一種微生物法制備海洋魚蛋白降血壓肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品功能性成分的制作方法，具體是一種微生物法制備海洋魚蛋白降 血壓肽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 海洋魚資源豐富，魚蛋白含量高，是開發(fā)利用的良好資源。高血壓是目前困擾全球 的一個難題，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球大約有超過5億人患此疾病。高血壓發(fā)病率逐年升 高，常導(dǎo)致中風(fēng)、猝死等重大疾病或死亡的發(fā)生。食源性活性肽是預(yù)防、緩解和治療高血壓 的一個有效手段。海洋魚蛋白經(jīng)過微生物發(fā)酵，可制備出具有降血壓功能的活性肽，可以用 于保健食品的開發(fā)利用，符合市場需求。
[0003] 目前魚蛋白制備降血壓肽的方法主要有酶法、復(fù)合酶法等，本發(fā)明則采用微生物 發(fā)酵法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是公開微生物法制備海洋魚蛋白降血壓肽的方法。
[0005] 本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)。
[0006] 一種微生物法制備海洋魚蛋白降血壓肽的方法，其包括以下步驟： 前處理：海魚去皮、骨、刺、雜質(zhì)后，將魚肉打成勻漿； 膠原蛋白提取：在魚肉勻漿中加入與魚肉質(zhì)量比為1:10或1:15的純凈水，再加入 2000U/g魚肉-3000U/g魚肉的胃蛋白酶處理魚肉提取膠原蛋白，酶解條件是：ρΗ1. 5-2. 5、 35°C -40°C、酶解時間 3h-6h ; 離心分離：酶解后的魚肉糜混合液通過離心分離，取上清液備用，沉淀作為魚糜制品 或通過干燥加工成為魚粉；所述離心的轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/min -3000轉(zhuǎn)/min，離心時間10 min -15min ； 發(fā)酵液調(diào)節(jié)：在離心分離得到的上清液中加入葡萄糖、氯化鈣、硫酸鎂和磷酸氫二鈉得 發(fā)酵液，調(diào)節(jié)該四種物質(zhì)在上清液中的質(zhì)量濃度分別為l%-3%、0. 05%-0. 10%、0. 05%-0. 10%、 0· 1%-0· 3% ;調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值為7. 0-7. 5 ; 降血壓肽制備：在發(fā)酵液中接種枯草芽孢桿菌（Baci Ilus subtil is)，接種量為 10%-20% (相對培養(yǎng)物重量)，35°C-38°C發(fā)酵，發(fā)酵時間為20 h -25h; 超濾：將發(fā)酵后的液體進(jìn)行超濾分離，收集分子量在3000Da以下的肽組分；超濾壓力 在0. 5 MPa -1.0 MPa，室溫操作； 干燥：將分子量在3000Da以下的肽組分通過真空冷凍干燥獲得降血壓肽粉末產(chǎn)品；真 空冷凍干燥時間20 h -30h，溫度30°C -35°C，真空度100 Pa -300Pa。
[0007] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點和技術(shù)效果： (1)先利用胃蛋白酶處理海洋魚肉，將膠原蛋白從魚肉蛋白中分離出來。（2)接種枯草 芽孢桿菌，同時利用微生物的發(fā)酵和產(chǎn)酶特性，使海洋魚膠原蛋白在受到枯草芽孢桿菌侵 蝕的同時，還受到該菌所產(chǎn)的多種蛋白酶的酶解。（3)本方案復(fù)合使用胃蛋白酶酶解和枯草 芽孢桿菌發(fā)酵技術(shù)制備降血壓肽。（4)本方案利用枯草芽孢桿菌產(chǎn)酶功能，能產(chǎn)生中性蛋白 酶、堿性蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶等多種酶類的特性，使得海洋魚膠原蛋白的發(fā)酵 過程既是微生物發(fā)酵過程，又是復(fù)合酶解過程，相互協(xié)調(diào)作用，海洋魚膠原蛋白受到枯草芽 孢桿菌侵蝕，有利于暴露出多個酶切位點進(jìn)行復(fù)合酶解。（5)不同的發(fā)酵參數(shù)所能制備出來 的肽組分具有不同的活性或生理功能，本發(fā)明采用控制微生物接種量、發(fā)酵溫度、PH值及發(fā) 酵時間的協(xié)調(diào)作用，達(dá)到一種"可控發(fā)酵+復(fù)合酶解"制備特定功能的活性肽一一降血壓肽 的目的。（6)分子量在3000Da以下的肽組分具備降血壓功能。
【具體實施方式】
[0008] 以下結(jié)合具體的實例對本發(fā)明的具體實施進(jìn)行說明，但本發(fā)明的實施和保護(hù)不限 于此。
[0009] 實施例一： 海魚去皮、骨、刺、雜質(zhì)，魚肉打成勻漿；在魚肉勻漿中加入與魚肉質(zhì)量比為1:10的純 凈水，再加入2000U/g魚肉的胃蛋白酶處理魚肉提取膠原蛋白，酶解條件是：pHl. 5、35°C、 酶解時間6h ;酶解后的魚肉糜混合液通過離心分離，取上清液備用，沉淀作為魚糜制品或 通過干燥加工成為魚粉；離心轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/min，離心時間15min ;在離心分離得到的上 清液中加入葡萄糖、氯化鈣、硫酸鎂和磷酸氫二鈉，調(diào)節(jié)葡萄糖等四種物質(zhì)的質(zhì)量濃度分 別為3%、0. 05%、0. 10%、0. 3%。調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值為7. 0 ;在發(fā)酵液中接種枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)，接種量為20% (相對培養(yǎng)物重量)，35°C發(fā)酵，發(fā)酵時間為20h。將發(fā) 酵液進(jìn)行超濾分離，收集分子量在3000Da以下的肽組分；超濾壓力在1.0 MPa，室溫操作；將 分子量在3000Da以下的肽組分通過真空冷凍干燥獲得降血壓肽粉末產(chǎn)品；真空冷凍干燥 時間20h，溫度35°C，真空度lOOPa。
[0010] 實施例二： 海魚去皮、骨、刺、雜質(zhì)，魚肉打成勻漿；在魚肉勻漿中加入與魚肉質(zhì)量比為1:15的純 凈水，再加入3000U/g魚肉的胃蛋白酶處理魚肉提取膠原蛋白，酶解條件是：pH2. 5、40°C、 酶解時間3h ;酶解后的魚肉糜混合液通過離心分離，取上清液備用，沉淀作為魚糜制品或 通過干燥加工成為魚粉；離心轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/min，離心時間IOmin ;在離心分離得到的上 清液中加入葡萄糖、氯化鈣、硫酸鎂和磷酸氫二鈉，調(diào)節(jié)葡萄糖等四種物質(zhì)的質(zhì)量濃度分 別為1%、0. 10%、0. 05%、0. 1%%。調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值為7. 5 ;在發(fā)酵液中接種枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)，接種量為10% (相對培養(yǎng)物重量)，38°C發(fā)酵，發(fā)酵時間為25h ;將發(fā) 酵液進(jìn)行超濾分離，收集分子量在3000Da以下的肽組分；超濾壓力在0. 5MPa，室溫操作；將 分子量在3000Da以下的肽組分通過真空冷凍干燥獲得降血壓肽粉末產(chǎn)品；真空冷凍干燥 時間30h，溫度30°C，真空度300Pa。
[0011] 活性肽功能測定： 表1海洋魚蛋白生物活性肽的降血壓功能
【主權(quán)項】
1. 一種微生物法制備海洋魚蛋白降血壓肽的方法，其特征是包括以下步驟： 前處理：海魚去皮、骨、刺、雜質(zhì)后，將魚肉打成勻漿； 膠原蛋白提取：在魚肉勻漿中加入與魚肉質(zhì)量比為1:10或1:15的純凈水，再加入 2000U/g魚肉-3000U/g魚肉的胃蛋白酶處理魚肉提取膠原蛋白，酶解條件是：pHl. 5-2. 5、 35°C -40°C、酶解時間 3h-6h ; 離心分離：酶解后的魚肉糜混合液通過離心分離，取上清液備用，沉淀作為魚糜制品 或通過干燥加工成為魚粉；所述離心的轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/min -3000轉(zhuǎn)/min，離心時間10 min -15min ； 發(fā)酵液調(diào)節(jié)：在離心分離得到的上清液中加入葡萄糖、氯化鈣、硫酸鎂和磷酸氫二鈉得 發(fā)酵液，調(diào)節(jié)該四種物質(zhì)在上清液中的質(zhì)量濃度分別為l%-3%、0. 05%-0. 10%、0. 05%-0. 10%、 0? 1%-0. 3% ;調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值為7. 0-7. 5 ; 降血壓肽制備：在發(fā)酵液中接種枯草芽孢桿菌（Baci Ilus subtil is)，接種量為 10%-20%，35°C -38°C發(fā)酵，發(fā)酵時間為 20 h -25h ; 超濾：將發(fā)酵后的液體進(jìn)行超濾分離，收集分子量在3000Da以下的肽組分；超濾壓力 在0. 5 MPa -1.0 MPa，室溫操作； 干燥：將分子量在3000Da以下的肽組分通過真空冷凍干燥獲得降血壓肽粉末產(chǎn)品；真 空冷凍干燥時間20 h -30h，溫度30°C -35°C，真空度100 Pa -300Pa。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物法制備海洋魚蛋白降血壓肽的方法，其特征是按以下 步驟進(jìn)行： 海魚去皮、骨、刺、雜質(zhì)，將魚肉打成勻漿；在魚肉勻漿中加入與魚肉質(zhì)量比為1:10 的純凈水，再加入2000U/g魚肉的胃蛋白酶處理魚肉提取膠原蛋白，酶解條件是：pH1.5、 35°C、酶解時間6h ;酶解后的魚肉糜混合液通過離心分離，取上清液備用，沉淀作為魚糜 制品或通過干燥加工成為魚粉；所述離心轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/min，離心時間15min ;在離心分離 得到的上清液中加入葡萄糖、氯化鈣、硫酸鎂和磷酸氫二鈉，調(diào)節(jié)該四種物質(zhì)的質(zhì)量濃度 分別為3%、0. 05%、0. 10%、0. 3% ;調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值為7. 0 ;在發(fā)酵液中接種枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)，接種量為20%，35°C發(fā)酵，發(fā)酵時間為20h ;將發(fā)酵液進(jìn)行超濾分離， 收集分子量在3000Da以下的肽組分；超濾壓力在1.0 MPa，室溫操作；將分子量在3000Da以 下的肽組分通過真空冷凍干燥獲得降血壓肽粉末產(chǎn)品；真空冷凍干燥時間20h，溫度35°C， 真空度lOOPa。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物法制備海洋魚蛋白降血壓肽的方法，其特征是按以下 步驟進(jìn)行： 海魚去皮、骨、刺、雜質(zhì)，將魚肉打成勻漿；在魚肉勻漿中加入與魚肉質(zhì)量比為1:15 的純凈水，再加入3000U/g魚肉的胃蛋白酶處理魚肉提取膠原蛋白，酶解條件是：pH2. 5、 40°C、酶解時間3h ;酶解后的魚肉糜混合液通過離心分離，取上清液備用，沉淀作為魚糜 制品或通過干燥加工成為魚粉；離心轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/min，離心時間IOmin ;在離心分離得 到的上清液中加入葡萄糖、氯化鈣、硫酸鎂和磷酸氫二鈉，調(diào)節(jié)該四種物質(zhì)的質(zhì)量濃度分 別為1%、0. 10%、0. 05%、0. 1%% ;調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值為7. 5 ;在發(fā)酵液中接種枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)，接種量為10%，38°C發(fā)酵，發(fā)酵時間為25h ;將發(fā)酵液進(jìn)行超濾分離， 收集分子量在3000Da以下的肽組分；超濾壓力在0. 5MPa，室溫操作；將分子量在3000Da以
【專利摘要】本發(fā)明公開一種微生物法制備海洋魚蛋白降血壓肽的方法，屬于食品加工領(lǐng)域。本發(fā)明以海洋魚為原料，采用胃蛋白酶酶解和枯草芽孢桿菌發(fā)酵法，制備生物活性肽降血壓肽。先利用胃蛋白酶處理海洋魚肉，將膠原蛋白從魚肉蛋白中分離出來。接種枯草芽孢桿菌，同時利用微生物的發(fā)酵和產(chǎn)酶特性，使海洋魚膠原蛋白在受到枯草芽孢桿菌侵蝕的同時，還受到該菌所產(chǎn)的多種蛋白酶的酶解。本發(fā)明采用控制微生物接種量、發(fā)酵溫度、pH值及發(fā)酵時間的協(xié)調(diào)作用，達(dá)到一種“可控發(fā)酵+復(fù)合酶解”制備特定功能的活性肽——降血壓肽的目的。
【IPC分類】C12P21-06
【公開號】CN104878062
【申請?zhí)枴緾N201510248644
【發(fā)明人】王娟, 汪雨亭, 黃儒強
【申請人】華南理工大學(xué)
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月18日