一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及從其他海洋動物提取食用蛋白質(zhì)組合物，尤其是一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國的魷魚加工產(chǎn)量大，在加工成魷魚干、魷魚花、咸魷魚、罐頭及調(diào)味品等過程中，一般有15?20%的內(nèi)臟、皮、眼及眼窩等廢棄物產(chǎn)生。這些廢棄物含有豐富的蛋白質(zhì)及其它營養(yǎng)成分，極易腐爛變質(zhì)，并且其中含有某些重金屬，傳統(tǒng)的處理方法就是將其作為飼料原料或廢棄，其造成蛋白質(zhì)資源的極大浪費及環(huán)境污染。
[0003]目前，對魷魚內(nèi)臟綜合利用的研究范圍比較狹窄，主要是針對其含有的魚油和蛋白研究比較多，例如，劉政坤等以新鮮魷魚內(nèi)臟為原料，采用淡堿水解法提取魷魚內(nèi)臟油(魷魚內(nèi)臟油的提取研究.《中國油脂》2011年第36卷第9期)；尹青春等以魷魚內(nèi)臟為原料提取蛋白酶，為多種蛋白酶的混合物(魷魚內(nèi)臟蛋白酶的提取工藝研究.《現(xiàn)代食品科技》2012年第28卷第3期)，但是對魷魚內(nèi)臟中含有的多糖、糖蛋白等活性物質(zhì)的研究甚少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了克服現(xiàn)有魷魚內(nèi)臟作為飼料原料或廢棄造成蛋白質(zhì)資源浪費及環(huán)境污染的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種工藝合理、操作可行、提取糖蛋白純度高的利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法。
[0005]本發(fā)明解決其技術(shù)所采用的技術(shù)方案是:一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法，其特征在于:其經(jīng)過下列工藝步驟:
(1)原料選取與處理:選取新鮮的魷魚內(nèi)臟或者冷凍并解凍的新鮮魷魚內(nèi)臟為原料，清洗去除污物及雜質(zhì)，備用；
(2)丙酮脫脂:定量稱取步驟(1)中得到清洗后的魷魚內(nèi)臟放入蒸餾燒瓶，加入丙酮，其中，魷魚內(nèi)臟與丙酮的比例為1: 5?10 (m/v)，接上回流冷凝裝置；將蒸餾燒瓶放在水浴鍋中加熱，溫度控制50?65°C，直至燒瓶內(nèi)的丙酮溶液重新變得澄清，停止加熱，濾去上清液，收集濾渣，備用；
(3)破碎:將步驟(2)中得到的濾渣搗碎至泥狀，備用；
(4)浸提:將步驟(3)中得到搗碎的魷魚內(nèi)臟加入氯化鈉溶液進行浸提，得糖蛋白粗提液；
(5)透析:將步驟(4)中得到的糖蛋白粗提液在4°C條件下透析至無白色絮狀物出現(xiàn)，得脫鹽的糖蛋白透析液；
(6)鹽析:將步驟(5)中得到脫鹽的糖蛋白透析液采用硫酸銨鹽析法進行分級沉淀，得糖蛋白粗品；
(7)純化:將步驟(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝膠層析柱，用雙蒸水平衡、洗脫，流速控制在0.5?lml/s，收集吸收峰對應(yīng)的洗脫液，合并，得洗脫液； (8)成品:將步驟(7)得到的洗脫液冷凍干燥，得到純化魷魚內(nèi)臟糖蛋白。
[0006]進一步，所述的步驟(4)中浸提搗碎魷魚內(nèi)臟的氯化鈉溶液的濃度為3?5%，其中，料液比為1: 4?5，浸提時間為0.5?lh，浸提溫度為70?80°C。
[0007]進一步，所述的步驟(6)中硫酸錢鹽析法分級沉淀的濃度分級控制為20?40%、40 ?60%、60 ?80%。
[0008]本發(fā)明是魷魚內(nèi)臟采用丙酮熱浴脫脂后進行破碎，再采用氯化鈉溶液進行浸提，通過改變浸提過程中的料液比、浸提溫度、浸提時間及提取液鹽濃度，提高糖蛋白得率；再透析脫鹽，硫酸錢分級沉淀，得糖蛋白粗品；糖蛋白粗品上Sephadex G-100凝膠柱層析，對魷魚內(nèi)臟粗糖蛋白進行分離純化，得到純化魷魚內(nèi)臟糖蛋白。本發(fā)明實現(xiàn)了對魷魚內(nèi)臟的增值利用，提高漁業(yè)生產(chǎn)附加值，減少魷魚制品生產(chǎn)對環(huán)境的污染。其提取方法工藝合理，操作簡便可行，提取的糖蛋白純度高，適合規(guī)?；a(chǎn)。
【具體實施方式】
[0009]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0010]實施例1
一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法，其經(jīng)過下列工藝步驟:
(1)原料選取與處理:選取新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料，清洗去除污物及雜質(zhì)，備用；
(2)丙酮脫脂:定量稱取步驟(1)中得到清洗后的魷魚內(nèi)臟放入蒸餾燒瓶，加入丙酮，其中，魷魚內(nèi)臟與丙酮的比例為1: 8 (m/v)，接上回流冷凝裝置；將蒸餾燒瓶放在水浴鍋中加熱，溫度控制60°C，直至燒瓶內(nèi)的丙酮溶液重新變得澄清，停止加熱，濾去上清液，收集濾渣，備用；
(3)破碎:將步驟(2)中得到的濾渣使用組織搗碎機搗碎至泥狀，其中，搗碎機設(shè)置轉(zhuǎn)速2000rpm，循環(huán)8次，每次研磨60秒停止研磨10秒，以不出現(xiàn)絮狀、塊狀組織為準(zhǔn)；
(4)浸提:將步驟(3)中得到搗碎的魷魚內(nèi)臟加入氯化鈉溶液進行浸提，氯化鈉溶液的濃度為4%，料液比為1: 4.5，浸提時間為0.8h，浸提溫度為75°C，得糖蛋白粗提液；
(5)透析:將步驟⑷中得到的糖蛋白粗提液在4°C條件下透析，期間采用0.1 mol/L的硝酸銀檢驗透析液的脫鹽情況，直至無白色絮狀物出現(xiàn)，得脫鹽的糖蛋白透析液；
(6)鹽析:將步驟(5)中得到脫鹽的糖蛋白透析液采用硫酸銨鹽析法進行分級沉淀，得糖蛋白粗品；其中，硫酸銨濃度分級控制為20?40%、40?60%、60?80% ；
(7)純化:將步驟(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝膠層析柱，用雙蒸水平衡、洗脫，流速控制在0.5?lml/s，期間用核酸蛋白質(zhì)檢測儀檢測蛋白含量以及用苯酚-硫酸反應(yīng)檢測糖含量，收集吸收峰對應(yīng)的洗脫液，合并，得洗脫液；
(8)成品:將步驟(7)得到的洗脫液冷凍干燥，得到純化魷魚內(nèi)臟糖蛋白。
[0011]實施例2
一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法，其經(jīng)過下列工藝步驟:
(1)原料選取與處理:選取冷凍并解凍的新鮮魷魚內(nèi)臟為原料，清洗去除污物及雜質(zhì)，備用;
(2)丙酮脫脂:定量稱取步驟(1)中得到清洗后的魷魚內(nèi)臟放入蒸餾燒瓶，加入丙酮，其中，魷魚內(nèi)臟與丙酮的比例為1: 10 (m/v)，接上回流冷凝裝置；將蒸餾燒瓶放在水浴鍋中加熱，溫度控制50°C，直至燒瓶內(nèi)的丙酮溶液重新變得澄清，停止加熱，濾去上清液，收集濾渣，備用；
(3)破碎:將步驟(2)中得到的濾渣使用組織搗碎機搗碎至泥狀，以不出現(xiàn)絮狀、塊狀組織為準(zhǔn)；
(4)浸提:將步驟(3)中得到搗碎的魷魚內(nèi)臟加入氯化鈉溶液進行浸提，氯化鈉溶液的濃度為5%，料液比為1: 4，浸提時間為0.5h，浸提溫度為80°C，得糖蛋白粗提液；
(5)透析:將步驟⑷中得到的糖蛋白粗提液在4°C條件下透析，期間采用0.1 mol/L的硝酸銀檢驗透析液的脫鹽情況，直至無白色絮狀物出現(xiàn)，得脫鹽的糖蛋白透析液；
(6)鹽析:將步驟(5)中得到脫鹽的糖蛋白透析液采用硫酸銨鹽析法進行分級沉淀，得糖蛋白粗品；其中，硫酸銨濃度分級控制為20?40%、40?60%、60?80% ；
(7)純化:將步驟(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝膠層析柱，用雙蒸水平衡、洗脫，流速控制在lml/s，期間用核酸蛋白質(zhì)檢測儀檢測蛋白含量以及用苯酚-硫酸反應(yīng)檢測糖含量，收集吸收峰對應(yīng)的洗脫液，合并，得洗脫液；
(8)成品:將步驟(7)得到的洗脫液冷凍干燥，得到純化魷魚內(nèi)臟糖蛋白。
[0012] 實施例3
一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法，其經(jīng)過下列工藝步驟:
(1)原料選取與處理:選取新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料，清洗去除污物及雜質(zhì)，備用；
(2)丙酮脫脂:定量稱取步驟(1)中得到清洗后的魷魚內(nèi)臟放入蒸餾燒瓶，加入丙酮，其中，魷魚內(nèi)臟與丙酮的比例為1: 5 (m/v)，接上回流冷凝裝置；將蒸餾燒瓶放在水浴鍋中加熱，溫度控制65°C，直至燒瓶內(nèi)的丙酮溶液重新變得澄清，停止加熱，濾去上清液，收集濾渣，備用；
(3)破碎:將步驟(2)中得到的濾渣使用組織搗碎機搗碎至泥狀，備用；
(4)浸提:將步驟(3)中得到搗碎的魷魚內(nèi)臟加入氯化鈉溶液進行浸提，氯化鈉溶液的濃度為3%，料液比為1: 5，浸提時間為lh，浸提溫度為70°C，得糖蛋白粗提液；
(5)透析:將步驟⑷中得到的糖蛋白粗提液在4°C條件下透析，期間采用0.1 mol/L的硝酸銀檢驗透析液的脫鹽情況，直至無白色絮狀物出現(xiàn)，得脫鹽的糖蛋白透析液；
(6)鹽析:將步驟(5)中得到脫鹽的糖蛋白透析液采用硫酸銨鹽析法進行分級沉淀，得糖蛋白粗品；其中，硫酸銨濃度分級控制為20?40%、40?60%、60?80% ；
(7)純化:將步驟(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝膠層析柱，用雙蒸水平衡、洗脫，流速控制在0.5ml/s，期間用核酸蛋白質(zhì)檢測儀檢測蛋白含量以及用苯酚-硫酸反應(yīng)檢測糖含量，收集吸收峰對應(yīng)的洗脫液，合并，得洗脫液；
(8)成品:將步驟(7)得到的洗脫液冷凍干燥，得到純化魷魚內(nèi)臟糖蛋白。
【主權(quán)項】
1.一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法，其特征在于:其經(jīng)過下列工藝步驟: (1)原料選取與處理:選取新鮮的魷魚內(nèi)臟或者冷凍并解凍的新鮮魷魚內(nèi)臟為原料，清洗去除污物及雜質(zhì)，備用； (2)丙酮脫脂:定量稱取步驟(1)中得到清洗后的魷魚內(nèi)臟放入蒸餾燒瓶，加入丙酮，其中，魷魚內(nèi)臟與丙酮的比例為1: 5?10 (m/v)，接上回流冷凝裝置；將蒸餾燒瓶放在水浴鍋中加熱，溫度控制50?65°C，直至燒瓶內(nèi)的丙酮溶液重新變得澄清，停止加熱，濾去上清液，收集濾渣，備用； (3)破碎:將步驟(2)中得到的濾渣搗碎至泥狀，備用； (4)浸提:將步驟(3)中得到搗碎的魷魚內(nèi)臟加入氯化鈉溶液進行浸提，得糖蛋白粗提液； (5)透析:將步驟(4)中得到的糖蛋白粗提液在4°C條件下透析至無白色絮狀物出現(xiàn)，得脫鹽的糖蛋白透析液； (6)鹽析:將步驟(5)中得到脫鹽的糖蛋白透析液采用硫酸銨鹽析法進行分級沉淀，得糖蛋白粗品； (7)純化:將步驟(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝膠層析柱，用雙蒸水平衡、洗脫，流速控制在0.5?lml/s，收集吸收峰對應(yīng)的洗脫液，合并，得洗脫液； (8)成品:將步驟(7)得到的洗脫液冷凍干燥，得到純化魷魚內(nèi)臟糖蛋白。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法，其特征在于:所述的步驟(4)中浸提搗碎魷魚內(nèi)臟的氯化鈉溶液的濃度為3?5%，其中，料液比為1: 4?5，浸提時間為0.5?lh，浸提溫度為70?80°C。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法，其特征在于:所述的步驟(6)中硫酸銨鹽析法分級沉淀的濃度分級控制為20?40%、40?60%、60?80%。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用魷魚內(nèi)臟提取純化糖蛋白的方法。其主要解決現(xiàn)有魷魚內(nèi)臟作為飼料原料或廢棄造成蛋白質(zhì)資源浪費及環(huán)境污染的。其是新鮮或者冷凍并解凍的魷魚內(nèi)臟為原料，采用丙酮熱浴脫脂后進行破碎，再采用氯化鈉溶液進行浸提，得糖蛋白粗提液；糖蛋白粗提液再經(jīng)透析脫鹽、硫酸銨分級沉淀，得糖蛋白粗品；糖蛋白粗品上Sephadex？G-100凝膠柱層析，用雙蒸水平衡、洗脫，對魷魚內(nèi)臟粗糖蛋白進行分離純化，洗脫液冷凍干燥，得到純化魷魚內(nèi)臟糖蛋白干品。本發(fā)明實現(xiàn)了對魷魚內(nèi)臟的增值利用，減少魷魚廢棄物對環(huán)境的污染。其提取方法工藝合理，操作簡便可行，提取的糖蛋白純度高，適合規(guī)?；a(chǎn)。
【IPC分類】C07K1/30, C07K1/34, C07K1/36, C07K1/16
【公開號】CN105348370
【申請?zhí)枴緾N201510825314
【發(fā)明人】楊勁峰, 吳文惠, 張靜怡, 周喻
【申請人】榮成廣潤水產(chǎn)食品有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月24日