù)、色譜分離技術(shù)、低 溫冷凍技術(shù)、金屬鹽沉淀技術(shù)和魚(yú)油交酯化，但都存在各自的不足：
[0005] 其中，傳統(tǒng)精制技術(shù)的主要工藝流程包括脫膠、脫酸、脫色、脫臭等，該精制工藝繁 瑣，產(chǎn)品色澤不理想，并且在此提取過(guò)程中所需要的加熱容易導(dǎo)致油脂氧化酸敗。精餾分 離技術(shù)，是目前使用最廣泛的工業(yè)化分離技術(shù)，其原理是利用混合脂肪酸中各組分揮發(fā)性 不同，在同一溫度下依不同飽和蒸汽壓的性質(zhì)而得到分離，但該方法操作溫度較高，時(shí)間較 長(zhǎng)，致使不飽和脂肪酸發(fā)生熱敏反應(yīng)，影響產(chǎn)品質(zhì)量和收率。分子蒸餾技術(shù)，在極高的真空 條件下，依據(jù)液體分子受熱會(huì)從頁(yè)面逸出，在氣相中分子運(yùn)動(dòng)的平均自由程不同而得以分 離，該種技術(shù)操作溫度低，被分離物質(zhì)不易分離或者聚合，且分子蒸餾裝置一次性投資較 大，且維護(hù)費(fèi)用較高。超臨界流體技術(shù)設(shè)備投資大，抽提壓力高，且傳統(tǒng)超臨界萃取裝置主 要是由單一高壓反應(yīng)釜和分離釜組成的，僅能進(jìn)行單一的分離反應(yīng)，此外，超臨界萃取無(wú)法 實(shí)現(xiàn)將EPA、DHA與其他分子量接近的飽和或低濃度不飽和脂肪酸分離。色譜分離技術(shù)，是 一種現(xiàn)代分離、分析檢測(cè)方法，可用于脂肪酸分離純化和檢測(cè)的色譜方法有氣相色譜、薄層 色譜、高效液相色譜等，多數(shù)情況下用簡(jiǎn)易的硅膠色譜進(jìn)行分離，該法能將極性相近，結(jié)構(gòu) 相似的不飽和脂肪酸分離，主要缺點(diǎn)是耗能大，操作成本高。低溫冷凍技術(shù)，是根據(jù)脂肪酸 混合物在過(guò)冷有機(jī)溶劑中溶解度的不同而達(dá)到分離的目的。飽和脂肪酸在有機(jī)溶劑中的溶 解度與碳鏈的長(zhǎng)度成反比，而同一不飽和度的脂肪酸，碳鏈越長(zhǎng)，溶解度越低，對(duì)同樣碳鏈 數(shù)目的不飽和脂肪酸，隨雙鍵的增加，溶解度增加。該種技術(shù)主要缺點(diǎn)是需回收大量溶劑， 分離效率不高，需要極低溫的冷卻設(shè)備，成本較高。金屬鹽沉淀技術(shù)，是利用飽和脂肪酸、低 不飽和脂肪酸以及EPA、DHA的金屬鹽在某種有機(jī)溶劑中溶解度的不同進(jìn)行分離，常用的為 硝酸銀絡(luò)合法，該方法操作簡(jiǎn)單、條件溫和、周期短、收率高，但是硝酸銀昂貴、回收困難、生 產(chǎn)成本高。魚(yú)油交酯化技術(shù)，是指在堿性催化劑存在時(shí)，通過(guò)乙醇置換油脂中的甘油，制取 乙酯化的高不飽和脂肪酸（EPA和DHA)。乙酯型《-3PUFA在人體中消化和吸收比較困難， 而且可能存在安全隱患。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種從深海魚(yú)中提取甘油三酯型DHA和EPA的方法，旨在 解決現(xiàn)有技術(shù)從魚(yú)油中提取的DHA和EPA純度低、酸值高、顏色深需脫色、且得到DHA和EPA 為DHA和EPA的單甘油酯、三甘油酯等混合物或乙酯類(lèi)魚(yú)油且成本高的問(wèn)題。
[0007] 本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種從深海魚(yú)中提取甘油三酯型DHA和EPA的方法，包括以 下步驟：
[0008] 將深海魚(yú)絞碎成肉漿，加水后在無(wú)氧條件下進(jìn)行加熱處理后，使用胰蛋白酶將其 進(jìn)行第一酶解反應(yīng)后，進(jìn)行固液分離，收集濾液，得到粗魚(yú)油；
[0009] 利用脂肪酶1LVK-F100將所述粗魚(yú)油進(jìn)行第二酶解反應(yīng)，得到游離脂肪酸；
[0010] 在水浴條件下，將尿素的甲醇或乙醇飽和溶液與所述游離脂肪酸進(jìn)行混合后得到 混合物溶液，將所述混合物溶液進(jìn)行降溫處理至溫度為4°c -10°c、保溫靜置處理48h-72h 后，進(jìn)行過(guò)濾處理得到濾液，將所述濾液進(jìn)行萃取處理并收集有機(jī)層，得到濃縮的含EPA、 DHA的多不飽和脂肪酸；
[0011] 以所述含游離EPA、DHA的多不飽和脂肪酸為底物，將其放入含有脂肪酶 N〇V〇zym435的超臨界萃取反應(yīng)釜中，在超聲波磁場(chǎng)中進(jìn)行亞臨界酶促反應(yīng)，將反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn) 行超臨界萃取、精餾，得到EPA、DHA的脂肪酸甘油三酯。
[0012] 本發(fā)明提供的從深海魚(yú)中提取甘油三酯型DHA和EPA的方法，能有效地從深海魚(yú)、 甚至是作為邊角料的深海魚(yú)頭中提取DHA和EPA，其生產(chǎn)成本低。制備過(guò)程中得到的粗魚(yú) 油酸值低，可達(dá)到1. 5(mg K0H)/g ;粗魚(yú)油中酯化脂肪酸水解程度高，可達(dá)到50% ;最終得到 的DHA和EPA為甘油三酯型DHA和EPA，且甘油三型EPA和DHA的含量高，其中，甘油三酯型 EPA可高達(dá)15%，甘油三酯型DHA可高達(dá)75%。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的從深海魚(yú)中提取甘油酯型DHA和EPA的流程示意圖。
[0014] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例提供的用于制備EPA、DHA的脂肪酸甘油三酯亞臨界酶促反應(yīng) 示意圖。
[0015] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例提供的用于制備EPA、DHA的脂肪酸甘油三酯的流程示意圖； 其中，圖3中各編號(hào)分別為：1.C0 2鋼瓶，2.過(guò)濾器，3.冷機(jī)，4.高壓計(jì)量泵，5.混合器，6.預(yù) 熱器，7.反應(yīng)釜，8. -級(jí)分離釜，9.二級(jí)分離釜，10.精餾柱（10-1至10-4分別為以及精餾 柱、二級(jí)精餾柱、三級(jí)精餾柱、四級(jí)精餾柱)，11.攜帶劑，12.累積流量計(jì)。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 為了使本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合 附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用 以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0017] 本發(fā)明實(shí)施例提供了一種深海魚(yú)從深海魚(yú)中提取甘油三酯型DHA和EPA的方法， 包括以下步驟，如附圖1所述：
[0018] S01.采用酶解技術(shù)制備粗魚(yú)油：將深海魚(yú)絞碎成肉漿，加水后在無(wú)氧條件下進(jìn)行 加熱處理后，使用胰蛋白酶將其進(jìn)行第一酶解反應(yīng)后，進(jìn)行固液分離，收集濾液，得到粗魚(yú) 油；
[0019] S02.制備游離脂肪酸：利用脂肪酶1LVK-F100將所述粗魚(yú)油進(jìn)行第二酶解反應(yīng)， 得到游離脂肪酸；
[0020] S03.采用尿素包埋法分離含EPA、DHA的多不飽和脂肪酸：在水浴條件下，將尿素 的甲醇或乙醇飽和溶液與所述游離脂肪酸進(jìn)行混合后得到混合物溶液，將所述混合物溶液 進(jìn)行降溫處理至溫度為4°C -10°C、保溫靜置處理48h-72h后，進(jìn)行過(guò)濾處理得到濾液，將所 述濾液進(jìn)行萃取處理并收集有機(jī)層，得到濃縮的含EPA、DHA的多不飽和脂肪酸；
[0021] S04.制備EPA、DHA的脂肪酸甘油三酯：以所述含游離EPA、DHA的多不飽和脂肪酸 為底物，將其放入含有脂肪酶N 〇V〇zym435的超臨界萃取反應(yīng)釜中，在超聲波磁場(chǎng)中進(jìn)行亞 臨界酶促反應(yīng)，將反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行超臨界萃取、精餾，得到EPA、DHA的脂肪酸甘油三酯。
[0022] 具