泰山紫草萘醌活性單體制備工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明設(shè)及釀類色素分離純化領(lǐng)域，具體為一種泰山紫草蒙釀活性單體制備工 乙。
【背景技術(shù)】
[0002] 據(jù)藥典記載，入藥的紫草為紫草科植物紫草、新疆假紫草或濱紫草的根。其中新疆 紫草和濱紫草為一年生草本植物，稱為軟紫草。泰山所產(chǎn)紫草主要在泰山山脈海拔200-600 米之間的區(qū)域生存，為多年生木本，稱為硬紫草。兩種紫草都可W入藥，所含主要活性成分 主要是具有5, 8-二哲基蒙釀結(jié)構(gòu)的蒙釀色素。泰山紫草為泰山的四大名藥之一，因其獨特 的地理環(huán)境和氣候條件，產(chǎn)量極少，而且，我們購買的商品單體在進(jìn)行藥理活性實驗時，效 果非常不理想。
[0003] 目前，紫草的提取分離方法主要是利用各種有機(jī)試劑，加W物理方法例如微波和 超聲波提取。單體的分離主要采用傳統(tǒng)的硅膠柱層析或者制備液相色譜技術(shù)分離得到。傳 統(tǒng)的分離方法耗時費力，一次實驗等到的單體種類少而量小，由于紫草中的蒙釀色素對光， 對熱都敏感。所W普通的提取分離方法在提取過程中就會對活性成分造成一定的破壞。市 面上商品單體售價達(dá)到每毫克幾百元，不能滿足藥理研究及質(zhì)量控制的需要；而且市面上 購買的軟紫草來源的單體在誘導(dǎo)R0S活性氧導(dǎo)致的DNA損傷，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞調(diào)亡方面效 果并不顯著。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明針對W上不足之處，提供了一種泰山紫草蒙釀活性單體制備工藝，利用本 工藝生產(chǎn)的泰山紫草來源的單體相比軟紫草來源的單體，具備更好的抗癌活性，可W為進(jìn) 一步開發(fā)泰山珍稀紫草資源提供研究資料。
[0005]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是；一種泰山紫草蒙釀活性單體制備工 藝，包含有如下步驟： (1) 泰山紫草原料處理 將泰山紫草放在低溫環(huán)境下進(jìn)行干燥48小時，溫度設(shè)置為35°C，干燥完畢后將泰山 紫草粉碎至60目； (2) 超臨界萃取工藝 將得到的泰山紫草干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃 取劑，在壓力為40MPa、溫度為45°C、萃取劑流速為35Lh-1的條件下進(jìn)行萃取，在壓力 為6MPa、溫度為30°C的條件下進(jìn)行分離，得到深紫色油狀萃取物； (3) 將上一步中得到的深紫色油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，逆流色 譜的溶劑體系是石油離-己酸己醋-己醇-水，比例為巧:5:6:4，v/v)，形成互不相溶的 上下兩相，W上相作為固定相，固定相的保留率為55%，將2. 35g超臨界流體萃取樣溶解于 5ml等量的上相與下相，進(jìn)行進(jìn)樣，分離過程中，流速為2ml/min，轉(zhuǎn)速為85化pm，檢測波長 254nm.根據(jù)逆流色譜圖譜，收集所需組分；得高純度活性單體Ie-哲基異戊酷基紫草素；II己酷紫草素；III異了酷紫草素。
[0006] 本發(fā)明從泰山紫草制備的單體比市面上購買的軟紫草來源的單體在誘導(dǎo)R0S活 性氧導(dǎo)致的DNA損傷，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞調(diào)亡方面具有更好的效果； 本研究選取泰山紫草為原料，利用超臨界萃取和高速逆流色譜為主要工藝設(shè)備，獨創(chuàng) 了一條簡單，高效的制備泰山紫草中=種主要活性單體的工藝流程，并利用制備的單體對 前列腺癌進(jìn)行了一系列的氧化應(yīng)激反應(yīng)； 超臨界二氧化碳流體萃取技術(shù)是在接近于室溫的條件下進(jìn)行，無溶劑殘留，特別適合 蒙釀該類熱敏物質(zhì)的分離； 而高速逆流色譜（化曲speedcounter-州rrentC虹omatography,HSCCC)是一種新 型的分離技術(shù)，該技術(shù)不采用固態(tài)吸附劑，與其它的色譜技術(shù)相比，HSCCC能夠消除固體吸 附劑所導(dǎo)致的樣品不可逆吸附和對樣品的沾染、失活、變性等影響，實現(xiàn)復(fù)雜混合物中各組 分的高純度分離。而且，由于其沒有固體吸附柱，可W提高進(jìn)樣量，能夠達(dá)到一定的制備級 別； 利用本工藝生產(chǎn)的泰山紫草來源的單體相比軟紫草來源的單體，具備更好的抗癌活 性，可W為進(jìn)一步開發(fā)泰山珍稀紫草資源提供研究資料； 可W為泰山紫草的質(zhì)量控制和藥理研究快速、高效的提供高純度，無任何溶劑殘留的 活性單體。
【附圖說明】
[0007] 圖1所示為己酷紫草素抑制PC3和DU145細(xì)胞增殖的時間、劑量關(guān)系圖； 圖2所示為顯微鏡拍攝的己酷紫草素對兩種前列腺癌細(xì)胞的IC50的作用圖； 圖3所示為高速逆流色譜分離泰山紫草蒙釀活性單體時的HSCCC色譜圖； 圖4所示為逆流色譜得到的組分單體I的氨譜； 圖5所示為逆流色譜得到的組分單體I的碳譜； 圖6所示為逆流色譜得到的組分單體II的氨譜； 圖7所示為逆流色譜得到的組分單體II的碳譜； 圖8所示為逆流色譜得到的組分單體III的氨譜； 圖9所示為逆流色譜得到的組分單體III的碳譜。
【具體實施方式】[000引 實施例1 一種泰山紫草蒙釀活性單體制備工藝，其特征在于，包含有如下步驟；（1)泰山紫草原 料處理 將泰山紫草放在低溫環(huán)境下進(jìn)行干燥48小時，溫度設(shè)置為35°C，干燥完畢后將泰山 紫草粉碎至60目； (2)超臨界萃取工藝 將得到的泰山紫草干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃 取劑，在壓力為40MPa、溫度為45°C、萃取劑流速為35Lh-1的條件下進(jìn)行萃取，在壓力 為6MPa、溫度為30°C的條件下進(jìn)行分離，得到深紫色油狀萃取物； (3)將上一步中得到的深紫色油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，逆流色 譜的溶劑體系是石油離-己酸己醋-己醇-水，比例為巧:5:6:4，v/v)，形成互不相溶的 上下兩相，W上相作為固定相，固定相的保留率為55%，將2. 35g超臨界流體萃取樣溶解于 5ml等量的上相與下相，進(jìn)行進(jìn)樣，分離過程中，流速為2ml/min，轉(zhuǎn)速為85化pm，檢測波長 254nm.根據(jù)逆流色譜圖譜巧日圖3所示)，收集所需組分；得高純度活性單體I0-哲基異 戊酷基紫草素；II己酷紫草素；III異了酷紫草素。 實施例2 一種泰山紫草蒙釀活性單體制備工藝，包含有如下步驟； (1) 泰山紫草原料處理 將泰山紫草放在低溫環(huán)境下進(jìn)行干燥48小時，溫度設(shè)置為35°C，干燥完畢后將泰山 紫草粉碎至60目； (2) 超臨界萃取工藝 將得到的泰山紫草干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃 取劑，在壓力為40MPa、溫度為45°C、萃取劑流速為35Lh-1的條件下進(jìn)行萃取，在壓力 為6MPa、溫度為30°C的條件下進(jìn)行分離，得到深紫色油狀萃取物； (3) 將上一步中得到的深紫色油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，逆流色 譜的溶劑體系是石油離-己酸己醋-己醇-7長，比例為巧:5:6. 5:3. 5，v/v)，形成互不相溶 的上下兩相，W上相作為固定相，固定相的保留率為65%，將2. 35g超臨界流體萃取樣溶解 于5ml等量的上相與下相，進(jìn)行進(jìn)樣，分離過程中，流速為2ml/min，轉(zhuǎn)速為80化pm，檢測波 長254nm.根據(jù)逆流色譜圖譜巧日圖3所示)，收集所需組分；得高純度活性單體I0 -哲基 異戊酷基紫草素，41. 6mg;11己酷紫草素，43. 4mg;111異了酷紫草素，49. 3mg。
[000引實施例3 一種泰山紫草蒙釀活性單體制備工藝，其特征在于，包含有如下步驟； (1) 泰山紫草原料處理 將泰山紫草放在低溫環(huán)境下進(jìn)行干燥48小時，溫度設(shè)置為35°C，干燥完畢后將泰山 紫草粉碎至60目； (2) 超臨界萃取工藝 將得到的泰山紫草干燥粉末使用超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃 取劑，在壓力為40MPa、溫度為45°C、萃取劑流速為35Lh-1的條件下進(jìn)行萃取，在壓力 為6MPa、溫度為30°C的條件下進(jìn)行分離，得到深紫色油狀萃取物； (3) 將上一步中得到的深紫色油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進(jìn)行分離純化，逆流色 譜的溶劑體系是石油離-己酸己醋-己醇-水，比例為巧:5:6. 5:3. 5，v/v)，形成互不相溶 的上下兩相，W上相作為固定相，固定相的保留率為60%，將2. 35g超臨界流體萃取樣溶解 于5ml等量的上相與下相，進(jìn)行進(jìn)樣，分離過程中，流速為2ml/min，轉(zhuǎn)速為9(K)巧m，檢測波 長254皿.根據(jù)逆流色譜圖譜巧日圖3所示)，收集所需組分；得高純度活性單體I0 -哲基 異戊酷基紫草素，41. 6mg;11己酷紫草素，43. 4mg;111異了酷紫草素，49. 3mg。
[0010] 本發(fā)明所得=種單體的核磁數(shù)據(jù)如下： 組分1的核磁數(shù)據(jù)： H NMR (400 MHz, CDCl：3)dl2. 59 and 12. 40 (eac