一種純天然小葉女貞果花青素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品資源的精深加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種純天然小葉女貞果花青素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人們生活水平不斷提高，也提高了對天然有機物質(zhì)的追求。保護人體健康、防病治病的天然植物性來源的無毒無害的物質(zhì)，越來越受人們的青睞。然而人工合成花青素，毒副作用較大，世界衛(wèi)生組織已經(jīng)禁止使用該物質(zhì)。因此純天然制備高純度小葉女貞果花青素的方法迫在眉睫。
[0003]小葉女貞(拉丁學名L.quihoui)又叫小白錯，是被子植物門，雙子葉植物綱，木犀科女貞屬的植物，是一種庭院中經(jīng)常栽植的重要的觀賞性的園藝灌木，主要生長在溝邊，路旁，山坡和河邊灌叢中，在全國各地都有廣泛的分布，資源豐富。
[0004]小葉女貞的果實，呈橢圓形，黑色，性涼，味苦，果實入藥后可以治療肝炎。其花白色，葉薄革質(zhì)。根葉也都可以入藥，具有清熱解毒的功效，可治療外傷、燙傷等癥。它葉小、常綠，且耐修剪，生長迅速，是制作盆景的優(yōu)良樹種。且能夠吸收多種有毒氣體，是具有優(yōu)良的抗污染能力的樹種。
[0005]到目前為止，花青素的純化方法主要有溶劑萃取法、鉛鹽沉淀法、柱層析法、膜分離法、高速逆流色譜法等方法。其中溶劑取法簡單快速、但選擇性不高，得到的花青素純度比較低；鉛鹽沉淀法制得的花青素純度較高，但鉛離子的引入導致花青素產(chǎn)品的安全性較差，使其應用受到極大限制；柱層析法應用過程中，常用甲醇或丙酮為洗脫劑，且含有較多的有毒溶劑殘留；高速逆流色譜法多用于花青素純品的制備，其應用過程中多用正丁醇、異丙酬等有毒有機溶劑。
[0006]隨著科研領(lǐng)域?qū)G色、純天然花青素產(chǎn)品制備技術(shù)的不斷改進，目前國內(nèi)外對小葉女貞果實花青素純化研究的相關(guān)專利或論文文獻，幾乎沒有。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明采用了溶劑萃取法及層析法聯(lián)用技術(shù)，在簡化操作工藝及節(jié)約成本的基礎(chǔ)上，制得了高純度的花青素產(chǎn)品，且產(chǎn)品安全可靠，填補了小葉女貞果純化花青素的技術(shù)空白。通過本發(fā)明，能夠推動對小葉女貞果實的系統(tǒng)研究，能夠深入的探索其潛在的藥用價值，實現(xiàn)對小葉女貞果實的最大化的合理運用。
[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種純天然小葉女貞果花青素的制備方法，本發(fā)明所述的純天然小葉女貞果花青素的制備方法，具體步驟如下:
[0009](I)原料預處理:將新鮮或冷凍的小葉女貞果皮和果肉打漿，制得果漿；
[0010](2)浸提液制備:向果漿中加入質(zhì)量分數(shù)60%?80%的酸化的乙醇溶液，果漿與酸化的乙醇溶液的質(zhì)量比為1:5?8，進行提取，提取后將浸提液與果渣分離；再向所得的果渣中加入質(zhì)量分數(shù)60%?80%的酸化的乙醇溶液，果渣與酸化的乙醇溶液的質(zhì)量比為1:5?8，進行提取，提取后將浸提液與果渣分離；合并兩次浸提液；每次提取的溫度為25?40°C，提取時間的為10?15小時；
[0011](3)粗提液制備:將步驟(2)得到的浸提液在溫度45?55 °C、真空度在-0.08?-0.1MPa條件下進行減壓濃縮，減壓濃縮比為5?10，回收乙醇，得小葉女貞果花青素粗提液；
[0012](4)花青素萃取液制備:將步驟(3)得到的小葉女貞果花青素粗提液與乙酸乙脂按體積比1:1?3混合，充分振蕩混勻后進行第一次萃取，收集下層水溶液；再將下層水溶液與乙酸乙脂按體積比1:1?3混合，充分振蕩混勻后進行第二次萃取，收集下層水溶液；每次萃取時間為2?4小時，萃取溫度為25?30°C，萃取次數(shù)為2?4次，最后得花青素萃取液；通過萃取除去黃酮類、脂溶性的蛋白、多糖、色素等雜質(zhì)；
[0013](5)大孔樹脂柱純化:將步驟(4)中制得的小葉女貞果花青素萃取液加入到預處理后的大孔樹脂柱內(nèi)，除去糖類、蛋白類、弱極性的黃酮類，上樣量為樹脂體積的1/6?1/8 ;再用含0.0Olwt %?0.0lwt % HCl的去離子水以0.5?lBV/h的流速洗脫柱子，用Molish反應不斷檢測流出液，直至還原糖全部洗脫出去為止；然后用酸化的質(zhì)量分數(shù)25%?35%乙醇溶液以2?3BV/h的流速洗脫柱子，柱溫保持在15?20°C，收集洗脫液，將洗脫液在溫度45?55°C、真空度在-0.08?-0.1MPa條件下減壓濃縮，減壓濃縮比是5?10，回收乙醇，真空冷凍干燥，制得純度在30%?40%的小葉女貞果花青素。
[0014]其中，步驟⑵所述的酸化的乙醇溶液為含有0.01wt%? 0.lwt%鹽酸或乙酸的乙醇溶液，步驟(5)所述的酸化的乙醇溶液為含有0.001%?0.01%鹽酸或乙酸的乙醇溶液。
[0015]優(yōu)選地，步驟(2)中的分離可采用板框過濾器或漿渣分離機；
[0016]優(yōu)選地，步驟(3)中可采用濃縮罐或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行減壓。
[0017]進一步地，大孔樹脂柱的預處理是用質(zhì)量分數(shù)95%乙醇浸泡10_24h，再用質(zhì)量分數(shù)95%乙醇洗至洗脫液加入水中不顯渾濁，然后用水洗至無醇，上樣。
[0018]更進一步地，步驟(5)中所述的大孔樹脂柱為Amberlite XAD-7HP或AB-8，所用柱子的徑高比為1:10?1:15。
[0019]與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點:
[0020](I)本發(fā)明屬女貞果資源的精深加工技術(shù)，采用廢置女貞果實為原料，變廢為寶，成本低廉，能促進小葉女貞果實高附加值成分的綜合開發(fā)利用，提高經(jīng)濟價值，從而提高產(chǎn)品的競爭力。
[0021](2)本發(fā)明運用了萃取及柱層析聯(lián)用技術(shù)，操作工藝簡單，參數(shù)條件溫和，生產(chǎn)周期短，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0022](3)操作過程中采用的有機溶劑安全無毒、均可回收再利用，從而節(jié)約生產(chǎn)成本。
[0023](4)制備出的小葉女貞果花青素產(chǎn)品中的花青素種類簡單，易于開展深度純化及功能活性研究。
[0024](5)制備出的小葉女貞果花青素產(chǎn)品為純天然綠色產(chǎn)品，保持了果實中原有花青素的種類及特性，能夠滿足生產(chǎn)保健食品如眼保健食品、預防心腦血管疾病食品等生產(chǎn)的原料需求，又能為高端藥品、化妝品的生產(chǎn)提供優(yōu)等的原材料。
【附圖說明】
[0025]圖1為本發(fā)明制得的純度為35%的小葉女貞果花青素產(chǎn)品超高效液相色譜圖。
[0026]圖中:1.矢車菊素-3-0-半乳糖苷、2.牽?；ㄋ?、3-0-半乳糖苷
[0027]從圖中可以看出，矢車菊素-3-0-半乳糖苷的出峰時間在19.2min左右，牽?；ㄋ亍?-0-半乳糖苷的出峰時間在23.5min左右，說明女貞果花青素種類簡單，易于分離單體，開展深度純化及功能活性研究。
【具體實施方式】
[0028]實施例1
[0029](I)取校園內(nèi)小葉女貞鮮果100g，將小葉女貞鮮果打漿，制得果漿，勻漿后與500mL
[0030]含0.1wt % HCl的質(zhì)量分數(shù)60%的乙醇溶液混合，25°C下閉光提取12小時后，提取后將浸提液與果渣分離；再向所得的果渣中加入500mL含0.1wt % HCl的質(zhì)量