rDl、VirD2、VirE2濃度分別調(diào)整至90 μ g/μ 1 ；
[0039]S3、用限制性內(nèi)切酶酶切無毒廣譜抗病基因ΡΥΗ157和抗蟲基因CpTl后，分別連接到pBin438質(zhì)粒上構(gòu)建兩種外源質(zhì)粒DNA ；
[0040]S4、將所得兩種外源質(zhì)粒DNA分別重懸于質(zhì)粒DNA保護劑中，得外源質(zhì)粒DNA的濃度為1 μ g/ μ L的混合液；
[0041 ] S5、取步驟S2所得溶液中的一種或幾種共2 μ 1，依次加入含8 μ 1外源質(zhì)粒DNA的步驟S4所得的混合液、6 μ 1脂質(zhì)體，混合后，加入30 μ 1的緩沖液中，4°C放置2小時后，取出，通過花粉管通道法將目的基因?qū)敕謩e導(dǎo)入步驟S1所選擇的高粱品種中；
[0042]S5、選擇陽性植株，并獲取其種子，播前曬種2天，將所得的種子用0.2%的磷酸二氫鉀溶液或用5%廣枯寧水劑，25°C浸泡30分鐘，種子吸脹后撈起濾干后用拌種劑進行拌種處理；
[0043]S6、選取背風(fēng)向陽、肥沃疏松的菜園地，按4.5尺寬廂面提廂，廂溝0.5尺，長度按一畝大田用3斤種子播種，蓋土厚度1厘米，每公頃施入腐熟、發(fā)酵的農(nóng)家肥30至40立方米，底肥160千克，底肥由以下重量份的組分構(gòu)成:
[0044]草炭32份、沼氣渣32份、腐植酸銨13份、硅藻土 3份、氨基酸螯合鎂3份、一水硫酸鋅1份、氨基酸螯合錳3份、氨基酸螯合硼3份、聚天門冬氨酸2份、枯草芽孢桿菌2份、厚孢輪枝菌1份、印棟素0.15份、放線菌素0.1份、膠凍樣芽孢桿菌0.1份、固氮螺菌0.1份。
[0045]S7、早間苗在4葉時勻苗保留壯苗，疏密留稀，撥除病、弱、雜苗，5葉時按土壤肥力、施肥水平及播種密度每窩定苗2株，凈作每畝保證8200株或者套作每畝保證8300株；
[0046]S8、施肥管理:定苗后，每畝用清糞20-擔(dān)加尿素2公斤，追施提苗肥，結(jié)合除草進行中耕松土第一次，在撥節(jié)前以深斤追施撥節(jié)孕穗肥，并結(jié)合中耕培土第三次。
[0047]實施例3
[0048]S1、選用適宜當(dāng)?shù)胤N植，抗倒、分蘗弱、穗大、結(jié)實率高的優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)的高粱品種；
[0049]S2、將表達純化后的農(nóng)桿菌毒蛋白VirDl、VirD2、VirE2濃度分別調(diào)整至90-100 μ g/ μ 1 ；
[0050]S3、用限制性內(nèi)切酶酶切無毒廣譜抗病基因ΡΥΗ157和抗蟲基因CpTl后，分別連接到pBin438質(zhì)粒上構(gòu)建兩種外源質(zhì)粒DNA ；
[0051 ] S4、將所得兩種外源質(zhì)粒DNA分別重懸于質(zhì)粒DNA保護劑中，得外源質(zhì)粒DNA的濃度為3 μ g/ μ L的混合液；
[0052]S5、取步驟S2所得溶液中的一種或幾種共2 μ 1，依次加入含8 μ 1外源質(zhì)粒DNA的步驟S4所得的混合液、6 μ 1脂質(zhì)體，混合后，加入30 μ 1的緩沖液中，4°C放置2小時后，取出，通過花粉管通道法將目的基因?qū)敕謩e導(dǎo)入步驟S1所選擇的高粱品種中；
[0053]S5、選擇陽性植株，并獲取其種子，播前曬種3天，將所得的種子用0.2%的磷酸二氫鉀溶液或用5%廣枯寧水劑，40°C浸泡30分鐘，種子吸脹后撈起濾干后用拌種劑進行拌種處理；
[0054]S6、選取背風(fēng)向陽、肥沃疏松的菜園地，按5尺寬廂面提廂，廂溝0.8尺，長度按一畝大田用3斤種子播種，蓋土厚度1-3厘米，每公頃施入腐熟、發(fā)酵的農(nóng)家肥30至40立方米，底肥210千克，底肥由以下重量份的組分構(gòu)成:
[0055]草炭38份、沼氣渣38份、腐植酸銨22份、硅藻土 9份、氨基酸螯合鎂4份、一水硫酸鋅5份、氨基酸螯合錳5份、氨基酸螯合硼4份、聚天門冬氨酸3份、枯草芽孢桿菌3份、厚孢輪枝菌3份、印棟素2.5份、放線菌素0.3份、膠凍樣芽孢桿菌0.3份、固氮螺菌0.3份。
[0056]S7、早間苗在4葉時勻苗保留壯苗，疏密留稀，撥除病、弱、雜苗，6葉時按土壤肥力、施肥水平及播種密度每窩定苗2-3株，凈作每畝保證13000株或者套作每畝保證9600株;
[0057]S8、施肥管理:定苗后，每畝用清糞30擔(dān)加尿素3公斤，追施提苗肥，結(jié)合除草進行中耕松土第一次，在撥節(jié)前以深斤追施撥節(jié)孕穗肥，并結(jié)合中耕培土第三次。
[0058]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種高粱品種選育及其栽培方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、選用適宜當(dāng)?shù)胤N植，抗倒、分蘗弱、穗大、結(jié)實率高的優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)的高粱品種； 52、將表達純化后的農(nóng)桿菌毒蛋白VirDl、VirD2、VirE2濃度分別調(diào)整至90-100μ g/μ I ； 53、用限制性內(nèi)切酶酶切無毒廣譜抗病基因ΡΥΗ157和抗蟲基因CpTI后，分別連接到pBin438質(zhì)粒上構(gòu)建兩種外源質(zhì)粒DNA ； 54、將所得兩種外源質(zhì)粒DNA分別重懸于質(zhì)粒DNA保護劑中，得外源質(zhì)粒DNA的濃度為1-3 μ g/ μ L的混合液； 55、取步驟S2所得溶液中的一種或幾種共2μ 1，依次加入含8 μ I外源質(zhì)粒DNA的步驟S4所得的混合液、6 μ I脂質(zhì)體，混合后，加入30 μ I的緩沖液中，4°C放置2小時后，取出，通過花粉管通道法將目的基因?qū)敕謩e導(dǎo)入步驟SI所選擇的高粱品種中； 55、選擇陽性植株，并獲取其種子，播前曬種2-3天，將所得的種子用0.1-0.2%的磷酸二氫鉀溶液或用3-5%廣枯寧水劑，25°C -40°C浸泡20-30分鐘，種子吸脹后撈起濾干后用拌種劑進行拌種處理； 56、選取背風(fēng)向陽、肥沃疏松的菜園地，按4.5-5尺寬廂面提廂，廂溝0.5-0.8尺，長度按一畝大田用3斤種子播種，蓋土厚度1-3厘米，每公頃施入腐熟、發(fā)酵的農(nóng)家肥30至40立方米，底肥160-210千克，底肥由以下重量份的組分構(gòu)成: 草炭32-38份、沼氣渣32-38份、腐植酸銨13-22份、硅藻土 3_9份、氨基酸螯合鎂3_4份、一水硫酸鋅1-5份、氨基酸螯合錳3-5份、氨基酸螯合硼3-4份、聚天門冬氨酸2-3份、枯草芽孢桿菌2-3份、厚孢輪枝菌1-3份、印棟素0.15-2.5份、放線菌素0.1-0.3份、膠凍樣芽孢桿菌0.1-0.3份、固氮螺菌0.1-0.3份。 57、早間苗在3-4葉時勻苗保留壯苗，疏密留稀，撥除病、弱、雜苗，5-6葉時按土壤肥力、施肥水平及播種密度每窩定苗2-3株，凈作每畝保證8200-13000株或者套作每畝保證8300-9600 株； 58、施肥管理:定苗后，每畝用清糞20-30擔(dān)加尿素2-3公斤，追施提苗肥，結(jié)合除草進行中耕松土第一次，在撥節(jié)前以深斤追施撥節(jié)孕穗肥，并結(jié)合中耕培土第三次。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱品種選育及其栽培方法，其特征在于，所述緩沖液包含7-13mmol/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸，0.3-0.7mmol/L 二氨基乙烷四乙酸，7-13mmol/L氯化鈉、0.015 μ g.μ I ^0.055 μ g.μ I 1甲基磺酸乙酯。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱品種選育及其栽培方法，其特征在于，質(zhì)粒DNA保護劑由氫氧化鋁溶膠保護劑、磷酸鈣保護劑和TWeen20保護劑按體積比2: 3: I混合所得。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱品種選育及其栽培方法，其特征在于，限制性內(nèi)切酶為限制性內(nèi)切酶Hind II1.+EcoR I酶。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱品種選育及其栽培方法，其特征在于，所述拌種劑包括35-65%核苷酸鹽和35-65%的中微量元素，所述核苷酸鹽包括核糖核酸堿水解后得到的Y -腺苷酸二鉀或鈉，5'-鳥腺苷酸二鉀或鈉，5'-胞苷酸二鉀或鈉和Y -尿苷酸二鉀，所述中微量元素包括Mn、B、Fe、Zn、Cu和Mo，所述Mn: B: Fe: Zn: Cu: Mo的重量比為3:1: 2:1: 2: 2。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高粱品種選育及其栽培方法，包括如下步驟：通過花粉管通道法將無毒廣譜抗病基因PYH157和抗蟲基因CpTI導(dǎo)入高粱中后，選擇陽性植株，并獲取其種子，將種子經(jīng)曬種、浸種和拌種處理后進行播種，施農(nóng)家肥和底肥，早間苗勻苗保留壯苗，疏密留稀，撥除病、弱、雜苗，5-6葉時按土壤肥力、施肥水平及播種密度每窩定苗2-3株，定苗后，追施提苗肥，結(jié)合除草進行中耕松土第一次，在撥節(jié)前以深斤追施撥節(jié)孕穗肥，并結(jié)合中耕培土第三次。本發(fā)明提高了高粱作物的抗病能力，使高粱的生長周期縮短，成熟速度更快，植株的抗病能力強，同時產(chǎn)量提高，品質(zhì)更好，莢果飽滿，病蟲害明顯減少。
【IPC分類】A01H5/00, A01G1/00, C12N15/82
【公開號】CN105349573
【申請?zhí)枴緾N201510906040
【發(fā)明人】王淑芳, 冀月林, 劉建明, 楊存良, 武江鑫, 于偉, 邢玉偉, 高海生, 武江濤, 賈彥青, 王雄飛, 師麗曉, 聶建國, 張建萍, 柴小麗, 高美懷, 王宏偉, 賈變, 武龍, 王鑫, 郭俊峰, 丁一, 王云龍, 張鵬義, 段立功
【申請人】山西省原平市雙惠種業(yè)有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年12月5日