從杏香兔耳風(fēng)中分離純化得到的化合物、其衍生物或類似物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從杏香兔耳風(fēng)中分離純化得到的具有體外和 體內(nèi)抗凝血作用的化合物、其衍生物或類似物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 凝血過程是一系列凝血因子相繼被酶解激活的過程，最終生成凝血酶，形成纖維 蛋白凝塊。血栓形成是在生理或病理情況下，凝血系統(tǒng)在不同程度上被激活，循環(huán)血液中有 形成分在血液中形成栓子，造成血管腔部分或完全堵塞。與之相應(yīng)的臨床事件有急性心肌 梗死、缺血性腦卒中、肺栓塞和彌散性血管內(nèi)凝血等，常常導(dǎo)致嚴(yán)重后果，對人類的健康已 構(gòu)成了極大的威脅。
[0003] 抗凝藥物治療的目的在于阻止高危病人的病理性血栓形成，防止已形成的血栓繼 續(xù)發(fā)展。現(xiàn)行的抗凝藥物種類雖然比較多，但它們存在許多不良反應(yīng)，如血藥濃度與療效存 在明顯個體差異和種族差異和藥物安全范圍窄等。
[0004] 我國傳統(tǒng)活血化瘀類中藥有上百種，它們在治療常見的淤血癥，如冠心病，動脈粥 樣硬化，腦卒中等病中發(fā)揮過重要作用。大量的來自于天然的高效低毒的抗凝血藥，還有待 被探索和發(fā)現(xiàn)。從傳統(tǒng)中草藥中尋找到更多結(jié)構(gòu)新穎，具有高效低毒的抗凝血化合物已成 為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。
[0005] 杏香兔耳風(fēng)（Ainsliaea fragrans)為菊科兔兒風(fēng)屬植物杏香兔耳風(fēng)的干燥全草， 是我國一味傳統(tǒng)中草藥，用于治療肺結(jié)核咳血、跌打損傷、無名腫毒、慢性宮頸炎等。目前上 市的制劑有杏香兔耳風(fēng)片，復(fù)方杏香兔耳風(fēng)顆粒，膠囊，滴丸等，用于宮頸炎，急性口腔潰瘍 的治療。杏香兔兒風(fēng)兔的研究主要集中在倍半萜類化合物和抗腫瘤活性，香豆素類化合物 的化學(xué)成分及生物活性的報道較少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供化合物杏香兔耳風(fēng)素 A，Al，A2, B，BI, B2,和C的植物來源及 其分離純化方法以及衍生物和類似物的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的另一目的是新化合物杏香兔耳風(fēng)素 A，Al，A2, B，BI, B2,和C的體外和體內(nèi)抗凝血活性及其潛在應(yīng)用價值。
[0007] 專利申請者在對該植物前期篩選過程中發(fā)現(xiàn)，該植物提取物具有顯著體外抗凝血 活性。我們在抗凝血活性篩選的指導(dǎo)下，對杏香兔耳風(fēng)抗凝血活性成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，分 離得到了兩對4-羥基香豆素類對映異構(gòu)體和一個7-羥基香豆素類新化合物，并用將此對 映異構(gòu)體進(jìn)行手性拆分，得到構(gòu)型單一的化合物la，lb，2a和2b。
[0008] 通過對化分離得到的化合物的體外和體內(nèi)抗凝血活性研究，發(fā)現(xiàn)化合物3具有明 顯抗凝血活性。
[0009] 本發(fā)明涉及杏香兔耳風(fēng)中相關(guān)4-羥基香豆素類化合物的分離制備、以及它具有 體內(nèi)抗凝血的活性。可以預(yù)期發(fā)展成為體內(nèi)抗凝血的藥物。由此完成了本發(fā)明。
[0010] 本發(fā)明所提供的從杏香兔耳風(fēng)中分離純化得到的化合物如下：

[0030] 其中，（一）化-馬可以相同或不同，可以分別、同時或各自為氫、羥基或含1-8個 碳的烷基、鹵素、硝基，疏基，1_8個碳的烷氧基，幾基、駿基、酸基或氣基、納鹽，鐘鹽，f丐鹽， 鋅鹽。
[0031] (二）成-1?12可以為以下芳環(huán)或雜環(huán)：二氫化吡咯、2-二氫化吡咯、1-二氫化吡 咯、2-惡唑啉、3-惡唑啉、2-咪唑啉、二氫吡唑、吡咯、咪唑、苯并咪唑、吡唑、剛挫、吡啶、二 氫嘧啶、嘧啶、苯環(huán)，或含1-8個碳的烷基、鹵素、硝基，1-8個碳的烷氧基，羰基、羧基、醛基。
[0032] (三）：11位碳到20位碳之間可以為單鍵，雙鍵或者三鍵。
[0037] 其中，（一）％-1?4可以相同或不同，可以分別、同時或各自為氫、羥基或含1-8個 碳的烷基、鹵素、硝基，疏基，1_8個碳的烷氧基，幾基、駿基、H全基或氣基、納鹽，鐘鹽，f丐鹽， 鋅鹽。
[0038] (二）：R5-R1Q可以為以下芳環(huán)或雜環(huán)：二氫化吡略、2-二氫化吡略、1-二氫化吡 咯、2-惡唑啉、3-惡唑啉、2-咪唑啉、二氫吡唑、吡咯、咪唑、苯并咪唑、吡唑、剛挫、吡啶、二 氫嘧啶、嘧啶、苯環(huán)，或含1-8個碳的烷基、鹵素、硝基，1-8個碳的烷氧基，羰基、羧基、醛基。
[0039] (三）：3,4為雙鍵可被氫化，12-17位可為單鍵，雙鍵，三鍵。
[0040]
[0043] 其中，（一）=R1-RM以相同或不同，可以分別、同時或各自為氫、羥基或含1-8個 碳的烷基、鹵素、硝基，疏基，1_8個碳的烷氧基，幾基、駿基、H全基或氣基、納鹽，鐘鹽，f丐鹽， 鋅鹽。
[0044] (二）=R5-R9可以為以下芳環(huán)或雜環(huán)：二氫化吡咯、2-二氫化吡咯、1-二氫化吡咯、 2-惡唑啉、3-惡唑啉、2-咪唑啉、二氫吡唑、吡咯、咪唑、苯并咪唑、吡唑、剛挫、吡啶、二氫嘧 啶、嘧啶、苯環(huán)，或含1-8個碳的烷基、鹵素、硝基，1-8個碳的烷氧基，羰基、羧基、醛基。
[0045] (三）：2' ,3' ,4' ,5' ,6'可為單鍵，雙鍵，三鍵。
[0046] 本發(fā)明所提供的化合物具有很好的體外和體內(nèi)抗凝血活性。
【附圖說明】
[0047] 圖1為杏香兔耳風(fēng)的分離制備的流程圖。
[0048] 圖2為本發(fā)明所提供的化合物1的圓二色光譜圖。
[0049] 圖3為本發(fā)明所提供的化合物2的圓二色光譜圖。
【具體實施方式】
[0050] 以下對本發(fā)明的原理和特征等進(jìn)行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，并非用于 限定本發(fā)明的范圍
[0051] 實施例1
[0052] 杏香兔耳風(fēng)素A、杏香兔耳風(fēng)素Al，杏香兔耳風(fēng)素A2,杏香兔耳風(fēng)素B，杏香兔耳風(fēng) 素BI，杏香兔耳風(fēng)素B2和杏香兔耳風(fēng)素C的分離制備
[0053] 蔥蓮干燥全草（20kg)粉碎后用95%乙醇50L冷浸提取三次。合并提取液回收溶 劑后用水混懸，分別用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取，得石油醚部位200g，乙酸乙酯部位 120g，正丁醇部位150g。
[0054] 石油醚部位經(jīng)正相硅膠色譜分成（A - E)五部分，第二部分又經(jīng)正相硅膠分成 (B1，B2，B3)三部分。B2部分經(jīng)過半制備液相分離得到杏香兔耳風(fēng)素A。杏香兔耳風(fēng)素A 經(jīng)正相手性色譜柱拆分得到杏香兔耳風(fēng)素Al和杏香兔耳風(fēng)素A2。
[0055] 乙酸乙酯部位正相硅膠色譜分成（F - J)五部分，G部分正相色譜分離得到中分離 得到杏香兔耳風(fēng)素C。同理，H部分分離得到杏香兔耳風(fēng)素B。杏香兔耳風(fēng)素B經(jīng)反相手性 色譜柱拆分得到杏香兔耳風(fēng)素Bl和杏香兔耳風(fēng)素B2。流程圖如圖1所示：
[0056] 如式⑴所示化合物杏香兔耳風(fēng)A，Al，A2, B, BI，B2和C結(jié)構(gòu)鑒定杏香兔耳風(fēng) A:colour less need Ies ；m. p. 184. 0 - 185. 0°C ；[α]^ +1. 〇 (c,〇. ：6, IVIeOH) ：； UV(MeOH) v max (log ε ) 208 (3. 52) nm, 296 (4. 52) nm ； IR (KBr) v max 3222. I, 2923, 1644. 8, 1600. 9, 15 63. 7, 1332. 2, 784. 5, 744. 8 !1H(Py-d5, 400MHz) and 13C (Py-d5, IO(MHz)NMR data, see Table I ;HRES頂S m/z 331. 1849[M+H+] [calcd. for C20H2704+m/z 331. 1904]。X-ray 單晶衍射結(jié)果 顯示，杏香兔耳風(fēng)A是一對對映異構(gòu)體，其中構(gòu)型為（11S，12S)占62. 7%，（11R 12R)構(gòu)型 的占 37. 3%。單晶編號 CCDC No. 1028802。
[0058]杏香兔耳風(fēng) Al: colourless needles ;m. P. 191. 0 - 192. 0 °C ; [a] f +1 8... 0 Ce, 0 3, MeOH) ; CD (CH3OH, 3. OmM) λ extr ( Θ [mdeg cm2 dmol ^) 282 (-1. 2)，210 (+14. 6).絕對構(gòu)型由X-ray單晶衍射確定。單晶編號CCDC No. 981339。
[0060] 杏香兔耳風(fēng) A2: colour less tiny needles ;m. ρ· 190. 0 - 191. 0 °C ; Cer:] f - 12.0 fe, 0,3, MeOH) ;： CD (CH3OH, 1.0 mM) λ extr ( Θ [mdeg cm2 dmol 1)301(+0.5),208(- 5.9).其絕對構(gòu)型由圓二色光譜（圖2所示）和X-ray單晶衍 射比對確定。
[0061] Compound 2: colour less needles ；m. p. 208. 0 °C ；[a]f 0 (c, 0.8, MeOH); UV(MeOH) v nax(log ε )214(3. 46) nm, 265(3. 44) nm, 342(4. 40) nm ；IR(KBr) v nax 3425. 6 ,2921. I, 1671. I, 1605. 8, 1584. 9, 1368. 7, 1009. 0, 786. 7, 740. 3 !1H(O)Cl3, 400MHz) and 13C(CDCl3，100MHz)Mffidata，seeTablel;HRESMSm/z 343.1531 [M+H+][calcd.for C2(]H230 5+m/z 331. 1540] j-ray單晶衍射結(jié)果顯示，杏香兔耳風(fēng)A是一對外消旋對映異構(gòu)體。 單晶編號 CCDC No. 1028800。
[0062]
[0063] Compound 2a: colour less needles