一種穩(wěn)定、抗干擾能力強(qiáng)的腺苷脫氨酶試劑及檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及腺苷檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種腺苷脫氨酶檢測(cè)試劑，還涉及使用 此檢測(cè)試劑的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 腺苷脫氨酶（ADA)是一種與機(jī)體細(xì)胞免疫活性有重要關(guān)系的嘌呤核苷酸分解代謝酶 類，20世紀(jì)50年代末，ADA活性測(cè)定引入酶學(xué)領(lǐng)域，目前已用于各類疾病的診斷。ADA可特 異性催化腺苷產(chǎn)生不可逆的脫氨反應(yīng)。ADA活性降低將影響核苷合成，使淋巴祖細(xì)胞轉(zhuǎn)化為 淋巴母細(xì)胞及漿細(xì)胞的能力降低，從而導(dǎo)致免疫活性細(xì)胞減少，功能減退。體液中ADA活性 己成為惡性腫瘤、結(jié)核、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肝病及傷寒等疾病的診斷與鑒別診斷、療效觀 察和病情追隨的一個(gè)重要臨床指標(biāo)。血清ADA活性升高，常見于肝炎、肝硬化、血色素沉著 癥、腫瘤引起的阻塞性黃疸、前列腺和膀胱癌、溶血性貧血、傷寒、痛風(fēng)、結(jié)核和心衰等。測(cè)定 血液、體液中的ADA及其同工酶水平對(duì)某些疾病的診斷、鑒別診斷、治療及免疫功能的研究 越來(lái)越受到臨床的重視。
[0003] 目前，文獻(xiàn)報(bào)道的ADA活性的測(cè)定方法有氨氣敏電極法、熒光法、化學(xué)發(fā)光法、同 位素法、高效液相色譜法等。這些方法儀器設(shè)備要求高，分析成本高，難于全面推廣應(yīng)用。目 前體液中測(cè)定常用方法為氨試劑比色法。該法操作簡(jiǎn)單，易于推廣，但不能用于批量樣品的 測(cè)定。
[0004] 鑒于此，本發(fā)明在ADA催化腺苷水解生成氨和次黃嘌呤核苷反應(yīng)的基礎(chǔ)上，再依 次偶聯(lián)三個(gè)酶促反應(yīng)，建立了一種既能用于手工操作，又能用于自動(dòng)生化分析儀的四酶偶 聯(lián)測(cè)定ADA活性的新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測(cè)腺苷脫氨酶(ADA)的試劑及使用該試劑檢測(cè)ADA含 量的方法。該試劑盒采用四酶偶聯(lián)法，可以有效檢測(cè)ADA的含量，抗干擾能力強(qiáng)，穩(wěn)定性好 等優(yōu)點(diǎn)。
[0006] 基本原理：腺苷在ADA作用下，生成次黃嘌呤核苷和氨，
次黃嘌呤核苷在嘌呤核苷磷酸化酶（PNP)催化下，與磷反應(yīng)生成次黃嘌呤和核糖1-磷 酸
次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶（X0D)催化氧化生成尿酸和H202:
通過(guò)測(cè)定紅色醌化合物在546nm處吸光度的變化速率（ΔΑ/min)可測(cè)得ADA活性。
[0007] 本發(fā)明是通過(guò)以下步驟得到的： 一種ADA檢酸測(cè)試劑，包括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1和試劑R2的組成如下： 試劑R1中含有 緩沖'液..................................................100mmol/L 4-AA....................................................4mmol/L PNP.....................................................0. 3U/mL XOD.....................................................0. 4U/mL POD.....................................................0.lU/mL 防腐劑..................................................〇· 5g/L; 試劑R2的組分為： 緩沖液..................................................100mmol/L I/lif....................................................llmmol/L EHSPT...................................................4mmol/L 以上試劑均用pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液。
[0008] 以上ADA檢測(cè)試劑，所述防腐劑為NaN3。
[0009] 所述的ADA檢測(cè)試劑來(lái)檢測(cè)ADA的檢測(cè)方法，使用全自動(dòng)生化分析儀利用速率法 進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)主波長(zhǎng)為546nm。
[0010] 所述的檢測(cè)方法，R1試劑和R2試劑的比例為2:1。
[0011] 本發(fā)明的有益效果： 1) 采用新的緩沖體系和穩(wěn)定劑，顯著改善了試劑的穩(wěn)定性； 2) 采用四酶偶聯(lián)法，不僅顯著改善測(cè)定的性能，而且增強(qiáng)了抗干擾能力，適宜批量試樣 全自動(dòng)分析； 3) 試劑的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性良好，使用方便，完全可以滿足臨床需要。
【附圖說(shuō)明】
[0012] 圖1為兩種試劑的相關(guān)性曲線圖， 圖2為兩種試劑效期穩(wěn)定性曲線圖。 圖3為實(shí)施例1試劑檢測(cè)方法， 圖4為實(shí)施例試劑抗干擾性能比較， 圖5為實(shí)施例1試劑與市場(chǎng)常見并得到認(rèn)可的腺苷脫氧酶測(cè)定試劑盒對(duì)比檢測(cè)結(jié)果。【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明： 實(shí)施例1 腺苷脫氨酶的檢測(cè)試劑，包試劑R1和試劑R2 : 1) 其R1的組成為： 緩沖液..................................................100mmol/L 4-AA....................................................4mmol/L PNP.....................................................0. 3U/mL XOD.....................................................0. 4U/mL POD.....................................................0.lU/mL BSA.....................................................lg/L， 蔗糖....................................................5g/L， 海藻糖..................................................2g/L, 過(guò)氧化物酶...............................................12KU/L， 抗壞血酸氧化酶...........................................5KU/L， 膽紅素氧化酶.............................................8KU/L， 防腐劑NaN3...............................................〇. 5g/L； 2) 試劑R2的組分為： 緩沖液..................................................100mmol/L I/lif....................................................llmmol/L EHSPT..................................................4mmol/L BSA....................................