光葉子花中三萜皂苷,以其為活性成分的降血糖藥物,及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一類光葉子花中三萜皂苷，該類化合物可 用作為降血糖活性化合物，以其為有效成分的藥物組合物，其制備方法及其在制備降血糖 藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 2型糖尿病在全球范圍內(nèi)持續(xù)高發(fā)，已經(jīng)成為繼心腦血管病和惡性腫瘤之后第三 大嚴(yán)重威脅人們健康和生命的非傳染性疾病。糖尿病人長期的高血糖狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致大血管病 變（心臟病、高血壓、腦血管意外及下肢血管病變）、微血管病變（糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿 病腎?。?，和神經(jīng)病變等，危及心、腦、腎等生命器官。目前，臨床上使用的降血糖藥物主要 有胰島素增敏類（如雙胍類及噻唑烷二酮類），促胰島素分泌劑磺脲類（如格列美脲等）， 葡萄糖苷酶抑制劑（如阿卡波糖和伏格列波糖等），腸促胰島素類似物（如艾塞那肽 等）、DPP_4抑制劑（如西格列汀等），但這些藥物基本都為化學(xué)合成藥物，存在長期使用后 血糖濃度無法有效控制，以及長期使用會(huì)對(duì)腎臟、肝臟及造血功能等造成損害等問題，如臨 床用藥曲格列酮被發(fā)現(xiàn)具有嚴(yán)重的肝臟毒性風(fēng)險(xiǎn)，而吡咯列酮?jiǎng)t具有增加水腫和心率衰 竭發(fā)生率等危害。天然產(chǎn)物是大自然經(jīng)過長期進(jìn)化并選擇優(yōu)化過的化合物，也是人類防治 疾病藥物的主要來源，具有結(jié)構(gòu)豐富、療效確切、安全低毒以及無依耐性等優(yōu)點(diǎn)。在過去幾 十年上市的小分子新化學(xué)實(shí)體（NCE)中，近60%是直接或間接來源于天然產(chǎn)物，天然產(chǎn)物 仍然是藥物或先導(dǎo)化合物研發(fā)的重要源泉。所以從植物中發(fā)現(xiàn)更加安全有效的降血糖藥物 具有十分重要的學(xué)術(shù)意義和很好的應(yīng)用前景。
[0003] 2型糖尿病是一種代謝性綜合疾病，其形成與現(xiàn)代人高糖高脂以及運(yùn)動(dòng)不足的生 活方式密切相關(guān)。鏈脲佐菌素（STZ)對(duì)小鼠的胰島β細(xì)胞有選擇性破壞作用，誘導(dǎo)其產(chǎn)生 糖尿病。小鼠高熱量飼料飼養(yǎng)一定時(shí)間并禁食，按一定量腹腔注射STZ，可制備II型糖尿病 動(dòng)物模型，且按該法制備出的模型具有超重、糖耐量減低、血脂升高、血清胰島素升高及胰 島素受體結(jié)合力降低伴胰島素抵抗的特點(diǎn)，類似于II型糖尿病病人的臨床特征。STZ誘導(dǎo)的 小鼠糖尿病因其周期較短，方法簡便，是研宄人類II型糖尿病治療新藥的理想模型。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)中未見有光葉子花中三貓阜苷作為降血糖藥物的報(bào)道。
[0005] 三萜皂苷在紫茉莉科葉子花屬植物中存在種類不多，目前僅從紫茉莉科葉子花屬 光葉子花和葉子花中分離得到3個(gè)。本類的三萜皂苷因其含量較低和無紫外吸收等原因較 難分離?，F(xiàn)有技術(shù)中，從葉子花屬植物中分離三貓阜苷成分已公開發(fā)表如下方法：光葉子花 干燥粉碎地上部分用甲醇提取，用乙醚和正丁醇萃取，得乙醚、正丁醇和水三個(gè)部位。正丁 醇部分經(jīng)s印hadex LH-20柱層析，以甲醇洗脫，其中7 - 13管三萜皂苷部分再經(jīng)RP-18柱 層析，以甲醇/水洗脫，其中48%甲醇部位最后經(jīng)s印hadex LH-20純化得到化合物β -D-g lucopyranosyl3-〇- ( β -D-xylopyranosyl- (I 3) -〇- β -D-glucopyranosyluronic acid) oleanolate。 參見：Simon, A. ；Toth, G. ；Duddeck, H. ； So liman, H. S. M. ；Mahmoud I. I.； Samir Η. , Glycosides from Bougainvillea glabra. Natural Product Research 2006， 20(1)，63 - 67?，F(xiàn)有技術(shù)中，從牛膝（八(：115〇^111:1168 13丨(161^3七3)中分離化合物（1)已公開發(fā) 表如下方法：牛膝干燥根7kg，用甲醇浸提回流3次（10L*3)，合并濾液，減壓回收溶劑得甲 醇浸膏I. 2kg。取浸膏（500g)混懸于水中，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇萃取液減 壓濃縮得淺黃色固體約28g。取正丁醇提取物25g濕法上硅膠柱，用氯仿-甲醇（VBV，10 : 1一5 :5)梯度洗脫，得 5 個(gè)組分 I (0· 5g)、II (6. 10g)、111 (2. 5g)、IV (6. 0g)、V (5. Og)。 組分 II 用 Cosmosil 75C-0PN 柱，以甲醇-水（V:V = 4:1)洗脫，得組分 II -I (500mg)、 II -2 (I. 2g)、II -3 (2. 5g)、II -4 (I. 4g)。將化合物組分 II -1 反復(fù)用 Cosmosil 75C-0PN 柱 分離，用甲醇-水（VBV = 4B1)洗脫得化合物⑴（25mg)，參見：祈乃喜，賈淑萍，郝志 芳，李建新，懷牛膝成分的分離與鑒定.中國藥物化學(xué)雜志，2005, 15(3)，162-165。從地 膚子中分離化合物（2)和（3)的已公開發(fā)表方法如下：地膚子10.0 kg，用8倍量體積分?jǐn)?shù) 70%乙醇提取3次，每次2h。合并提取液，減壓濃縮得浸膏約3. 75kg。取其中3500g，硅藻土 拌樣，依次以石油醚、三氯甲烷、甲醇索氏提取，得到石油醚部分520g，三氯甲烷部分130g， 甲醇部分1420g。甲醇部分經(jīng)大孔樹脂吸附，依次用水、75%和95%乙醇洗脫，回收乙醇洗 脫液，75 %乙醇洗脫液得干浸膏127g，95 %乙醇洗液得干浸膏23g，薄層檢測(cè)發(fā)現(xiàn)兩者化學(xué) 成分重疊較多，將二者合并?？偨嘟?jīng)S印hadex LH - 20柱色譜，甲醇洗脫，得總皂苷36g 和總黃酮苷5g?？傇碥战?jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇（含3%水）梯度洗脫，薄層色譜檢 測(cè)，得4個(gè)流分。其中第2流分經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇（含3%水）（82 : 18)洗 脫，再經(jīng)RPC18硅膠柱色譜，甲醇-水（77 : 23)洗脫，得化合物（2) (17mg)和（3) (229mg)， 參見：盧向紅，徐向東，付紅偉，陳波，田景奎，張琳，地膚子化學(xué)成分的研宄。中國藥學(xué)雜志， 2012, 47 (5)，338-342。其缺點(diǎn)是化合物（1)、（2)、（3)的含量低，分離純化中多次用到有機(jī) 溶劑和水的混合溶劑系統(tǒng)，該混合溶劑回收溫度高，不利于溶劑的回收利用，不利于工業(yè) 化大量生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一類光葉子花三萜皂 苷化合物，本發(fā)明涉及的有降血糖活性的三萜皂苷類化合物在葉子花屬植物中為首次分離 得到；提供制備該類化合物的方法，該提取分離方法可控性和重現(xiàn)性好，樣品損失少，成本 較低，操作方便，可較易分離得到三萜皂苷，溶劑可以反復(fù)回收利用，也適用于工業(yè)生產(chǎn)。本 發(fā)明的目的還在于提供以光葉子花三萜皂苷化合物為有效成分的降血糖藥物組合物；該類 化合物及其組合物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：
[0008] 光葉子花中三萜皂苷化合物，是指骨架含有一個(gè)齊墩果酸，齊墩果酸3位與一個(gè) β-D-吡喃葡萄糖醛酸的Γ位通過氧原子相連接的三萜皂苷和其他兩個(gè)同骨架結(jié)構(gòu)的衍 生物。
[0009] 本發(fā)明的三萜皂苷，優(yōu)選具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物齊墩果酸-3-0-β -D-吡喃葡 萄糖醛酸苷（1)、齊墩果酸-3-0- β -D-吡喃木糖（1 - 3) - β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷（2)、齊 墩果酸-3-0-β -D-吡喃木糖（1 - 3) - β -D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷（3)，
[0010]
[0011] R1 =氫或甲基；R2 =氫或β-D-吡喃木糖
[0012] 制備本發(fā)明上述光葉子花三萜皂苷化合物的方法，取光葉子花枝葉，經(jīng)干燥、粉粹 后，用90%甲醇室溫冷浸充分提取，甲醇浸膏；將甲醇浸膏加水混懸后，依次用乙酸乙酯和 正丁醇充分萃?。灰宜嵋阴ゲ糠趾驼〈疾糠址磸?fù)用硅膠、S印hadex LH-20、RP-18各種層 析柱分離純化，再結(jié)合三萜皂苷的TLC檢測(cè)方法即得到光葉子花三萜皂苷。
[0013] 制備如下結(jié)構(gòu)式所示光葉子花三萜皂苷化合物齊墩果酸-3-0-β -D-吡喃葡萄糖 醛酸苷（1)、齊墩果酸-3-0- β -D-吡喃木糖（1 - 3) - β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷（2)、齊墩果 酸-3-0-β-D-吡喃木糖（1 - 3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷（3)的方法，取光葉子花 枝葉，經(jīng)干燥、粉粹后，用90%甲醇室溫冷浸提取3次，時(shí)間分別為每次7、3、3天，提取液經(jīng) 減壓濃縮得甲醇浸膏；將甲醇浸膏加水混懸后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取，等體積 各萃取三次，回收溶劑得到乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分；將正丁醇部分經(jīng)硅膠柱層 析，用100:0,20:1，10:1，8:1，6:1，2:1，0:100的氯仿/甲醇梯度洗脫，薄層層析，結(jié)合三貓 皂苷TLC檢測(cè)方法合并其中的10: 1，8:1和6:1含有三萜皂苷的部分；以下的每一步驟都須 結(jié)合三萜皂苷TLC檢測(cè)方法來進(jìn)行分離純化；合并后的浸膏再次經(jīng)硅膠柱層析，先用20:1 的氯仿/甲醇等度洗脫去除非三萜皂苷部分，再以90:10:1的氯仿/甲醇/甲酸等度洗脫， 根據(jù)三萜皂苷點(diǎn)的不同合并為三個(gè)組分Fr. 1-Fr. 3 ;Fr. 1組分經(jīng)S印hadexLH-20凝膠柱層 析，1:1的氯仿/甲醇洗脫，合并得到三個(gè)亞組分Fr. 1-1 - Fr. 1-3 ;Fr. 1-2再經(jīng)反相RP-18 柱層析，先以50:50的甲醇/水洗脫去除雜質(zhì)，再以100:0的甲醇/水洗脫得到化合物齊墩 果酸-3-0- β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷（I) ;Fr. 2組分經(jīng)SephadexLH-20凝膠柱層析，用1:1 氯仿/甲醇為洗脫劑除去色素；富集得到的葉子花三萜皂苷再經(jīng)反相RP-18柱層析，先以 50:50的甲醇/水洗脫去除雜質(zhì)；所得三萜皂苷最后經(jīng)硅膠柱層析，以90:10:1的氯仿/甲 醇/甲酸等度