醋酸格拉替雷的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體而言，涉及一種醋酸格拉替雷的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]自身免疫類疾病(autoimmune diseases)是指,生物機體的免疫系統(tǒng)將一些機體本身的組織當(dāng)作“外來物”進行攻擊的現(xiàn)象。通常這種疾病可以通過阻礙生物機體T細胞和B細胞對機體自身組織的反應(yīng)，得到緩解。這些早期的免疫反應(yīng)是通過抗原結(jié)合到MHC分子上促進的，并通過T細胞表達出來。自身免疫類疾病就是機體本身的組織和蛋白質(zhì)被當(dāng)作“自抗原”，被機體免疫系統(tǒng)攻擊。例如:多發(fā)性硬化癥，就是免疫系統(tǒng)對隔離和保護神經(jīng)的髓鞘進行攻擊而導(dǎo)致的疾病，這種疾病發(fā)展到失去髓鞘，就會帶來神經(jīng)元和運動神經(jīng)功能喪失；其他例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、自免疫性溶血性貧血等，也屬于此類疾病。
[0003]很多藥物開發(fā)出來用于治療自身免疫類疾病，包括多發(fā)性硬化癥。醋酸格拉替雷(又叫共聚物-1、GA)是由丙氨酸、谷氨酸、賴氨酸和酪氨酸通過肽鍵聚合產(chǎn)生的不同分子量聚合物的混合物。它的四種氨基酸摩爾比大約是0.392?0.462:0.129?0.153:0.300?0.374:0.086?0.100 (Ala:Glu:Lys:Tyr)，混合物中的共聚物的平均分子量大約5000?9000道爾頓。醋酸格拉替雷被用于治療患有間歇復(fù)發(fā)型多發(fā)性硬化的患者，用于減少復(fù)發(fā)其的頻率。
[0004]現(xiàn)有的多篇專利中(US5800808、CN1310673C等)詳細描述了的制備方法包括，使被保護的聚合物與在乙酸中的33%氫溴酸反應(yīng)。這種去保護反應(yīng)將Y芐基保護基從谷氨酸殘基的5-羧酸酯上去除，并且將所述聚合物裂解為更小的聚合物，以形成三氟乙?；嚯?，獲得介于5000?9000道爾頓的正確平均分子量的GA所需要的時間取決于反應(yīng)溫度和被保護的醋酸格拉默的分子量模式，去保護發(fā)生在介于20°C和28°C之間的溫度。
[0005]在CN101166754B中，進一步描述了在合成被保護的聚合物后，用包含少于0.5%的游離溴和少于100ppm金屬離子雜質(zhì)的氫溴酸的乙酸溶液對所述被保護的多肽進行去保護，從而制備醋酸格拉替雷的方法步驟。
[0006]但是，發(fā)明人在實際的聚合物合成方法優(yōu)化工作中，發(fā)現(xiàn)該方法對于氫溴酸的乙酸溶液的雜質(zhì)含量及濃度并非十分敏感，并且，產(chǎn)品的制備結(jié)果并不十分理想，所獲得的醋酸格拉替雷樣品純度達不到藥用高純度標(biāo)準(zhǔn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本申請涉及一種制備高純度醋酸格拉替雷的方法，所述的方法包括如下步驟:
[0008](I)在1，4_ 二氧六環(huán)溶劑中溶解L-丙氨酸NCA、L_酪氨酸NCA、L_谷氨酸-Y-芐酯NCA、L- ε -三氟乙酰基-賴氨酸NCA、攪拌至體系澄清；
[0009](2)加入二乙胺催化，20?25°C下攪拌，隨后將反應(yīng)液緩慢倒入水中，收集產(chǎn)生的白色全保護格拉替雷固體并干燥處理；
[0010](3)將步驟(2)所得的全保護格拉替雷加入氫溴酸乙酸溶液中，23.0?25.(TC下攪拌，反應(yīng)完成后將反應(yīng)液倒入純化水中淬滅，攪拌5分鐘，抽濾得到黃色粉狀三氟乙?；窭胬坠腆w，重復(fù)3?5遍用水溶解并抽濾干燥的步驟后，鼓風(fēng)干燥去除三氟乙?；窭胬坠腆w中的水分；；
[0011](4)將步驟(3)所得的三氟乙酰基格拉替雷用IM哌啶水溶液于室溫下溶解并攪拌，得到的溶液經(jīng)透析后，加冰乙酸調(diào)節(jié)PH為5.5?7.0，凍干即得醋酸格拉替雷白色粉末；
[0012]優(yōu)選的，所述的氫溴酸乙酸溶液中的溴以單質(zhì)形態(tài)存在的比例范圍是0.1%?1%。
[0013]優(yōu)選的，步驟(3)所述的氫溴酸乙酸溶液中，還含有0.5?2% (wt% )的苯酚，最優(yōu)選的，所述的苯酚在氫溴酸乙酸溶液中的含量為1% (wt)。
[0014]步驟(I)中所述的1，4- 二氧六環(huán)溶劑體積為200mL，L-丙氨酸，L-酪氨酸，L-谷氨酸-Y -芐酯，L- ε -三氟乙?；?賴氨酸的質(zhì)量比為2.59:1.036:1.974:4.693 ;攪拌時間優(yōu)選為30min。
[0015]步驟(2)中所述的二乙胺與1，4- 二氧六環(huán)溶劑的比例為1:6(v/v)，倒入的水的體積與1，4- 二氧六環(huán)溶劑的比例為2:1 (v/v)，所述的全保護格拉替雷干燥處理方法優(yōu)選為抽濾后真空干燥處理。
[0016]步驟(3)中所述的氫溴酸乙酸溶液與全保護格拉替雷的比例為10:0.74 (w/w)，反應(yīng)時間為19h，淬滅用純水和全保護格拉替雷的用量比例為100:3.7 (w/w)。
[0017]步驟(4)中所述的三氟乙?；窭胬缀虸M哌啶水溶液的用量比例為1:54(w/V)，所述的攪拌時間優(yōu)選為24h，所述的透析的濾膜為2KDa的濾膜。
[0018]本發(fā)明所述的方法制得的醋酸格拉替雷中溴代酪氨酸含量為0.1%?10% ;若步驟(3)中使用含苯酚的氫溴酸乙酸溶液，則所獲得的醋酸格拉替雷中溴代酪氨酸含量為0.1%?0.5%。
[0019]說明書附圖
[0020]圖1、實施例2制備獲得的醋酸格拉替雷樣品色譜圖
[0021]圖2、實施例3制備獲得的醋酸格拉替雷樣品色譜圖
[0022]圖3、實施例4制備獲得的醋酸格拉替雷樣品色譜圖
[0023]圖4、實施例5制備獲得的醋酸格拉替雷樣品色譜圖
[0024]圖5、實施例6制備獲得的醋酸格拉替雷樣品色譜圖
【具體實施方式】
[0025]實施例1:全保護格拉替雷的制備，
[0026]三口瓶中加入經(jīng)金屬鈉處理過的1，4- 二氧六環(huán)200mL,室溫下加入L-丙氨酸NCA2.590克，L-酪氨酸NCA1.036克，L-谷氨酸-Y -芐酯NCA1.974克，L- ε -三氟乙?；?賴氨酸NCA4.693克。攪拌30分鐘，至體系澄清，加入二乙胺33毫克。20?25攝氏度下機械攪拌24小時。將反應(yīng)液緩慢倒入400mL水中，產(chǎn)生大量白色固體，抽濾后，真空干燥得7.424克，收率92.8%o
[0027]實施例2:醋酸格拉替雷的制備(I)
[0028]在反應(yīng)瓶中加入氫溴酸乙酸溶液I (溴單質(zhì)含量0.1% )10.0克，攪拌30分鐘。加入全保護格拉替雷0.74克，攪拌，控制反應(yīng)溫度23.0?25.(TC，反應(yīng)19小時。將反應(yīng)體系倒入20ml純化水中淬滅，攪拌5分鐘，抽濾，得到黃色粉狀固體。將固體加入至容器中,力口水20ml攪拌10分鐘，然后抽濾；反復(fù)上述操作四次。固體送鼓風(fēng)干燥(45°C ) 12小時。
[0029]三口瓶中加入實施例二中所得三氟乙?；窭胬?.50克，IM哌啶水溶液27mL，室溫下攪拌24小時。用2KDa的濾膜進行透析，得到的溶液加冰乙酸至pH為5.5?7.0，攪拌I小時。凍干得白色粉末。檢測溴代酪氨酸含量為:6.51%
[0030]實施例3:醋酸格拉替雷的制備(2)
[0031]在反應(yīng)瓶中加入氫溴酸乙酸溶液II (溴單質(zhì)含量0.3% ) 10.0克，攪拌30分鐘。加入全保護格拉替雷0.74克，攪拌，控制反應(yīng)溫度23.0?25.(TC，反應(yīng)19小時。將反應(yīng)體系倒入20ml純化水中淬滅，攪拌5分鐘，抽濾，得到黃色粉狀固體。將固體加入至容器中，加水20ml攪拌10分鐘，然后抽濾；反復(fù)上述操作四次。固體送鼓風(fēng)干燥(45°C ) 12小時。
[0032]三口瓶中加入實施例四中所得三氟乙酰基格拉替雷0.50克，IM哌啶水溶液27mL，室溫下攪拌24小時。用2KDa的濾膜進行透析，得到的溶液加冰乙酸至pH為5.5?7.0，攪拌I小時。凍干得白色粉末。檢測溴代酪氨酸含量為:9.30%