從大棗中提取環(huán)磷酸腺苷的方法
【專利說明】
[0001]
技術領域
本發(fā)明涉及一種從大棗中提取環(huán)磷酸腺苷的方法。
【背景技術】
[0002]環(huán)磷酸腺苷(cAMP)是當今分子生物學研究的重要內容之一，具有第二信使作用，控制并調節(jié)細胞內新陳代謝。基礎醫(yī)學研究證明至少40多種疾病(包括癌癥、高血壓、冠心、心肌梗塞和心源性休克等)與cAMP的代謝有關，臨床醫(yī)學研究證明cAMP對這些疾病有顯著療效。據(jù)報道，大棗中環(huán)磷酸腺苷的含量是已知植物中最高的，成熟棗肉中的cAMP含量是一般動植物的數(shù)萬倍，因此具有非常重要的開發(fā)利用價值。
[0003]現(xiàn)有的從棗中提取純化環(huán)磷酸腺苷的技術基本上都是采用了溶劑浸提和柱層析技術。李明潤等在中國專利200410018617.2 “從棗中提取環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的工藝”中通過浸泡，勻漿，離心，濃縮和三次陰離子交換柱層析和一次氧化鋁柱層析方法，得到環(huán)磷酸腺苷凍干粉，含量為750 nmol/g0中國專利200910066071.0 “一種提取棗中環(huán)磷酸腺苷的方法”中公開了利用微波高能處理后超聲振動提取法，得到環(huán)磷酸腺苷含量430 nmol/g左右。綜合看來，上述方法比化學合成法是具有成本低和無毒副作用的優(yōu)點，但仍然存在提取周期長、效率較低、工藝復雜的不足。因此，從提取效率和質量及工業(yè)化生產等方面來看，現(xiàn)有的工藝都急需大力改進提聞。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明目的在于提供一種工藝路線簡單、成本低廉的從大棗中提取環(huán)磷酸腺苷的方法，得到高含量的環(huán)磷酸腺苷，克服傳統(tǒng)提取工藝提取周期長、提取率較低、工藝復雜的不足，為進一步開發(fā)環(huán)磷酸腺苷生物活性提供原材料生產的技術保障。
[0005]本發(fā)明的技術方案:
采用大棗為原料，利用水提醇沉法得到大棗提取液，然后加入活性白土離心，再經大孔樹脂分離得到的粗提物，最后采用聚酰胺柱純化，得到含量80-91%的環(huán)磷酸腺苷。
[0006]一種從大棗中提取環(huán)磷酸腺苷的方法，其特征在于該方法步驟為:
A提取:采用大棗為原料，將其粉碎后，經水提醇沉得到大棗提取液；
B離心:將上述大棗提取液濃縮后加入活性白土高速離心，過濾去除沉淀后，將上清液濃縮；
C分離:將上述B步驟所得濃縮液通過大孔樹脂進行分離，分別采用蒸餾水及乙醇洗脫，濃縮回收乙醇洗脫液；
D富集:將上述C步驟所得乙醇濃縮液，通過陰離子交換樹脂分離富集，分別采用蒸餾水及酸性溶液洗脫，濃縮酸性洗脫液得環(huán)磷酸腺苷粗提物；
E純化:將上述D步驟所得環(huán)磷酸腺苷粗提物采用聚酰胺柱純化，分別采用蒸餾水及乙醇溶液洗脫，濃縮回收乙醇洗脫液，得到環(huán)磷酸腺苷。
[0007]本發(fā)明中環(huán)磷酸腺苷的測定采用高效液相色譜法。
[0008]對于本發(fā)明所述的方法，繼續(xù)進行進一步的描述:
本發(fā)明步驟A提取:
稱取大棗，粉碎后水煮廣3次，合并水煮液，將水煮液濃縮后加入體積比5?10倍量乙醇進行沉淀，濾除沉淀后，將上清液濃縮至相對密度為1.02?1.12，得大棗提取液。
[0009]本發(fā)明步驟B離心:
加入棗原料質量3°/Γ?Ο%的活性白土，離心轉速5000-10000 r/min,離心時間5_10分鐘。
[0010]本發(fā)明步驟C分離:
用D-101或AB-8大孔吸附樹脂進行分離，先用體積比5?10倍量的蒸餾水洗脫，再用體積比5?10倍量的含量為109Γ90%乙醇進行洗脫。
[0011]本發(fā)明步驟D富集:
通過D-301或D-315離子交換大孔樹脂，先用體積比5?10倍量的蒸餾水洗脫，再用體積比5?1倍量的3%-10%的甲酸或3%-10%乙酸溶液洗脫。
[0012]本發(fā)明步驟E純化:
用30-60目或60-100目或100-120目聚酰胺柱純化，先用體積比5?10倍量的蒸餾水洗脫劑進行洗脫，再用體積比5?10倍量的109Γ90%乙醇洗脫劑進行洗脫。
[0013]本發(fā)明提供的大棗中環(huán)磷酸腺苷的提取方法與現(xiàn)有方法相比具有如下優(yōu)點:
本發(fā)明提供的方法可以得到純度80-91%的環(huán)磷酸腺苷。提取過程中通過加活性白土離心有效去除棗紅素；采用的大孔樹脂分離去除棗黃酮；通過陰離子交換樹脂對環(huán)磷酸腺苷的特異性吸附，富集環(huán)磷酸腺苷；最后采用聚酰胺柱去除大棗中多酚類物質，純化環(huán)磷酸腺苷。
[0014]該方法生產成本低、純化效率高，易于實現(xiàn)工業(yè)化規(guī)模生產。
[0015]
【具體實施方式】
本發(fā)明將通過具體實施例進行詳細的描述。
[0016]實施例1
準確稱取100.0 g粉碎的大棗加入到2000 mL燒瓶中，用1000 mL蒸餾水提取三次，將所得的提取液合并，濃縮后加入300 mL的工業(yè)乙醇，產生沉淀，將沉淀濾除，濃縮上清液。在濃縮的上清液中加入5 g的活性白土離心，離心轉速5000 r/min，離心時間5分鐘，沉淀濾除后，將上清液濃縮至浸膏狀。將浸膏狀提取液通過100 g AB-8大孔吸附樹脂分離，先用250 mL蒸餾水洗脫，然后用250 mL 30%乙醇洗脫，最后采用250 mL 90%乙醇洗脫。將上述30%乙醇洗脫液濃縮后通過D-301陰離子大孔樹脂富集，分別用150 mL水及150 mL 3%的甲酸溶液洗脫。將3%的甲酸洗脫液濃縮后，通過30-60目聚酰胺柱，分別用100 mL水、100mL 30%乙醇、100 mL 90%乙醇洗脫。最后將上述30%乙醇洗脫液濃縮干燥。干燥產物采用液相色譜進行定量分析，此方法得到的環(huán)磷酸腺苷含量為85%。
[0017]實施例2
準確稱取100.0 g粉碎的大棗加入到2000 mL燒瓶中，用1000 mL蒸餾水提取三次，將所得的提取液合并，濃縮后加入300 mL的工業(yè)乙醇，產生沉淀，將沉淀濾除，濃縮上清液。在濃縮的上清液中加入8 g的活性白土離心，離心轉速8000 r/min，離心時間8分鐘，沉淀濾除后，將上清液濃縮至浸膏狀。將浸膏狀提取液通過100 g AB-8大孔吸附樹脂分離，先用300 mL蒸餾水洗脫，然后用300 mL 30%乙醇洗脫，最后采用300 mL 90%乙醇洗脫。將上述30%乙醇洗脫液濃縮后通過D-301陰離子大孔樹脂富集，分別用200 mL水及200 mL 5%的甲酸溶液洗脫。將5%的甲酸洗脫液濃縮后，通過60-100目聚酰胺柱，分別用100 mL水、100 mL 30%乙醇、100 mL 90%乙醇洗脫。最后將上述30%乙醇洗脫液濃縮干燥。干燥產物采用液相色譜進行定量分析，此方法得到的環(huán)磷酸腺苷含量為88%。
[0018]實施例3
準確稱取100.0 g粉碎的大棗加入到2000 mL燒瓶中，用1000 mL蒸餾水提取三次，將所得的提取液合并，濃縮后加入300 mL的工業(yè)乙醇，產生沉淀，將沉淀濾除，濃縮上清液。在濃縮的上清液中加入10 g的活性白土離心，離心轉速10000 r/min，離心時間10分鐘，沉淀濾除后，將上清液濃縮至浸膏狀。將浸膏狀提取液通過100 g AB-8大孔吸附樹脂分離，先用500 mL蒸餾水洗脫，然后用500 mL 40%乙醇洗脫，最后采用500 mL 90%乙醇洗脫。將上述40%乙醇洗脫液濃縮后通過D-315陰離子大孔樹脂富集，分別用300 mL水及300 mL8%的甲酸溶液洗脫。將8%的甲酸洗脫液濃縮后，通過100-120目聚酰胺柱，分別用100 mL水、100 mL 30%乙醇、100 mL 90%乙醇洗脫。最后將上述30%乙醇洗脫液濃縮干燥。干燥產物采用液相色譜進行定量分析，此方法得到的環(huán)磷酸腺苷含量為86%。
[0019]實施例4
準確稱取100.0 g粉碎的大棗加入到2000 mL燒瓶中，用1000 mL蒸餾水提取三次，將所得的提取液合并，濃縮后加入300 mL的工業(yè)乙醇，產生沉淀，將沉淀濾除，濃縮上清液。在濃縮的上清液中加入5 g的活性白土離心，離心轉速6000 r/min，離心時間8分鐘，沉淀濾除后，將上清液濃縮至浸膏狀。將浸膏狀提取液通過100 g AB-8大孔吸附樹脂分離，先用500 mL蒸餾水洗脫，然后用500 mL 50%乙醇洗脫，最后采用500 mL 90%乙醇洗脫。將上述50%乙醇洗脫液濃縮后通過D-315陰離子大孔樹脂富集，分別用300 mL水及300 mL 3%的乙酸溶液洗脫。將3%的乙酸洗脫液濃縮后，通過100-120目聚酰胺柱，分別用100 mL水、100 mL 50%乙醇、100 mL 90%乙醇洗脫。最后將上述50%乙醇洗脫液濃縮干燥。干燥產物采用液相色譜進行定量分析，此方法得到的環(huán)磷酸腺苷含量為83%。
[0020]實施例5
準