具有降膽固醇作用的鼠李糖乳桿菌及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】： 本發(fā)明涉及一種通過(guò)優(yōu)選所獲得一種鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus)SCF 20120718,可用于發(fā)酵制備具有降低膽固醇作用的豆?jié){和相關(guān)保健產(chǎn)品及藥品。
【背景技術(shù)】： 人體內(nèi)膽固醇通常是游離和膽固醇酯兩種形式存在于細(xì)胞和組織中，在腦及神經(jīng)組 織、腎、皮膚、肝臟和膽汁中分布較高，是體內(nèi)膜結(jié)構(gòu)中的重要組分，參與形成生物膜，在血 漿脂蛋白合成、脂類代謝、神經(jīng)興奮的傳導(dǎo)過(guò)程中也起重要作用，還是膽汁酸，維生素D以 及多種激素的合成原料，因此，膽固醇是維持機(jī)體生理機(jī)能所不可缺少的重要物質(zhì)。但是膽 固醇在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮其重要作用的同時(shí)，如在機(jī)體尤其血液中過(guò)高也會(huì)產(chǎn)生一定的危害，影 響到新陳代謝，誘發(fā)癌癥；還可以導(dǎo)致心血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，特別是低密度脂蛋白過(guò)高 會(huì)影響到鈣離子調(diào)控異常，是心血管功能失常，導(dǎo)致心腦血管受損和疾病發(fā)生。還有可能誘 發(fā)老年癡呆癥的發(fā)生。
[0003]正常情況下機(jī)體膽固醇三分之二主要由肝臟、小腸壁等器官內(nèi)源合成，其余由飲 食中含有膽固醇的食物主要有家禽蛋類、動(dòng)物內(nèi)臟及肌肉組織如豬肝、肥肉外源獲取，如果 人們長(zhǎng)期飲食結(jié)構(gòu)不合理，攝入高膽固醇食物過(guò)高，體內(nèi)膽固醇的合成與代謝負(fù)荷過(guò)重，血 液中膽固醇升高，引起包括動(dòng)脈血管壁膽固醇的沉淀，誘發(fā)動(dòng)脈硬化等心血管等疾病的發(fā) 生，嚴(yán)重威脅人類健康。

【發(fā)明內(nèi)容】
： 本發(fā)明的目的是提供一株發(fā)酵具有降低膽固醇作用豆?jié){的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)SCF20120718,提供進(jìn)一步研宄開發(fā)預(yù)防和治療由于膽固醇過(guò) 高所引起的心腦血管疾病的益生菌功能性保健食品和藥品的原料。
[0005] 上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 一種來(lái)源于發(fā)酵豆衆(zhòng)具有降低膽固醇作用豆衆(zhòng)的鼠李糖乳桿菌（Lactobaci 1 lus rhamnosus)SCF 20120718,由采集于自然發(fā)酵豆制品中，經(jīng)分離、純化、物理誘變、優(yōu)選獲得 的高活性菌株，菌學(xué)分類名稱Lactobacillus rhamnosus，菌學(xué)特性：置于37°C恒溫培養(yǎng) 箱的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)稀釋濃度為10-5時(shí)菌生長(zhǎng)較良好，菌落分散。在相 同條件下菌落生長(zhǎng)有大有小，菌落呈圓形，乳白色，邊緣整齊，表面光滑，其中較小的菌落微 黃色，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)為： CGMCC No. 7085〇
[0006] 所述的來(lái)源于發(fā)酵豆制品具有降低膽固醇作用豆?jié){的鼠李糖乳桿菌 (Lactobacillusrhamnosus)SCF20120718,所述的高活性菌株的菌學(xué)特性為：革蘭氏染色 結(jié)果呈陽(yáng)性；芽孢染色菌體呈綠色；接觸酶試驗(yàn)中沒(méi)有氣泡產(chǎn)生；溶鈣圈法培養(yǎng)能觀察到 菌落周圍出現(xiàn)透明圈，具備明顯乳酸菌的特征。
[0007] 所述的來(lái)源于發(fā)酵豆制品具有降低膽固醇作用豆?jié){的鼠李糖乳桿菌 (Lactobacillus rhamnosus)SCF20120718,菌株經(jīng) 16S rDNA 部分序列在線進(jìn)行 BLAST 比 對(duì)，結(jié)果具有Lactobacillus菌屬rhamnosus菌種的主要遺傳特性； 16S rDNA測(cè)序部分序列如下所示： 具有降膽固醇作用的鼠李糖乳桿菌及用途
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種來(lái)源于發(fā)酵豆?jié){具有降膽固醇作用的鼠李糖乳桿菌，其特征是：由采集于 自然發(fā)酵豆制品中，經(jīng)分離、純化、物理誘變、優(yōu)選獲得的高活性菌株，菌學(xué)分類名稱 LactobacillusrhamnosusSCF20120718,菌學(xué)特性；置于37°C恒溫培養(yǎng)箱的培養(yǎng)基中進(jìn) 行培養(yǎng)，通過(guò)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)稀釋濃度為1(T5時(shí)菌生長(zhǎng)較良好，菌落分散。在相同條件下菌落生 長(zhǎng)有大有小，菌落呈圓形，乳白色，邊緣整齊，表面光滑，其中較小的菌落微黃色，保藏號(hào)為： CGMCCNo. 7085〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的來(lái)源于發(fā)酵豆?jié){具有降膽固醇作用的鼠李糖乳桿菌，其特征 是；所述的高活性菌株的菌學(xué)特性為；革蘭氏染色結(jié)果呈陽(yáng)性；芽抱染色菌體呈綠色；接觸 酶試驗(yàn)中沒(méi)有氣泡產(chǎn)生；溶巧圈法培養(yǎng)能觀察到菌落周圍出現(xiàn)透明圈，具備明顯乳酸菌的 特征。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的來(lái)源于發(fā)酵豆?jié){具有降膽固醇作用的鼠李糖乳桿菌，其 特征是；所述的菌株經(jīng)16SrDNA部分序列在線進(jìn)行BLAST比對(duì)，結(jié)果具有Lactobacillus 菌屬rhamnosus菌種的主要遺傳特性； 16SrDNA測(cè)序部分序列如下所示： LactobacillusrhamnosusSCF20120718 <110〉黑龍江大學(xué) <120〉具有降膽固醇作用的鼠李糖乳桿菌及用途 <160>1 <210>LactobacillusrhamnosusSCF20120718 <211>1561 <212>RNA <213〉鼠李糖乳桿菌 <223〉n=a或g或C或t <400〉核巧酸序列和/或氨基酸序列

4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的來(lái)源于來(lái)源于發(fā)酵豆?jié){具有降膽固醇作用的鼠李糖 乳桿菌，其特征是；所述的培養(yǎng)基處方為：
所述的比例為重量份數(shù)比。
5. -種利用權(quán)利要求1、2、3所述的鼠李糖乳桿菌制作的豆?jié){，其特征是；將權(quán)利要求 1或2或3或4的菌株接種于經(jīng)大豆浸泡，研磨、勻漿、煮沸，過(guò)濾、高溫滅菌制得的豆?jié){中， 37°C-42°C發(fā)酵24小時(shí)W上，制得酸豆?jié){。
6. -種權(quán)利要求5所述的豆?jié){的制備方法，其特征是： 稱取lOOg大豆清洗后放于250血自來(lái)水中于室溫下浸泡12h;經(jīng)去皮后，清水洗凈， 將浸泡好的大豆W重量份數(shù)1 : 8的豆水比用組織搗碎機(jī)磨漿，加熱至沸騰10分鐘后用， =層紗布過(guò)濾后。倒入=角瓶中于121°C滅菌15min，紗布封口冷卻后，無(wú)菌用接種環(huán)挑去 MRS試管斜面培養(yǎng)的李糖乳桿菌SCF20120718菌落五環(huán)，振搖均勻后，放置在37°C培養(yǎng)12 小時(shí)，冷卻至室溫，后放入冰箱4°C冷存，備用于后續(xù)發(fā)酵； 同上稱取2000g大豆清洗后放于50000mL自來(lái)水中于室溫下浸泡12h;經(jīng)去皮后，清水 洗凈，將浸泡好的大豆W重量份數(shù)1 : 8的豆水比用豆?jié){機(jī)磨漿，加熱至沸騰后，離屯、過(guò)濾 出去豆渣。經(jīng)己±滅菌器135°C滅菌10秒快速滅菌，置于清洗滅菌好的發(fā)酵罐中，按5% 體積比例加入上述備用的發(fā)酵豆?jié){，W30r/min，37-40°C的發(fā)酵2小時(shí)，而后分裝、密封，室 溫發(fā)酵12小時(shí)后，放入冰箱4°C冷存； 剩余部分置于清洗滅菌好的燒杯中，紗布封口后室溫發(fā)酵24個(gè)小時(shí)W上，當(dāng)抑達(dá)到 4. 9W下，酸豆?jié){呈凝固狀，攬拌器將酸豆?jié){都攬成可流動(dòng)性狀，平鋪2cm厚度的庭巧盤 中，-40°C到30°C冷凍干燥，成松脆黃色固體狀，粉碎成100目的粉末，經(jīng)凱氏定氮法測(cè)定蛋 白含量45. 1%。密封低溫干燥保存?zhèn)溆谩?br>7. -種將權(quán)利要求1或2或3或4所述的來(lái)源于發(fā)酵豆?jié){具有降膽固醇作用的鼠李糖 乳桿菌，用于制作包括見底包括膽固醇在內(nèi)的血脂異常升高，用于開發(fā)制作預(yù)防和治療屯、 血管疾病的保健食品和藥品的用途。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種具有降膽固醇作用的鼠李糖乳桿菌及用途。如果人們攝入高膽固醇食物過(guò)高，體內(nèi)膽固醇的合成與代謝負(fù)荷過(guò)重，血液中膽固醇升高，引起包括動(dòng)脈血管壁膽固醇的沉淀，誘發(fā)動(dòng)脈硬化等心血管等疾病的發(fā)生，本發(fā)明由采集于自然發(fā)酵豆制品中，經(jīng)分離、純化、物理誘變、優(yōu)選獲得的高活性菌株，菌學(xué)分類名稱：鼠李糖乳桿菌Lactobacillus rhamnosus SCF 20120718。菌學(xué)特性：置于37℃恒溫培養(yǎng)箱的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)稀釋濃度為10-5時(shí)菌生長(zhǎng)較良好，菌落分散。在相同條件下菌落生長(zhǎng)有大有小，菌落呈圓形，乳白色，邊緣整齊，表面光滑，其中較小的菌落微黃色，保藏號(hào)為：CGMCC No.7085。本發(fā)明提供預(yù)防和治療心腦血管疾病的益生菌功能性保健品原料。CGMCC No.708520130104
【IPC分類】A61P3-06, A23C11-10, A61K35-747, C12R1-225, C12N1-20
【公開號(hào)】CN104789488
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510088464
【發(fā)明人】鄒積宏, 劉紅梅, 孫彩鳳, 袁杰利, 金濤, 姜岸, 佟立今, 劉長(zhǎng)海
【申請(qǐng)人】黑龍江大學(xué)
【公開日】2015年7月22日
【申請(qǐng)日】2015年2月26日