一種蝸牛蛋白酶的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種酶的制備方法，具體地說(shuō)是一種蝸牛蛋白酶的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蝸牛蛋白酶是從蝸牛的足腺分泌的粘液中制備的生物活性蛋白，它富含天然尿囊素、鈣、甘醇酸、骨膠原、蛋白質(zhì)和維生素等保養(yǎng)肌膚必不可少的材料。此外，蝸牛粘液還是一種天然抗生素，能夠殺死人們皮膚上的某些細(xì)菌，并能消除皮膚斑點(diǎn)和痤瘡，因?yàn)樗軡B透到皮膚的第三個(gè)層面。蝸牛分泌的粘液含有的化學(xué)成分具有緊膚作用，能夠使皮膚迅速再生。從蝸牛粘液中提煉出的尿囊素可以使皮膚再生；蛋白質(zhì)和維生素可以增加皮膚的營(yíng)養(yǎng)，使肌膚更加細(xì)膩和光滑。而目前蝸牛蛋白酶的提取方法存在工藝復(fù)雜、操作性差和提純率低的缺陷，保存條件高使得蝸牛蛋白酶價(jià)格居高不下，不能實(shí)現(xiàn)量產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明就是為了解決現(xiàn)有蝸牛蛋白酶提取方法工藝復(fù)雜、操作性差、提純率低、成本高的技術(shù)問(wèn)題，提供一種工藝簡(jiǎn)單、操作性強(qiáng)、提純率高、成本低的蝸牛蛋白酶的制備方法。
[0004]本發(fā)明提供一種蝸牛蛋白酶的制備方法，包括以下步驟:
[0005](I)蝸牛選購(gòu):選用鮮活褐云瑪瑙螺；
[0006](2)蝸牛清洗:將蝸牛置于放養(yǎng)箱中用溫度為18°C?28°C的清水沖洗，洗掉糞便和雜物；
[0007](3)蝸牛粘液收集:取清洗干凈的鮮活蝸牛，在工作臺(tái)上靜置，待其身體伸出外殼，用小型充電電源調(diào)整空載電壓>900伏，負(fù)載電流〈4毫安，瞬間電擊蝸牛足部，一觸即離重復(fù)5次，蝸牛分泌粘液后用滴管吸取至燒杯中；
[0008](4)第一次過(guò)濾:將收集好的粘液通過(guò)450目過(guò)濾網(wǎng)，收集在離心管中；
[0009](5)離心:用低溫離心機(jī)將第一次過(guò)濾后的粘液在0°C?5°C下離心10分鐘，離心轉(zhuǎn)速為11000轉(zhuǎn)/分，取上清液；
[0010](6)第二次過(guò)濾:將上清液經(jīng)過(guò)細(xì)菌濾器過(guò)濾；
[0011](7)真空凍干:濾液用塑料容器進(jìn)行真空凍干20小時(shí)，蝸牛蛋白酶含水量在6%以下；
[0012](8)膠磨:將凍干后的蝸牛蛋白酶在膠磨機(jī)中磨成粉末，分裝在200g安瓶中；
[0013](9)保存:200g安瓶抽氣封管，裝箱后置于干燥陰涼處保存。
[0014]優(yōu)選地，步驟(I)中選用的鮮活褐云瑪瑙螺的重量為15克以上，所述步驟(2)中，沖洗用的清水溫度為25°C;所述步驟(5)中，離心時(shí)的溫度為:TC;所述步驟(7)中，蝸牛蛋白酶含水量為6%。
[0015]本發(fā)明的有益效果是，本方法工藝簡(jiǎn)單、操作性強(qiáng)、提純率高，可實(shí)現(xiàn)蝸牛蛋白酶的量產(chǎn)，蝸牛蛋白酶成品價(jià)格低，每100公斤蝸牛粘液可產(chǎn)1.2公斤蝸牛蛋白酶。本發(fā)明提取的蝸牛蛋白酶經(jīng)過(guò)SB/T 10317-1999蛋白酶活力測(cè)定法進(jìn)行酶活性實(shí)驗(yàn)，其酶活性為7.5Xl(T3u/g。
【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1是本發(fā)明的制備方法的過(guò)程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017]如圖1所示:
[0018](I)蝸牛選購(gòu):
[0019]選用15克以上的鮮活褐云瑪瑙螺(學(xué)名:Achatina Fulica)。
[0020](2)蝸牛清洗:
[0021]將蝸牛置于放養(yǎng)箱中用溫度為18°C?28°C的清水沖洗，洗掉糞便和雜物，每次清洗還應(yīng)仔細(xì)挑除已死掉的蝸牛。對(duì)于沖洗用的清水，其溫度優(yōu)選為25V。
[0022](3)蝸牛粘液收集:
[0023]取50KG清洗干凈的鮮活蝸牛，在工作臺(tái)上靜置，待其身體伸出外殼，用小型充電電源調(diào)整空載電壓>900伏，負(fù)載電流〈4毫安，瞬間電擊蝸牛足部，一觸即離重復(fù)5次，蝸牛分泌粘液后用滴管吸取至燒杯中，50千克蝸?？墒占?000克粘液。
[0024](4)第一次過(guò)濾:
[0025]將收集好的粘液通過(guò)450目過(guò)濾網(wǎng)，收集在離心管中。
[0026](5)離心:
[0027]粘液用低溫離心機(jī)在0°C?5°C下離心10分鐘，離心轉(zhuǎn)速為11000轉(zhuǎn)/分，取上清液。對(duì)于離心溫度，優(yōu)選為3°C。
[0028](6)第二次過(guò)濾:
[0029]將上清液經(jīng)過(guò)細(xì)菌濾器過(guò)濾。
[0030](7)真空凍干:
[0031]濾液用塑料容器進(jìn)行真空凍干20小時(shí)，蝸牛蛋白酶含水量在6%以下，凍干的蝸牛蛋白酶為結(jié)晶體，呈米白色，5000克粘液可得60克蝸牛蛋白酶凍干粉。對(duì)于蝸牛蛋白酶含水量，優(yōu)選為6%。
[0032](8)膠磨:
[0033]將凍干后的蝸牛蛋白酶在膠磨機(jī)中磨成粉末，分裝在200g安瓶中。
[0034](9)保存:
[0035]200g安瓶抽氣封管，裝箱后置于干燥陰涼處保存。
[0036]上述褐云瑪瑙螺收集完粘液后需用清水與精飼料喂養(yǎng)5天后可再提取。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種蝸牛蛋白酶的制備方法，其特征是包括以下步驟: (1)蝸牛選購(gòu):選用鮮活褐云瑪瑙螺； (2)蝸牛清洗:將蝸牛置于放養(yǎng)箱中，用溫度為18°C?28°C的清水沖洗，洗掉糞便和雜物； (3)蝸牛粘液收集:取清洗干凈的鮮活蝸牛，在工作臺(tái)上靜置，待其身體伸出外殼，用小型充電電源調(diào)整空載電壓>900伏，負(fù)載電流〈4毫安，瞬間電擊蝸牛足部，一觸即離，重復(fù)5次，蝸牛分泌粘液后，用滴管吸取至燒杯中； (4)第一次過(guò)濾:將收集好的粘液通過(guò)450目過(guò)濾網(wǎng)，收集在離心管中； (5)離心:用低溫離心機(jī)將第一次過(guò)濾后的粘液在0°C?5°C下離心10分鐘，離心轉(zhuǎn)速為11000轉(zhuǎn)/分，取上清液； (6)第二次過(guò)濾:將上清液經(jīng)過(guò)細(xì)菌濾器過(guò)濾； (7)真空凍干:濾液用塑料容器進(jìn)行真空凍干20小時(shí)，蝸牛蛋白酶含水量在6%以下； (8)膠磨:將凍干后的蝸牛蛋白酶在膠磨機(jī)中磨成粉末，分裝在200g安瓶中； (9)保存:200g安瓶抽氣封管，裝箱后置于干燥陰涼處保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝸牛蛋白酶的制備方法，其特征是: 所述步驟(I)中選用的鮮活褐云瑪瑙螺的重量為15克以上，所述步驟(2)中，沖洗用的清水溫度為25°C;所述步驟(5)中，離心時(shí)的溫度為:TC;所述步驟(7)中，蝸牛蛋白酶含水量為6%。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種蝸牛蛋白酶的制備方法，其解決了現(xiàn)有蝸牛蛋白酶提取方法工藝復(fù)雜、操作性差、提純率低、成本高的技術(shù)問(wèn)題，其步驟是：選用鮮活褐云瑪瑙螺、清洗、粘液收集、第一次過(guò)濾、離心、第二次過(guò)濾、真空凍干、膠磨、保存。本發(fā)明廣泛用于蝸牛蛋白酶的制備。
【IPC分類】C12N9-64
【公開(kāi)號(hào)】CN104745555
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510188191
【發(fā)明人】劉斌, 楊磊
【申請(qǐng)人】威海圣奧羅生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月1日
【申請(qǐng)日】2015年4月20日