一種從巖筋菜中提取巖筋菜素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物中有效成分的分離純化方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 巖筋菜素為三貓類化合物，CAS號(hào)64285-74-1，分子式C3tlH48O5，分子量488. 7,分 子結(jié)構(gòu)式：
巖筋菜為巖梅科植物，常用于治療風(fēng)寒感冒、咳嗽、哮喘和癆傷等癥?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研宄表 明，巖筋菜中含有大量三萜類物質(zhì)巖筋菜素。
[0003] 通過文獻(xiàn)檢索，現(xiàn)有制備巖筋菜素的工藝很少見到。其中在公開的發(fā)明專利"一種 純化巖筋菜素的方法"（專利號(hào)201110151695. X)中主要的工藝步驟為：取巖筋菜粉碎，加 6-10倍量80-90%甲醇溶液超聲提取2-3次，提取液減壓濃縮，濃縮液加水分散，加入大孔樹 脂柱吸附，甲醇溶液梯度洗脫，收集有效成分減壓濃縮，濃縮液用乙酸乙酯萃取，萃取液濃 縮至小體積，再以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，采用高速逆流色譜分離，紫外 檢測器檢測，收集流分回收試劑，干燥即得巖筋菜素。該方法操作過程復(fù)雜，溶劑使用量大， 生產(chǎn)成本高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明是針對現(xiàn)有制備巖筋菜素的方法所存在的缺陷和不足而進(jìn)行的研宄，旨在 提供一種高效性、產(chǎn)率高、純度高、低污染的制備方法。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案按照下列步驟進(jìn)行： a) 材料預(yù)處理：取干燥的藥材，粉碎，過20~60目篩，在藥材粉末加入料液比為1 :3~6 倍、60%~90%的乙醇溶劑，并同時(shí)加入粉末重量0. 1%~0. 5%的生物酶在pH值4~5,溫度為 45~50°C的條件下酶解l~3h ; b) 回流提?。好附馔瓿珊螅瑢⒚附馕镌跍囟葹?0~60°C的條件下回流提取l~2h，過濾， 濾渣重復(fù)提取1~2次，收集濾液，備用； c) 脫色：將步驟（b)中所得濾液經(jīng)氧化鋁柱脫色，所得液體減壓濃縮至無醇味，濃縮液 備用； d) 上層析柱：將濃縮液上硅膠層析柱，先用2~5倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用3~5倍柱 體積、10~20%的乙醇洗脫；最后用2~5倍柱體積、60%~80%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液； e) 減壓濃縮：洗脫液減壓濃縮，即得巖筋菜素。
[0006] 步驟a)中所述的生物酶為果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶中的一種。
[0007] 步驟c)中所述氧化鋁柱的規(guī)格為100~200目。
[0008] 巖筋菜素是胞內(nèi)物質(zhì)，植物細(xì)胞壁主要由纖維素和果膠組成，纖維素酶、果膠酶、 半纖維素酶是可以將其水解。雪膽細(xì)胞用生物酶處理后，細(xì)胞壁的水解破裂，有利于細(xì)胞內(nèi) 有效成分的溶出。另外硅膠層析柱與氧化鋁柱的聯(lián)用來純化巖筋菜素，可以使所得產(chǎn)品的 純度在一定程度上得到很大的提高。
[0009] 下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
[0010]
【具體實(shí)施方式】： 實(shí)施例1 : 取干燥的巖筋菜藥材，粉碎，過20目篩，在藥材粉末加入料液比為1 :3倍、60%的乙醇 溶劑，并加入粉末重量〇. 1%的纖維素酶在PH值為4,溫度為45°C的條件下酶解Ih ;酶解完 成后，將酶解物在溫度為50°C的條件下回流提取lh，過濾，濾渣重復(fù)提取1次，收集濾液；將 所得濾液經(jīng)100目氧化鋁柱脫色，所得液體減壓濃縮至無醇味，濃縮液備用；將濃縮液上硅 膠層析柱，先用2倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用3倍柱體積、10%的乙醇洗脫；最后用2倍柱 體積、60%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；洗脫液減壓濃縮，即得巖筋菜素。經(jīng)檢測，提取物 中巖筋菜素含量為85. 3%。
[0011] 實(shí)施例2: 取干燥的巖筋菜藥材，粉碎，過40目篩，在藥材粉末加入料液比為1 :5倍、75%的乙醇 溶劑，并加入粉末重量〇. 3%的半纖維素酶在pH值為4,溫度為45°C的條件下酶解2h ;酶解 完成后，將酶解物在溫度為55°C的條件下回流提取I. 5h，過濾，濾渣重復(fù)提取2次，收集濾 液將所得濾液經(jīng)200目氧化鋁柱脫色，所得液體減壓濃縮至無醇味；將濃縮液上硅膠層析 柱，先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用4倍柱體積、15%的乙醇洗脫；最后用3倍柱體積、 70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；洗脫液減壓濃縮，即得巖筋菜素。經(jīng)檢測，提取物中巖筋 菜素含量為86. 1%。
[0012] 實(shí)施例3: 取干燥的巖筋菜藥材，粉碎，過60目篩，在藥材粉末加入料液比為1 :6、90%的乙醇溶 劑，并加入粉末重量〇. 5%的果膠酶在pH值為5,溫度為50°C的條件下酶解3h ;酶解完成 后，將酶解物在溫度為60°C的條件下回流提取2h，過濾，濾渣重復(fù)提取2次，收集濾液；將所 得濾液經(jīng)200目氧化鋁柱脫色，所得液體減壓濃縮至無醇味，濃縮液；將濃縮液上硅膠層析 柱，先用5倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用5倍柱體積、20%的乙醇洗脫；最后用5倍柱體積、 80%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；洗脫液減壓濃縮，即得巖筋菜素。經(jīng)檢測，提取物中巖筋 菜素含量為87. 2%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從巖筋菜中提取巖筋菜素的方法，其特征在于采用以下制作步驟： a) 材料預(yù)處理：取干燥的藥材，粉碎，過20~60目篩，在藥材粉末加入料液比為1 :3~6 倍、60%~90%的乙醇溶劑，并同時(shí)加入粉末重量0. 1%~0. 5%的生物酶在pH值4~5,溫度為 45~50°C的條件下酶解l~3h; b) 回流提?。好附馔瓿珊?，將酶解物在溫度為50~60°C的條件下回流提取l~2h，過濾， 濾渣重復(fù)提取1~2次，收集濾液，備用； c) 脫色：將步驟（b)中所得濾液經(jīng)氧化鋁柱脫色，所得液體減壓濃縮至無醇味，濃縮液 備用； d) 上層析柱：將濃縮液上硅膠層析柱，先用2~5倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用3~5倍柱 體積、10~20%的乙醇洗脫；最后用2~5倍柱體積、60%~80%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液； e) 減壓濃縮：洗脫液減壓濃縮，即得巖筋菜素。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從巖筋菜中提取巖筋菜素的方法，其特征在于：步驟a) 中所述的生物酶為果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶中的一種。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從巖筋菜中提取巖筋菜素的方法，其特征在于：步驟c) 中所述氧化鋁柱的規(guī)格為1〇〇~200目。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從巖筋菜中提取巖筋菜素的方法，具體涉及一種生物酶酶解輔助回流法提取巖筋菜素的方法。其操作步驟包括：藥材預(yù)處理→回流提取→脫色→上層析柱→減壓濃縮，即得巖筋菜素。本方法高效，應(yīng)用范圍廣，適合高純度巖筋菜素的生產(chǎn)。
【IPC分類】C07J63/00
【公開號(hào)】CN104910241
【申請?zhí)枴緾N201510265073
【發(fā)明人】劉東鋒, 楊成東
【申請人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年5月22日