一種減壓超聲輔助提取制備高純度水溶性橄欖苦甙的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種提取制備高純度水溶性橄欖苦甙的方法，具體涉及一種減壓超聲輔助提取制備橄欖苦甙的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]橄欖葉為木樨科木樨欖屬油橄欖樹(Olea europaea L)的葉子，其主要含有裂環(huán)烯醚萜及其苷、黃酮及其苷、雙黃酮及其苷、低分子單寧等成分。橄欖葉提取物中主要成分為環(huán)稀醚釀類苦濕物質(zhì)，其活性最高的為橄欖苦式(Oleuropein)。橄欖苦式分子量為540.5，CAS 號:32619-42-4。
[0003]橄欖苦甙是一種雙分子結(jié)構(gòu)酚類和黃酮類物質(zhì)，熔點87?89°C，易吸濕，暴露在空氣和陽光下會分解。其具有天然的抗氧化、抗腫瘤、延緩衰老、增強心血管功能、治療慢性前列腺炎、增強免疫力、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)、護肝、抗炎等重要的保健功能，同時還有降血脂、降血糖的藥理作用，廣泛應(yīng)用于食品、化妝品和生物制藥等重要領(lǐng)域。
[0004]橄欖苦甙具有強力的抗細菌和抗病毒特性，可用于制造治療病毒、細菌、原生動物類、寄生蟲和吸血蟲等所引起的疾病和治療感冒德爾藥物。橄欖苦甙還可以保護皮膚細胞不受紫外線的傷害，防止紫外線對皮膚膜脂質(zhì)的分解，促進纖維細胞生成膠原蛋白，減少纖維細胞膠原酶的分泌，組織細胞膜的抗聚糖反應(yīng)，從而高度保護纖維細胞，自然抵御因氧化而導(dǎo)致的肌膚破壞，更免受UV紫外線傷害，有效維持肌膚柔嫩與彈性，達到護膚、嫩膚的功效。目前，水溶性高含量90%的橄欖苦甙主要用于護膚品，可以保護皮膚細胞不受紫外線的傷害，有效維持肌膚柔嫩與彈性，達到扶膚、嫩膚的功效。
[0005]目前公開橄欖苦甙的提取分離純化技術(shù)較多，一般采用醇提或堿提法提取橄欖葉中的有效成分，然后進行上柱層析等一系列分離純化步驟，得到高純度的橄欖苦甙，但傳統(tǒng)的工藝為進一步提高產(chǎn)品含量需要用到樹脂吸附或濾膜純化，耗能大，耗材多，耗時長，產(chǎn)品的收率低，工業(yè)污染大；且因其熔點低、易分解等特性，一般的熱提法往往會在其提取過程中發(fā)生分解，最終導(dǎo)致其收率偏低。因此，常用單一的提取方法或多或少存在一定的弊端。
[0006]專利CN 102532217 A公開了一種“從油橄欖葉中提取分離高含量橄欖苦甙”的方法，其方法包括:將橄欖葉切碎、低溫提取、過濾、濃縮或直接層析、低溫濃縮、干燥、最后得到含量大于80%的橄欖苦甙產(chǎn)品。其以一定濃度的乙醇或水為提取溶劑低溫提取，利用樹脂串聯(lián)或二次吸附層析技術(shù)，大大提高產(chǎn)品的含量，但因樹脂需再生或再利用，后期處理較繁瑣增加了工藝的成本，無法擴大化生產(chǎn)。專利CN 102702287 A公開了一種“從橄欖葉中提取純化橄欖苦甙”的方法，其方法包括:用PH值為8-10的堿液對橄欖葉進行常溫浸提，將所得提取液經(jīng)分子篩型大孔吸附樹脂柱層析，然后用體積濃度為50-80%的乙醇洗柱，收集含目標成分的洗脫液，濃縮干燥，得到低含量的橄欖苦甙；再將低含量的橄欖苦甙用極性值為3.8-4.2的極性溶劑溶解，抽濾，濾液濃縮，得到濃縮液；再向濃縮液中加入有機溶劑調(diào)節(jié)極性，低溫條件下放置析出晶體，干燥，得到高純度的橄欖苦甙。此工藝因采用堿液提取，可使得橄欖苦甙水解成羥基酪醇，提取時間長，水解程度高，最終導(dǎo)致產(chǎn)品的收率偏低，僅為4%左右。大孔吸附樹脂柱的應(yīng)用，會增加能耗，提高生產(chǎn)成本。專利CN 101003557 A公開了一種“富含高純度橄欖苦苷的油橄欖葉提取物”的制備方法，其包括以下步驟:先用極性溶劑對油橄欖葉進行提取，再堿性離心沉降，獲得離心清液和沉淀物，接著進行膜耦合分離，得到通過納濾膜的濃縮液，再介質(zhì)吸附，對吸附介質(zhì)進行洗脫得到洗脫液，真空濃縮，再進行真空冷凍干燥或噴霧干燥，獲得橄欖苦苷含量大于50%的富含高純度橄欖苦苷的有橄欖葉提取物。此工藝節(jié)省能源、清潔環(huán)保，步驟卻較繁瑣，需用到膜分離和介質(zhì)吸附技術(shù)，成本較高，不易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。專利CN 102850416 A公開了 “一種油橄欖葉提取物的制備方法及所用裝置”，其步驟為:將油橄欖葉先使用混合溶劑，經(jīng)超聲減壓沸騰提取，真空抽濾，得到澄清液；再進行石油醚萃取除去脂溶性雜質(zhì)并收集下層清液，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至溶劑無醇味，再稀釋，稀釋液通過大孔樹脂純化后，靜置一段時間使橄欖苦苷及黃酮類物質(zhì)吸附充分，再使用適當(dāng)濃度的乙醇-水混合溶劑將橄欖苦苷洗脫并收集目標液，將收集的目標溶液經(jīng)過葡聚糖凝膠的純化，靜置后用乙醇-水溶液洗脫，再收集含有有效成分的洗脫液，將其旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無醇味，最后通過干燥或得的提取物，其中橄欖苦苷含量大85-92%和總黃酮含量達25-35%。此工藝純化步驟較復(fù)雜，且耗材、耗能較大，無法實現(xiàn)良好的經(jīng)濟效益。專利CN 102228514 A公開了“一種從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法”，其包括:在用水或醇水混合溶劑提取之后，將提取液濃縮之后依次經(jīng)過三步分離:大孔樹脂吸附并用醇水溶劑洗脫、脫色樹脂吸附(對橄欖提取液中的色素有良好吸附作用的脫色樹脂(對橄欖苦苷有良好吸附作用的大孔吸附樹脂，洗脫除去其他雜質(zhì))，吸附除去色素)和有機溶劑萃取，逐步對提取液當(dāng)中的橄欖苦苷進行分離純化，最后獲得高含量的橄欖苦苷提取物，橄欖苦苷的含量大于40%。此工藝簡便，易于操作，但其產(chǎn)品含量較低，無法直接添加到藥品或化妝品當(dāng)中，且需要進一步的分離純化。
[0007]本發(fā)明是針對上述生產(chǎn)工藝的缺陷，著重解決了橄欖苦甙提取率偏低且易分解的難題，再結(jié)合簡易且有效地分離純化工藝，開發(fā)了快速高效提取制備含量高、水溶性好的橄欖苦甙新工藝，其生產(chǎn)周期短，提取效率高，分離純化工藝簡便，可實現(xiàn)綠色、環(huán)保，降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品的得率和質(zhì)量，易于工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明首次提出了將超聲波的空化作用和次級效應(yīng)與減壓技術(shù)相結(jié)合，采用復(fù)配提取液，通過簡易高效的分離純化工藝，制備高純度、水溶性好的橄欖苦甙純品。該技術(shù)可有效防止橄欖苦甙的分解，且提高產(chǎn)品收率的同時，亦能提高其純度，具有操作簡單、高效環(huán)保、成本低廉、易于擴大化生產(chǎn)等特點。
[0009]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0010]I)原料預(yù)處理:將橄欖葉洗凈、曬干、粉碎，過80目篩，得到橄欖葉粉末，備用；
[0011]2)減壓超聲提取:將橄欖葉粉末與復(fù)配提取液按質(zhì)量體積比Ig: 10-15mL浸泡12-24小時，在真空度0.08-0.1MPa，功率200-240W，溫度35-40°C的條件下，減壓超聲提取30-50分鐘，提取兩次；抽濾得到濾液。
[0012]3)萃取-反萃取:將步驟2)所得到的提取液減壓濃縮至波美度在8-10之間，用乙酸乙酯萃取3至4次，合并萃取液，減壓濃縮至無乙酸乙酯，再經(jīng)乙醚進行反萃取，進一步除雜；將反萃取之后的浸膏，減壓烘干，得橄欖苦甙粗品；
[0013]4)脫色:將步驟3)所得到的橄欖苦甙粗品用一定濃度的醇溶液超聲溶解，抽濾，得到澄清溶液，再加入適量活性炭進行加熱回流脫色處理；
[0014]5)結(jié)晶-重結(jié)晶:將步驟4)所得到的脫色后溶液進行減壓濃縮至波美度在8-10之間，用一定濃度的醇進行溶解，減壓濃縮醇溶液至無醇味，烘干，再用乙酸乙酯進行熱溶，趁熱過濾，低溫下靜置，待晶體析出后，過濾收集晶體，再將晶體用乙酸乙酯熱溶，按上述步驟進行重結(jié)晶，可制備水溶性好、含量高的橄欖苦甙純品。
[0015]具體地，步驟2)中所述復(fù)配提取液為95%乙醇與95%甲醇按體積比1:1的混合溶液。
[0016]具體地，步驟2)中所述抽濾的條件為:真空度0.07-0.09MPa。
[0017]具體地，步驟3)中所述減壓濃縮的條件為:真空度0.07-0.09MPa，溫度為40-50。。。
[0018]具體地，步驟3)中所述濃縮液與乙酸乙酯的總體積比為1: 15-20。
[0019]具體地，步驟3)中所述濃縮浸膏與乙醚的質(zhì)量體積比為1: 5-10。
[0020]具體地，步驟3)中所述減壓烘干的條件為:真空度0.09-0.1MPa，溫度為35-40°C。
[0021]具體地，步驟3)中所述一定濃度的醇溶液為:10-30%的乙醇或甲醇溶液。
[0022]具體地，步驟4)中所述加熱回流脫色處理的條件為:活性炭的添加了量為其重量的 2-3%。，溫度為 45-50°C。
[0023]具體地，步驟5)中所述減壓濃縮的條件為:真空度0.09-0.1MPa，溫度為45-50°C。
[0024]具體地，步驟3)中所述一定濃度的醇溶液為:95%的乙醇或甲醇溶液。
[0025]具體地，步驟5)中所述乙酸乙酯熱溶的條件為:橄欖苦甙粗品與乙酸乙酯的質(zhì)量體積比為Ig: 8-10mL，熱溶溫度為45-50°C。
[0026]具體地，步驟5)中所述低溫靜置的條件為:低溫溫度為O至5°C，靜置的時間為12-24小時。
具體實施方法
[0027]【實施例1】
[0028]取橄欖葉1kg，洗凈、晾干，粉碎過80目篩，加復(fù)配提取液(95%乙醇與95%甲醇按體積比1: 1)101^浸泡1211。使用減壓超聲提取設(shè)備，在真空度0.08MPa，功率200W，溫度35°C的條件下，減壓超聲提取30分鐘，提取兩次，并在真空度0.07MPa下抽濾合并兩次濾液。在真空度0.07MPa，溫度為40°C的條件下減壓濃縮濾液至波美度為8。取3L的乙酸乙酯分三次萃取濃縮液，收集乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮至無乙酸乙酯，再用0.3L的乙醚分三次進行反萃取除雜，回收乙醚萃取相，萃余相進行減壓烘干，得橄欖苦甙粗品。將烘干后的粗品，用0.15L 10%的乙醇溶液超聲溶解，抽濾，得到澄清溶液，再加入0.Sg活性炭進行加熱回流脫色處理。脫色后溶液進行減壓濃縮至波美度為8，用0.1L 95%乙醇進行溶解，減壓濃縮醇溶液至無醇味，烘干，再用0.1L乙酸乙酯進行45°C熱溶，趁熱