一種新的烏蘇烷型二萜類(lèi)化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從石見(jiàn)穿的干燥地上部分中分離得到的一種 烏蘇烷型二萜類(lèi)化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 石見(jiàn)穿系唇形科鼠尾草屬華鼠尾草Salvia chinensis benth的干燥地上部分，亦 名紫參、五鳳花、小丹參、月下紅、烏沙草、墨面風(fēng)、大發(fā)汗、石大川、山縫拿、紫丹花、紅根參、 田芹菜、活血草，廣泛分布于江蘇、安徽、江西、湖北、湖南、廣東、廣西、四川、云南等地。其性 涼，味微苦、辛、平，歸胃、肝、肺經(jīng)，有清熱解毒、活血理氣止痛等功能，民間主治噎嗝、痰喘、 肝炎、赤白帶、癰腫、瘰疬等癥。歷代典籍均對(duì)其功效有記載，認(rèn)為其"主骨痛，大風(fēng)癰腫" (《本草綱目》），"治瘰疬"（《江蘇藥材志》），"治噎嗝，痰飲氣喘"（《蘇州本產(chǎn)藥材》），"活血化 瘀、止血、解毒、消腫"（《浙江民間常用草藥》），"活血止血，清熱解毒"（《安徽中醫(yī)藥》），"治 黃疸型肝炎，濕熱帶下，痛經(jīng)，菌痢，外治面神經(jīng)麻痹，乳腺炎，癤腫，跌打損傷等"（《浙江藥 用植物志》）。
[0003] 到目前為止，從石見(jiàn)穿中分離出的化學(xué)成分已達(dá)30多種，主要包括多糖類(lèi)、萜類(lèi)、 甾醇類(lèi)、多酚類(lèi)等。
[0004] 石見(jiàn)穿具有抗炎、抗氧化和抗腫瘤等作用?！吨兴幋筠o典》、《全國(guó)中草藥匯編》均記 載了石見(jiàn)穿、糯稻根等合用為方，用于治療急、慢性肝炎均取得了顯著療效。石見(jiàn)穿作為常 用的"抗癌中藥"被廣泛應(yīng)用于臨床。石見(jiàn)穿在婦科疾病治療中也得到了廣泛應(yīng)用，除清熱 利濕外，還具有活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)之功效。因其藥性平和，不燥不寒，故被廣泛應(yīng)用于因血 熱、濕熱所致崩漏、月經(jīng)先期盆腔炎、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤、卵巢囊腫、痛經(jīng)等病，療效 顯著。此外，《浙江民間常見(jiàn)草藥》記載紫參根9~12g，羊乳塊根30g，用于治療淋巴結(jié)結(jié)核， 療效顯著?！墩憬幱弥参飳W(xué)》將本品用于治療面神經(jīng)麻痹、乳腺炎、瘡腫等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從石見(jiàn)穿的干燥地上部分中分離得到的一種烏蘇烷型 二萜類(lèi)化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將石見(jiàn)穿的干燥地上部分 粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用5 %乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75 %乙醇洗脫8個(gè)柱 體積，收集75 %洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中75 %乙醇洗脫濃縮 物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、30:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到 4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15:1、8:1和5:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液 減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進(jìn)一步地，步驟(a)中，用85%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011]進(jìn)一步地，所述大孔樹(shù)脂為AB-8型大孔吸附樹(shù)脂。
[0012] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物(I)和藥學(xué)上可接受的載體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療急性T淋巴細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。
[0014]所述的藥物組合物在制備治療急性T淋巴細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。
[0015]本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016]該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對(duì) 人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017]所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過(guò)口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無(wú)菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)計(jì)算E⑶和實(shí)驗(yàn)E⑶圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性?xún)?nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021 ] 主要材料、試劑來(lái)源及儀器類(lèi)型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化學(xué)試劑有限 公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0024] (a)將石見(jiàn)穿的干燥地上部分(8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取(30LX3次），合 并提取液，濃縮至無(wú)醇味(6L)，依次用石油醚(6LX3次）、乙酸乙酯(6LX3次)和水飽和的正 丁醇(6LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(375g)和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔樹(shù)脂除雜，先用5%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75%乙 醇洗脫8個(gè)柱體積，收集75%洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫濃縮物（129g);(c)步驟(b) 中75 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1 (8個(gè)柱體積）、30:1 (8個(gè)柱體 積）、15:1(8個(gè)柱體積)和8:1(10個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步 驟(c)中組分4(27g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1(8個(gè)柱體積）、8:1(10個(gè) 柱體積)和5:1(8個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2 (15g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~12個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I) (40mg)。
[0025] 結(jié)構(gòu)確證：白色結(jié)晶（甲醇），熔點(diǎn)326°C;HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z399.2120， 結(jié)合核磁特征可得分子式為C22H32O5，不飽和度為7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)5H(ppm，DMS0_d6， 400MHz):H-l(2.41，d)，H-l(2.17，d)，H-3(4.15，s)，H-5(1.23，m)，H-6(1.24，m)，H-6(1.42， m)，H-7(1.53，m)，H-7(1.37，m)，Η-9(2·14，br，s)，H-11(5.71，dd，J=10.2，2·0)，H-12 (6.08，dd，J=10.2,3.0)，H-15(1.30，m)，H-15(l. 19，m)，H-16(2.25，ddd，J=14.2,5.2， 2.2)，H-19(4.64，s)，H-21(1.53，m)，H-21(1.32，m)，H-22(1.55，m)，H-22(1.74，m)，H-23 (0.97，s)，H-24(0.83，s)，H-25(0.95，s)，H-26(0.73，s)，H-27(0.98，s)，H-29(1.01，s)，H-30 (0 · 91，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ。(ppm，DMS〇-d6，100MHz): 51 · 6 (CH2，1 -C)，210 · 7 (C，2-C)， 82.8(CH，3-C)，45.1(C，4-C)，47.3(CH，5-C)，17.6(CH2,6-C)，32.5(CH2,7-C)，40.4(C，8-C)， 52.4(CH，9-C)，37.8(C，10-C)，129.1(CH，n-C)，122.9(CH，12-C)，134.5(C，13-C)，40.8(C， 14-C)，25.2(CH2，15-C)，23.9(CH2，16-C)，43.7(C，17-C)，132.6(C，18-C)，84.7(CH，19-C)， 35.4(C,20-C), 32.3(CH2,21-C), 34.2(CH2,22-C), 27.8(CH3,23-C), 21.1(CH3,24-0,19.0 (CH3,25-C)，17.1(CH3,26-C)，19.2(CH3,27-C)，177.7(C，28-C)，27.6(CH3,29-C)，22.8(CH3， 30-C);碳原子標(biāo)記參見(jiàn)圖1。紅外光譜表明該化合物含有羥基（3358CHT1)和y-內(nèi)酯羰基 (1778cm-Oc/H-NMR譜數(shù)據(jù)顯示七個(gè)甲基信號(hào)[δΗ0·73(Μθ-26)，0.83(Me-24)，0· 91 (Me-30)， 0.95(]\^-25)，0.97(]\^-23)，0.98(]\^-27)和1.01(]\^-29)]，兩個(gè)含氧次甲基信號(hào)[5!14.15 (8，!1-3)，4.64(8，!1-19)]和兩個(gè)烯屬質(zhì)子[3!15.71((1(1，了=10.2,2.0!^，!1-11)和6.08((1(1，了 =10.2，3.OHz，H-l2)]。13CNMR和DEPT譜顯示30個(gè)共振碳信號(hào)，其中包括兩個(gè)含氧次甲基[δ C82.8(C-3)和84.7(019)]，四個(gè)烯屬碳[δ122·9(012)，129·l(C-ll)，132.6(C-18)和 134.5(013)]和兩個(gè)羰基碳[5(：177.7((：-28)和210.7((：-2)]。一個(gè)酯羰基信號(hào)[5(：177.7((：-28)]和兩個(gè)碳信號(hào)[SC43.7(C-17)和84.7(C-19)]說(shuō)明該化合物存在一個(gè)γ內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。HMBC 譜中出-22與(：-28，!1-19與(：-18，以及16-29與(：-19的相關(guān)性驗(yàn)證了28，19-這個(gè)官能團(tuán)的連 接。此外，C-3的化學(xué)位移(SC82.8)表明存在一個(gè)羥基。上述數(shù)據(jù)表明該化合物為烏蘇烷型 二萜化合物。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類(lèi)型核磁數(shù)據(jù)，可基本 確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致（圖 2)〇
[0026]實(shí)施例2:化合物（I)藥理作用試驗(yàn)[0027] 一、材料和儀器
[0028]急性T淋巴細(xì)胞白血病Molt4細(xì)胞由暨南大學(xué)血液病研究所惠贈(zèng);慢性粒細(xì)胞白血 病細(xì)胞K562細(xì)胞由暨南大學(xué)由生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室惠贈(zèng)。化合物（I)為自制，HPLC 歸一化純度大于98%，用DMS0分析純?nèi)芙馀渲瞥?.5yg/mL溶液備用。DMEM/F12培養(yǎng)基粉、羥 乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)、四苯基氮哇藍(lán)試劑（MTT)購(gòu)于美國(guó)Gibeo公司。新生牛血清 (NewbornCalfSerum)購(gòu)于中國(guó)杭州四季青公司。青霉素（Peni