一種具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌及其用圖
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種鏈霉菌及其用途。
【背景技術】
[0002]大豆是我國傳統(tǒng)的、重要的經濟作物，具有很高的經濟價值。黑龍江省是我國大豆主產區(qū)，近年來播種面積不斷擴大，居全國首位。隨著大豆連作面積的不斷增加，大豆根部病害逐年加重，其中大豆胞囊線蟲(Heterodera glycines)病又稱大豆黃萎病，是危害大豆的主要土傳病害，染病植株形象的稱為火龍秧子，是制約大豆產量提高的重要病害之一。因其病原大豆胞囊線蟲形成具有防護外殼的胞囊存在于土壤中，生活史中的幾個齡期專性寄生于大豆根部，極難防治。目前通過種植抗線品種、合理的耕作方式(輪作)、物理方法(灌溉、土壤沙化改良等措施)等方法應對大豆胞囊線蟲，均取得一定的防治效果。但在大豆主產區(qū)因受地理和實際條件限制，大豆耕種面積又大，難以實行合理輪作。雖然，抗線育種是一項經濟有效環(huán)保的措施，但是其豐產性不佳、地域限制明顯等問題嚴重制約了抗線品種的推廣和大面積種植。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌，從而利用微生物防治大豆胞囊線蟲，具有防治成本低、環(huán)保、對人畜和環(huán)境無危害等優(yōu)點，而且可以利用原有的豐產大豆品種連作，保證了大豆的高產、穩(wěn)產。
[0004]本發(fā)明具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌，其為細黃鏈霉菌(Streptomycesmicrof lavus) HKS1408，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC N0.10714。
[0005]上述具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌在防治大豆胞囊線蟲中的用途。
[0006]本發(fā)明細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408為單細胞原核生物，有發(fā)達的分枝菌絲；菌絲纖細，寬度近于桿狀細菌，約0.5?I微米。在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408菌落呈圓形，顏色為乳白色，表面光滑，不透明，菌落中部凹陷，四周凸起。在液體培養(yǎng)基內靜置培養(yǎng)細黃鏈霉菌(Streptomycesmicrof lavus) HKS1408，在容器內壁液面處形成斑狀或膜狀培養(yǎng)物，或沉降于底部而不使培養(yǎng)基渾濁；振蕩培養(yǎng)條件下則形成由短的菌絲體所構成的球狀菌絲團。
[0007]本發(fā)明細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408的氧化酶反應呈陽性，V-P反應呈陽性，淀粉水解實驗結果呈陽性，酪素反應結果呈陽性，馬尿酸反應結果呈陰性，丙酸鹽反應結果呈陰性，檸檬酸鹽反應呈陽性，葡萄糖反應呈陽性，阿拉伯糖反應呈陽性，木糖反應呈陽性，甘露糖反應呈陽性。
[0008]本發(fā)明細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408可利用果膠為碳源進行生長，可利用豆柏粉為氮源生長。
[0009]本發(fā)明細黃鏈霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408的最適生長溫度為30°C?35 °C，最適合生長環(huán)境pH值為7?7.5。
[0010]本發(fā)明細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408在實驗室條件下對大豆胞囊線蟲成幼蟲和卵都有明顯的殺滅效果；尤其對幼蟲殺滅效果明顯；大田實驗中對大豆胞囊線蟲的幼蟲和成蟲滅殺效果同樣顯著。
[0011]本實施方式細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408，屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心進行保藏，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，保藏日期為2015年4月13日，保藏編號為CGMCCN0.10714。
【具體實施方式】
[0012]本發(fā)明技術方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的任意組合。
[0013]【具體實施方式】一:本實施方式具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌，其為細黃鏈霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC N0.10714。
[0014]本實施方式細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408從香坊農場東北農大大?試驗田尚獲得。
[0015]本實施方式細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408經菌落形態(tài)和16SrDNA序列綜合分析為細黃鏈霉菌(Streptomyces microflavus)。
[0016]【具體實施方式】二:本實施方式具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌在防治大豆胞囊線蟲中的用途。
[0017]將細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408接種到PSA液體培養(yǎng)基中在溫度為30°C?35°C，pH值為7?7.5的環(huán)境中培養(yǎng)72h。然后，按800?1000倍的比例稀釋后直接噴灑于大豆作物即可。
[0018]實施例1
[0019]一、在噴灑過本發(fā)明細黃鏈霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408的大豆重茬試驗田中取土樣加入水攪拌均勻，使土樣與水充分接觸，靜置2?3min后，把懸浮液倒入嵌在60目網篩中的40目網篩內，如此重復操作3次。傾去上層40目網篩上的殘余物，用細水流把60目網篩上的沉積物中的泥沙沖去，剩余物用緩慢水流收集到干凈的燒杯中。燒杯中的水懸物經緩慢多次淘洗，棄去下層沉淀的泥沙，把上層樣品倒入墊有雙層擦鏡紙的漏斗內，然后把雙層擦鏡紙和過濾后的剩余物一并移入洗凈的玻璃培養(yǎng)皿中，在解剖鏡下用鑷子從中挑取新鮮飽滿的棕色胞囊，放入4°C冰箱備用。經鑒定為大豆胞囊線蟲胞囊。
[0020]二、在培養(yǎng)皿底部墊上一張滅過菌的圓形定性濾紙，在濾紙上放置步驟一獲得的大豆胞囊線蟲胞囊，蓋上皿蓋后做好標記，25°C下保濕培養(yǎng)5d。5d后挑出表面長有菌的胞囊，放在馬鈴薯蔗糖(PSA)固體培養(yǎng)基上，25°C培養(yǎng)。待長出菌落后，用接種環(huán)切取菌落邊緣的菌絲體轉至PSA培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)3d。3d后把PSA培養(yǎng)基上長出的菌轉入PSA斜面上進行保存，認定為生防菌。
[0021]三、取大豆胞囊線蟲胞囊，用濃度為0.5%的NaClO表面消毒。將生防菌轉至PSA培養(yǎng)基上，待菌落直徑長至培養(yǎng)皿1/2?3/4時，將消毒后的大豆胞囊線蟲胞囊放入PSA培養(yǎng)基上的菌落邊緣，每皿10個胞囊；三次重復。培養(yǎng)1d后，將接種的大豆胞囊線蟲胞囊輕輕挑出(注意不要弄破胞囊)，0.5% NaClO表面消毒5min，每個胞囊放于一個滅菌的濾紙片上，保濕培養(yǎng)5d。5d后觀察濾紙片上菌落生長情況，經鑒定該菌為本發(fā)明細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408，經統(tǒng)計細黃鏈霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408對大豆胞囊線蟲胞囊的寄生率為90%。
[0022]實施例2
[0023]將細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408的PSA液體發(fā)酵液稀釋到孢子數1000萬/mL，取25mL放入25mL含0.4mmol/L的2冗12的35%蔗糖溶液中混合。挑選9頭大豆胞囊線蟲二齡幼蟲活體放入混合液中，5次重復，于生化培養(yǎng)箱中32°C培養(yǎng)7?12d，觀察細黃鏈霉菌(Streptomyces microflavus) HKS1408對線蟲的侵染狀況，并記錄結果，根據公式(侵染率) = (Y-X)/Y，其中Y為侵染前二齡幼蟲平均數，X為存活的二齡幼蟲平均數)計算侵染率為82%。
[0024]實施例3
[0025]將噴灑過本發(fā)明細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408的大豆作物的莖和葉粉碎后喂食牛和雞3?6個月，飼喂動物未出現不良反應，生理解刨后臟器沒有病變。
【主權項】
1.一種具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌，其為細黃鏈霉菌(Streptomycesmicrof lavus) HKS1408，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC N0.10714。
2.如權利要求1所述的具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌在防治大豆胞囊線蟲中的用途。
【專利摘要】一種具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌及其用途，它涉及一種鏈霉菌及其用途。本發(fā)明提供一種具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌，從而利用微生物防治大豆胞囊線蟲，具有防治成本低、環(huán)保、對人畜和環(huán)境無危害等優(yōu)點，而且可以利用原有的豐產大豆品種連作，保證了大豆的高產、穩(wěn)產。該菌為細黃鏈霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.10714。具有毒殺大豆胞囊線蟲活性的鏈霉菌在防治大豆胞囊線蟲中的用途。CGMCC No.1071420150413
【IPC分類】C12N1-20, A01N63-02, C12R1-465, A01P5-00
【公開號】CN104830742
【申請?zhí)枴緾N201510288539
【發(fā)明人】遲君道, 樊川, 安琦, 王惠民, 楊旭升, 程國利
【申請人】黑龍江省科學院微生物研究所
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年5月29日