国产精品1024永久观看,大尺度欧美暖暖视频在线观看,亚洲宅男精品一区在线观看,欧美日韩一区二区三区视频,2021中文字幕在线观看

  • <option id="fbvk0"></option>
    1. <rt id="fbvk0"><tr id="fbvk0"></tr></rt>
      <center id="fbvk0"><optgroup id="fbvk0"></optgroup></center>
      <center id="fbvk0"></center>

      <li id="fbvk0"><abbr id="fbvk0"><dl id="fbvk0"></dl></abbr></li>

      一種白地霉及其在溫室大棚土壤修復(fù)中的應(yīng)用_3

      文檔序號:8937762閱讀:來源:國知局
      憐酸鹽,a-D-葡萄糖-1-憐本鹽,D-核糖,水楊巧,D-山梨醇,k山 梨糖,水蘇糖,K-海藻糖,松二糖,木糖醇,y-氨基下酸,漠代班巧酸,反下締二酸,0 -徑基 下酸,y-徑基下酸,P-徑苯乙酸,a-酬戊二酸,D-蘋果酸,D-葡萄糖二酸,癸二酸,班巧酸, 班巧酸甲基醋,k丙胺酸酷胺,k丙胺酸,k丙胺酷氨基乙酸,k天冬酷胺,k天冬氨酸, 甘氨酷A-谷氨酸,k苯基柄氨酸,脯氨酸,焦谷氨酸,k絲氨酸,k蘇胺酸,2-氨基乙醇, 腐巧,腺巧。
      [0041] 溫度、抑等因素對菌株X服0030B生長影響,見表1。
      [0042] 表1 :溫度、抑等因素對菌株X服0030B生長的影響
      [0043]
      [0044]通過上述對于菌種白地霉(GeotrichumCandidum)XHS0030BCGMCCNO. 9435 的 菌體形態(tài)、培養(yǎng)特征觀察及生理生化指標(biāo)測定,即通過菌體形態(tài)觀察、菌株培養(yǎng)特征觀察、 需氧性和運(yùn)動性測定、生長溫度測定、耐鹽試驗、巧樣酸鹽利用試驗、觸酶試驗、糖醇類發(fā)酵 試驗、硝酸鹽還原試驗、淀粉水解、明膠液化、嗎I噪試驗和&S產(chǎn)生試驗,均參照《真菌鑒定手 冊》的方法進(jìn)行,從菌種分類角度將菌種編號為XHS0030B綜合鑒定為白地霉(Geotrichum Candidum)。
      [0045]實施例二:白地霉(GeotrichumCandidum)XHS0030BCGMCCNO. 9435 的分子水平
      [0046] 1、PCR擴(kuò)增白地霉的口SrDNA序列及其測序
      [0047] 挑取少量X服0030B菌株的單菌落,放入盛有25yL無菌水的EP管中,100°C煮沸 8-lOmin,后迅速放入冰水混合物中5min。離屯、10000r/min、5min,4°C保存,用時取上清。
      [0048] 口SrDNA基因序列測定及其系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建:按常規(guī)方法提取細(xì)菌菌株的總 DNA,用去離子水將稀釋通用引物口Sl和口S4進(jìn)行口SrDNA區(qū)段的PCR擴(kuò)增,引物設(shè)計如 下:
      [0049]ITSl(巧:5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'
      [0050]ITS4(R) :5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'
      [0051] 50yl的反應(yīng)體系含:10XPCR緩沖液5yl,引物各20pmol,模板DNAdOOOng/ yI)IyIJaqTM燈aKaRa公司)0. 5U,dNTP8y1。PCR擴(kuò)增條件:首先在 94°C預(yù)變性 2min, 然后 98°C10s、55°C30s、72°C1. 5min,循環(huán) 30 次,最后在 72°C延伸lOmin。PCR產(chǎn)物的純 化:取8Ji1的PCR產(chǎn)物,在1 %瓊脂糖凝膠中電泳,用TaKaRaPCRRragmentRecoveirKit 從膠中回收目的片段,溶于20y1的高純水中。對PCR產(chǎn)物用PA(+)和PB(-)作測序引物, 測定口SrDNA序列,菌種X服0030B的基因序列參見附后的基因序列表。需要按照提供的 基因序列單列基因序列表。
      [0052] 3、口SrDNA基因序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析
      [0053] 將測序得到的口SrDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的核巧酸序列進(jìn)行BLAST分 析,從中獲取相近的口SrDNA序列,將X服0030B的口SrDNA序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLAST分析后,構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。參見附圖4所示,菌株XHS0030B與GeotrichumCandidum isolateLllB之間進(jìn)化距離最短,是GeotrichumCandidumisolate的近似種。結(jié)合 X服0030B的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征及生理生化特性,確定其為白地霉屬。將所測得的口SrDNA序 列輸入Genbank,WBlast程序進(jìn)行同源性比較,發(fā)現(xiàn)它與GeotrichumCandidumisolate LllB的ITSrDNA序列的相似性最大,為94%,從而進(jìn)一步確定它為GeotrichumCandidum。 結(jié)合X服0030B的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征及生理生化特性,確定其為菌種編號為X服0030B綜合鑒定 為白地霉(GeotrichumCandidum)。
      [0054]實施例S:溫室大棚±壤修復(fù)組劑的制備
      [00巧](1)接種:制備白地霉、沼澤紅假單胞菌、產(chǎn)航假絲酵母和高山被抱霉四種菌種的 固體培養(yǎng)基,滅菌后嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作,從斜面轉(zhuǎn)接至平板,溫度28°C下培養(yǎng)3天。
      [0056] (2) -級培養(yǎng):從步驟(1)中的固體培養(yǎng)基上挑取單菌落轉(zhuǎn)接至裝有液體培養(yǎng)基 的50血錐形瓶中,無菌操作,25°C、120r/min培養(yǎng)2地-4她。
      [0057] 做二級發(fā)酵:將一級培養(yǎng)菌種接種于盛有液體培養(yǎng)基的SOOmL錐形瓶中,無菌操 作,25°C、120r/min培養(yǎng) 36h-72h。
      [005引 (4)菌種發(fā)酵液的配伍:將步驟做制備的白地霉二級發(fā)酵液70份-80份、沼澤 紅假單胞菌二級發(fā)酵液30份-50份、產(chǎn)航假絲酵母二級發(fā)酵液20份-40份和高山被抱霉 二級發(fā)酵液10份-30份進(jìn)行混合,制備為菌種的混合液。
      [0059] (5)添加輔料:將步驟(4)制備的菌種混合液充分吸附于載體中,載體為溫室大棚 ±壤;輔料為尿素和過憐酸巧,其中尿素與過憐酸巧的重量比為1:2. 5 ;載體和輔料的重量 比為1:3 ;加水至含水量40-70%,然后按體積比每立方米加入±壤修復(fù)劑100-300g,并混 合均勻,即為制備的溫室大棚±壤修復(fù)劑。
      [0060] 同時,進(jìn)一步,本發(fā)明提供溫室大棚±壤修復(fù)劑的應(yīng)用方法:在空氣溫度20-30°C 下堆制;堆制是在覆蓋草簾下進(jìn)行,堆制開始后每30天翻堆一次,翻堆時補(bǔ)水至含水量 40-70%,堆制時間持續(xù)120天;堆制完成后攤驚至干燥后即可直接施用于±壤。
      [0061]本發(fā)明中,所選用的產(chǎn)航假絲酵母(Candidautilis)、高山被抱霉(Mcxrtierella alpina)和沼澤紅假單胞菌(Miodosedoseudomouaspadustris)都為常見的菌種,本領(lǐng)域 普通技術(shù)人員可W通過公眾渠道獲得。同時,所用的菌種產(chǎn)航假絲酵母(Candidautilis)、 高山被抱霉(Mo;rtierellaalpina)和沼澤紅假單胞菌(Miodosedoseudomouaspadustris) 發(fā)酵液按照現(xiàn)有技術(shù)中常見的方法及相應(yīng)培養(yǎng)基制備獲得。
      [0062] 本發(fā)明所選用編號為XHS0030B的白地霉是從溫室大棚±壤中篩選得到,同時,盡 管沼澤紅假單胞菌、產(chǎn)航假絲酵母和高山被抱霉為常見的菌種,但是,微生物菌種的特異性 和復(fù)雜性,將各種不同的菌種能夠復(fù)合配伍使用,通過各種菌種的相融性、配伍性與各菌種 屬性結(jié)合,考慮的復(fù)合菌種的安全性,特別是應(yīng)用于溫室大棚±壤修復(fù)中都需要大量的基 礎(chǔ)實驗驗證,本發(fā)明基于前期基礎(chǔ)研究積累,通過采用大量不同的菌種復(fù)配試驗,證明本發(fā) 明采用復(fù)合菌種通過添加輔料制備溫室大棚±壤修復(fù)劑,溫室大棚±壤修復(fù)組劑按照重量 比配比由白地霉70份-80份、沼澤紅假單胞菌30份-50份、產(chǎn)航假絲酵母20份-40份和 高山被抱霉10份-30份混合,菌種混合液充分吸附于載體大棚±壤中,并與選用合適的輔 料相混合,通過工藝制備獲得溫室大棚±壤修復(fù)組劑,并通過大棚生產(chǎn)實踐應(yīng)用獲得的± 壤修復(fù)組劑,對于有效改良和活化±壤、降解±壤中的有害物質(zhì)、解決±壤的次生鹽潰化問 題等方面都具有重要的意義和作用。
      [0063] 實施例四:溫室大棚±壤修復(fù)組劑的制備
      [0064] (1)接種:制備白地霉、沼澤紅假單胞菌、產(chǎn)航假絲酵母和高山被抱霉四種菌種的 固體培養(yǎng)基,滅菌后嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作,從斜面轉(zhuǎn)接至平板,溫度25°C下培養(yǎng)3天。
      [0065] (2) -級培養(yǎng):從步驟(1)中的固體培養(yǎng)基上挑取單菌落轉(zhuǎn)接至裝有液體培養(yǎng)基 的50血錐形瓶中,無菌操作,25°C、120r/min培養(yǎng)2地-4她。
      [006引做二級發(fā)酵:將一級培養(yǎng)菌種接種于盛有液體培養(yǎng)基的SOOmL錐形瓶中,無菌操 作,25°C、120r/min培養(yǎng) 36h-72h。
      [0067] (4)菌種發(fā)酵液的配伍:將步驟做制備的白地霉二級發(fā)酵液80份、沼澤紅假單 胞菌二級發(fā)酵液30份、產(chǎn)航假絲酵母二級發(fā)酵液40份和高山被抱霉二級發(fā)酵液30份進(jìn)行 混合,制備為菌種的混合液。
      [0068] (5)添加輔料:將步驟(4)制備的菌種混合液充分吸附于載體中,載體為溫室大棚 ±壤;輔料為尿素和過憐酸巧,其中尿素與過憐酸巧的重量比為1:2. 5 ;載體和輔料的重量 比為1:3 ;加水至含水量40-70%,然后按體積比每
      當(dāng)前第3頁1 2 3 4 
      網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
      • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點(diǎn)贊!
      1