一種高純度大蒜素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種大蒜提取物中有效成分的制備方法，特別涉及一種高純度大蒜素 的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 大蒜素(Allicin)是從蔥科蔥屬植物大蒜(AlliumSativumL.)的鱗莖(大蒜頭） 中提取的一種有機硫化合物，也存在于洋蔥和其他蔥科植物中。大蒜素為淡黃色油狀液體， 性質(zhì)很不穩(wěn)定，對熱、酸、堿不穩(wěn)定，在極性溶劑(如水）中易分解。大蒜素具有較強的抑菌殺 菌作用，對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌等病原菌都有抑制作 用;且能降低血脂，并對膽固醇有較好的降低作用。大蒜素多應(yīng)用于食品添加劑和生物醫(yī)藥 方面，可以增加食品的風(fēng)味，并用于一些病癥的防治。
[0003] 目前市場上的大蒜素制品多為大蒜素腸溶膠丸、大蒜素膠囊和大蒜素片。大蒜素 有較好的市場應(yīng)用前景，現(xiàn)在高純度大蒜素的供應(yīng)還遠遠跟不上需求。市面上的大蒜素提 取物廣品多為一定比例的大蒜素提取物粉末等，可作為制備純品大蒜素的良好材料。
[0004] 目前，關(guān)于純品大蒜素制備的發(fā)明專利并不多，其中昝向明的發(fā)明專利《一種提取 高純度大蒜素的方法及其裝置》（201110437285.1)中提到了大蒜素的純化制備方法，得到 了較高純度的大蒜素?，F(xiàn)在關(guān)于制備高純度大蒜素的專利中，天然來源的操作都較為繁瑣， 提取制備工藝成本較高;而且純度不高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對上述問題，為降低成本，簡化工藝，本發(fā)明提供了一種高純度大蒜素的制備方 法。
[0006] 為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)： 一種高純度大蒜素的制備方法，它包括以下步驟： (1) 冷水溶解大蒜素提取物，并離心，過濾，獲得含有大蒜素的水溶液； (2) 選用反相固相萃取柱，用甲醇和雙蒸水對萃取柱進行活化； (3) 將所述含有大蒜素的水溶液上樣，用甲醇淋洗萃取柱； (4) 再用甲醇洗脫萃取柱，接收洗脫液； (5) 用HPLC法對制備的大蒜素純品進行純度鑒定和濃度檢測； (6) 凍干所述洗脫液，得大蒜素成品。
[0007] 進一步的:所述步驟(1)中大蒜素提取物選用1%_5%大蒜素提取物。
[0008] 進一步的:所述步驟(1)中大蒜素提取物與冷水的質(zhì)量比為2:25-3:25。
[0009] 進一步的:所述步驟(1)中過濾為使用0.22μηι水系濾膜進行過濾。
[0010] 進一步的：所述步驟(2)中反相固相萃取柱為BAKERBONDspe-lgC-18小柱。
[0011] 進一步的：所述步驟(2)用10-15mL甲醇和10-15mL雙蒸水對萃取柱進行活化，流 速均為lmL/min。
[0012]進一步的:所述步驟(3)中淋洗柱子同時用真空栗抽吸柱子獲得流速。
[0013] 進一步的：所述步驟（3)中上樣量為1.0-2.OmL，用體積比為30%的甲醇水溶液 7.2-7.5mL淋洗萃取柱，流速為lmL/min。
[0014]進一步的:所述步驟(4)用體積比為90%的甲醇水溶液2.0-2.5mL洗脫萃取柱。[0015]進一步的:所述步驟(5)中HPLC的條件為： 色譜柱:〇DSC18 4.6l250mm，5ym; 流動相：甲醇：1%甲酸水溶液=60:40 (V/V); 流速:〇.8mL/min; 柱溫:30C; 進樣量:20μΜ檢測波長:254nm〇
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點和技術(shù)效果是:本發(fā)明采用市場上已有的大蒜素 比例提取物作為原料，采用特有的固相萃取法制備高純度大蒜素;進一步選擇確定固相萃 取中合適的洗脫劑，使大蒜素從大極性的溶液置換到小極性的有機溶劑中，利用極性跨度 大的洗脫劑，可以用其最小的溶劑量，獲得最大的溶質(zhì)，使得獲得的大蒜素更加穩(wěn)定，從而 提高了大蒜素的回收率和純度;而且本發(fā)明還可以濃縮終產(chǎn)物，因為通過上樣步驟可以使 柱子滿載，然后淋洗掉雜質(zhì)，使產(chǎn)物盡可能保留，最重要在于洗脫步驟，用較少的溶劑洗下 絕大部分的產(chǎn)物，從而使最后產(chǎn)物濃度高于上樣時的濃度。
[0017]大蒜素作為食品添加劑和藥物制劑活性成分，具有獨特的藥理活性，在降血脂、提 高自身免疫力、殺菌抑菌、抗感冒、抗衰老、防癌等方面都有顯著的功效，在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有 廣泛的研究。通過采用本發(fā)明的技術(shù)方案，大大簡化了大蒜素制備的操作工藝，降低了工藝 成本;制備的大蒜素純度較高，且能以較高的濃度被洗脫下來?？蛇M一步制備標(biāo)準(zhǔn)品或作為 藥品制劑的有效成分。
【具體實施方式】
[0018]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進一步詳細的說明。
[0019] 實施例1 本實施例所述的高純度大蒜素的制備方法包括以下步驟： (1) 稱取2%大蒜素提取物(市售商品，前面的比例代表大蒜素的質(zhì)量含量)400mg，5mL 冷水溶解，并劇烈震蕩30s，靜置lOmin，3000rpm離心5min，過0.22μπι水系濾膜，獲得含有大 蒜素的水溶液； (2) 選用BAKERBONDspe-lgC-18小柱，用10mL甲醇和10mL雙蒸水對柱子進行活化，流 速為lmL/min; (3) 將所述含有大蒜素的水溶液上樣1.5mL，用體積比為30%的甲醇水溶液7.5mL淋洗 萃取柱，流速為lmL/min; (4) 用體積比為90%的甲醇水溶液2mL洗脫萃取柱，流速為lmL/min，10mL刻度試管接洗 脫液； (5) 用HPLC方法檢測洗脫液中大蒜素的純度及濃度； HPLC的檢測條件為： 色譜柱:〇DSC18 4.6l250mm，5ym; 流動相：甲醇：1%甲酸水溶液=60:40 (V/V); 流速:〇.8mL/min; 柱溫:30C; 進樣量:20μΜ檢測波長:254nm〇
[0020] (6)凍干洗脫液，得到本發(fā)明所述大蒜素成品。
[0021] 實施例2 本實施例所述的高純度大蒜素的制備方法包括以下步驟： (1) 稱取2%大蒜素提取物400mg，5mL冷水溶解，并劇烈震蕩30s，靜置lOmin，3000rpm離 心5min，過0.22μηι水系濾膜，獲得含有大蒜素的水溶液； (2) 選用BAKERBONDspe-lgC-18小柱，用10mL甲醇和10mL雙蒸水對柱子進行活化，流 速為lmL/min; (3) 將所述含有大蒜素的水溶液上樣lmL，用體積比為30%的甲醇水溶液7.2mL淋洗萃 取柱，流速為lmL/min; (4) 用體積比為80%的甲醇水溶液2mL洗脫萃取柱，流速為lmL/min，10mL刻度試管接洗 脫液； (5) 用HPLC方法檢測洗脫液中大蒜素的純度及濃度，檢測條件同實施例1; (6) 凍干洗脫液，得到本發(fā)明所述大蒜素成品。
[0022] 實施例3 本實施例所述的高純度大蒜素的制備方法包括以下步驟： (1) 稱取2%大蒜素提取物500mg，5mL冷水溶解，并劇烈震蕩30s，靜置lOmin，3000rpm離 心5min，過0.22μηι水系濾膜，獲得含有大蒜素的水溶液； (2) 選用BAKERBONDspe-lgC-18小柱，用15mL甲醇和15mL雙蒸水對柱子進行活化，流 速為lmL/min; (3) 將所述含有大蒜素的水溶液上樣2.OmL，用如上30%的甲醇溶液7.5mL淋洗萃取 柱，流速為lmL/min，抽干柱子(具體步驟就是用真空栗抽吸柱子獲得流速，抽干即為把柱子 里的溶劑抽干流盡）； (4) 用如上90%的甲醇溶液2.5mL洗脫萃取柱，流速為lmL/min，10mL刻度試管接洗脫 液； (5) 用HPLC方法檢測洗脫液中大蒜素的純度及濃度，檢測條件同實施例1; (6) 凍干洗脫液，得到本發(fā)明所述大蒜素成品。
[0023]本發(fā)明通過固相萃取方法制備得到的高純度大蒜素，結(jié)果見表1。
[0024]表1本發(fā)明制得的所述大蒜素的測定結(jié)果
實驗結(jié)果如表1所示，本發(fā)明提供的高純度大蒜素的制備方法，洗脫液中大蒜素濃度達 到lmg/mL左右，純度在90%以上，回收率也較高(>76%)。
[0025]以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其進行限制；盡管參照前述實 施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，依然可以對前述實施 例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進行等同替換;而這些修改或替 換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明所要求保護的技術(shù)方案的精神和范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:它包括以下步驟： (1) 冷水溶解大蒜素提取物，并離心，過濾，獲得含有大蒜素的水溶液； (2) 選用反相固相萃取柱，用甲醇和雙蒸水對萃取柱進行活化； (3) 將所述含有大蒜素的水溶液上樣，用甲醇淋洗萃取柱； (4) 再用甲醇洗脫萃取柱，接收洗脫液； (5) 用HPLC法對制備的大蒜素純品進行純度鑒定和濃度檢測； (6) 凍干所述洗脫液，得大蒜素成品。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:所述步驟（1)中大蒜 素提取物選用1 %_5%大蒜素提取物。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:所述步驟(1)中大 蒜素提取物與冷水的質(zhì)量比為2:25-3:25。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:所述步驟（1)中過濾 為使用〇. 22μηι水系濾膜進行過濾。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)中反相 固相萃取柱為BAKERBONDspe-lgC-18小柱。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)用10-15mL甲醇和10-15mL雙蒸水對萃取柱進行活化，流速均為lmL/min。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:所述步驟(3)中淋洗 柱子同時用真空栗抽吸柱子獲得流速。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:所述步驟(3)中上樣 量為1.0-2.OmL，用體積比為30%的甲醇水溶液7.2-7.5mL淋洗萃取柱，流速為lmL/min。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:所述步驟(4)用體積 比為90%的甲醇水溶液2.0-2.5mL洗脫萃取柱。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大蒜素的制備方法，其特征在于:所述步驟(5)中HPLC 的條件為： 色譜柱：〇DSC18 4.6l250mm，5ym; 流動相：甲醇：1%甲酸水溶液=60:40 (V/V); 流速:〇.8mL/min; 柱溫:30C; 進樣量:20μΜ 檢測波長:254nm〇
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種高純度大蒜素的制備方法，具體步驟如下：將大蒜素提取物用冷水溶解，靜置、離心、過膜；隨后用固相萃取法純化制備，并用HPLC法進行純度鑒定和濃度測定。本發(fā)明采用特有的固相萃取法制備高純度大蒜素；進一步選擇確定固相萃取中合適的洗脫劑，使大蒜素從水相溶液置換到有機溶劑中，提高了大蒜素的穩(wěn)定性；而且本發(fā)明還可以間接濃縮終產(chǎn)物，提高了大蒜素的回收率和純度。通過采用本發(fā)明的技術(shù)方案，大大簡化了大蒜素制備的操作工藝，降低了工藝成本；制備的大蒜素純度較高，且能以較高的濃度被洗脫下來?？蛇M一步制備標(biāo)準(zhǔn)品或作為藥品制劑的有效成分。
【IPC分類】C07C381/00
【公開號】CN105461604
【申請?zhí)枴緾N201510979792
【發(fā)明人】公丕賢
【申請人】青島自然珍萃生物科技有限公司
【公開日】2016年4月6日
【申請日】2015年12月24日