咪唑并吡啶-6-甲酰-氨基酸芐酯,其合成,活性及應(yīng)用
【專(zhuān)利說(shuō)明】咪唑并吡啶-6-甲釀-氨基酸芐酯，其合成，活性及應(yīng)用 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及3H-咪唑并[4,5-C]吡啶-6-甲酰-硝基精氨酰-氨基酸芐酯，涉及 它們的制備方法、涉及它們對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用，涉及它們的抗炎活性，還涉及它們的抗 血栓活性。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥是一組可影響身體任何部位的多種疾病的通稱。使用的其它術(shù)語(yǔ)為惡性腫瘤 和贅生物。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，癌癥是世界上的頭號(hào)死因之一，尤其是在發(fā)展中國(guó)家。而 全世界癌癥死亡人數(shù)預(yù)計(jì)將繼續(xù)上升，到2030年將超過(guò)1310萬(wàn)。因此，開(kāi)發(fā)新的高效，低 毒，毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是新藥研究的重要課題之一。
[0003] 隨著對(duì)腫瘤特性和發(fā)病本質(zhì)的認(rèn)識(shí)，發(fā)明人曾經(jīng)公開(kāi)下式代表的3H-咪唑并[4， 5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl(其中AA代表甘氨基酸或其它L-氨基酸殘基）在1μmol/kg 劑量下顯示良好的抗腫瘤活性。通過(guò)進(jìn)一步研究發(fā)明人認(rèn)識(shí)到，在3H-咪唑并[4, 5-c]吡 啶-6-甲酰-AA-OBzl的6-甲?；虯A-OBzl基之間插入N^NO^Arg殘基，不僅可以延緩 它的代謝達(dá)到提高抗腫瘤活性的目的，而且可以增加抗炎癥和抗血栓活性。炎癥和血栓都 是危害腫瘤患者預(yù)后的并發(fā)癥。通過(guò)這種修飾，獲得具有抗腫瘤，抗炎癥和抗血栓三重活性 的化合物，具有良好的臨床應(yīng)用前景。根據(jù)這些認(rèn)識(shí)，發(fā)明人提出了本發(fā)明。
[0004]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一個(gè)內(nèi)容是提供3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-NG_N02-Arg-AA-0Bzl(式中AA選自L-Thr，L-Ser和L-Asp (OBzl)殘基）。
[0006]
[0007] 本發(fā)明的第二個(gè)內(nèi)容是提供制備3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲 酰-NG-N02-Arg-AA-0Bzl(式中AA選自L-Thr，L-Ser和L-Asp(OBzl)殘基）的合成方法，該 方法包括：
[0008] (1)L-組氨酸在稀硫酸催化下與甲酸進(jìn)行Pictet-Spengler縮合生成6S-4,5,6, 7-四氫-3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸；
[0009] (2) 6S-4, 5,6, 7-四氫-3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸轉(zhuǎn)化為6S-4, 5,6, 7-四 氫-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；
[0010] (3)6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯用高錳酸鉀氧化為 3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；
[0011] (4)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯在NaOH溶液（2N)中皂化成3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸；
[0012] (5) 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸與NG-N02-Arg-0Bzl偶聯(lián)得到3H-咪唑并[4， 5-c]吡啶-6-甲酰Ns-N02-Arg-0Bzl;
[0013] (6) 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-N^-NO^Arg-OBzl在NaOH溶液（2N)中皂 化成3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-NG-N02-Arg;
[0014] (7) 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-NG-N02-Arg與L-Thr-〇Bzl，L-Ser-〇Bzl和 L-Asp(0Bzl)_0Bzl偶聯(lián)得到 3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰NG-N02-Arg_AA-0Bzl。
[0015] 本發(fā)明的第三個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-W-NOfArg-AA-OBzl對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。
[0016] 本發(fā)明的第四個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-Ns-N02-Arg-AA-0Bzl對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。
[0017] 本發(fā)明的第五個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-W-NOfArg-AA-OBzl的抗炎活性。
[0018] 本發(fā)明的第六個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-Ns-N02-Arg-AA-0Bzl的抗血栓活性。
【附圖說(shuō)明】
[0019]圖 1. 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-NG-N02-Arg_AA-0Bzl的合成路線.i)HCH0， H20,H2S04,65°C;ii)Me0H，S0C12,0°C;iii)DMF，NMM，KMn04 ;iv)Na0H，H20,0°C;v)二環(huán)己基 碳二亞胺（DCC)，1-羥基苯并三唑（HOBt)，N-甲基嗎啉（NMM)，DMF;vi)Na0H，H20,0°C;vii) 二環(huán)己基碳二亞胺（DCC)，1-羥基苯并三唑（HOBt)，N-甲基嗎啉（NMM)，DMF;8a中AA= L-Thr殘基，8b中AA=L-Ser殘基，8c中AA=L-Asp(OBzl)殘基。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它 們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0021] 實(shí)施例1制備6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸（2)
[0022] 冰浴下將15. 0g(96. 8mmol)L_組氨酸置于250mL圓底燒瓶中，加入50mL蒸饋水， 再逐滴加入3mL濃硫酸，攪拌均勻，完全溶解后加入15mL甲醛溶液（40% )，60°C反應(yīng)8小 時(shí)。反應(yīng)物冷卻至室溫，用濃氨水在冰浴下調(diào)pH至6,有大量無(wú)色沉淀析出，過(guò)濾。濾餅用 水洗并干燥，得到15g(93% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z)167[M+H]+。
[0023] 實(shí)施例2制備6S-4, 5,6, 7-四氫-3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸甲酯（3)
[0024]冰浴下在500mL茄瓶里加100mL甲醇，用恒壓漏斗緩慢滴加10mL二氯亞砜，1小 時(shí)后加入5.(^(30臟〇1)63-4,5,6,7-四氫-3!1-咪唑并[4,5-(3]吡啶-6-羧酸（2)，室溫反 應(yīng)3天后，TLC顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘留物加甲醇溶解并減壓濃縮。該操 作重復(fù)3次得無(wú)色泡狀固體，再加乙醚抽干重復(fù)3次得無(wú)色粉末，最后用甲醇/乙醚重結(jié)晶 得4.2g(55%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z)181[M+H]+。
[0025] 實(shí)施例3制備3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸甲酯（4)
[0026]冰浴下在 100mL茄瓶里加 2g(7.9mmol)6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑并[4,5-c] 吡啶-6-甲酸甲酯，加DMF使溶解。向該溶液中滴加lmL三乙胺調(diào)pH到8,分三次加入 1.5g(9. 4mmol)高錳酸鉀。反應(yīng)6小時(shí)后，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢。反應(yīng)物減壓濃縮至干，得到 的黑色固體用INHC1溶液溶解，冰浴下滴加2NNaOH溶液調(diào)pH到7,析出大量無(wú)色固體。 該固體以二氯甲烷/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得〇. 93g(66. 4% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固 體。ESI-MS(m/z) 177[M+H]+。
[0027] 實(shí)施例4制備3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸（5)
[0028]冰浴下在100mL茄瓶里加 3mLNaOH溶液（1. 5N)，lOmin后力卩入 0. 93g(5. 3mmol)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯（4)，反應(yīng)1小時(shí)后TLC顯示反應(yīng) 完畢，冰浴下向反應(yīng)液中滴加2NHC1溶液調(diào)pH到7,析出大量無(wú)色固體。該固體以二氯甲 烷/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得〇.56g(65% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/ z) 163[M+H]+。
[0029]實(shí)施例 5 制備3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-L-NG-N02-Arg-0Bzl(6)
[0030] 稱取194mg(l. 2mmol)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸于100mL茄形瓶中，加 入20mLDMF。在冰浴和攪拌下依次加入211mg(l. 6mmol)H0Bt及333mg(l. 6mmol)DCC，活化 30min。稱取 676mg(l. 4mmol)Tos·NhOArg-OBzl于 25mL小三角瓶中，用DMF溶解后，用 NMM調(diào)pH至7,然后將該溶液滴加至茄形瓶的反應(yīng)液中，最后用NMM調(diào)反應(yīng)液pH值至8。室 溫反應(yīng)過(guò)夜，TLC顯示反應(yīng)完畢后，反應(yīng)混合物減壓濃縮至干，殘留物加50mL二氯甲烷溶 解，過(guò)濾除去二環(huán)己基脲（D⑶)，濾液層依次用飽和NaHC03水溶液（20mLX3)和飽和NaCl 水溶液（20mLX3)各洗3遍，乙酸乙酯層用無(wú)水CaCl2干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，得到 的黃色油狀物經(jīng)硅膠柱層析純化（二氯甲烷/甲醇為洗脫劑），得到的淡黃色固體，經(jīng)二氯 甲烷/石油醚重結(jié)晶得200mg(37%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e)454[M-H]. Mpl84-186°C· [a]D25 = 12.2(c= 0· 12，甲醇hi-NMRGOOMHz，DMS0-d6)δ/ppm= 13. 19 (s，1H)，9. 04 (s，2H)，8. 57 (s，1H)，8. 52 (s，1H)，8. 26 (s，1H)，7. 44 (m，5H)，5. 18 (d，J= 15. 0Hz，2H)，4. 63(dd，J= 5Hz，J= 15Hz，1H)，3. 16(m，2H)，1. 95(m，2H)，1. 59(s，2H)。
[0031] 實(shí)施例6制備3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-L-Ns-N02-Arg(7)
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