一種提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝三萜含量的方法
【技術(shù)領域】
[0001 ]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領域，更具體地，設及一種提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi) 靈芝Ξ祗含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 靈芝(Ganoderma lucidum)是擔子菌綱、多孔菌科、靈芝屬大型藥用真菌，在我國 已有數(shù)千年的應用歷史。現(xiàn)代科學已經(jīng)證實靈芝的化學成分有多糖類、Ξ祗類、核巧類、醬 醇類、生物堿類、巧喃類、氨基酸類等，其中最重要的藥用成分是靈芝Ξ祗類，具有抗腫瘤、 保肝、調(diào)節(jié)免疫力、降血糖等作用。提高靈芝Ξ祗含量對于靈芝的廣泛應用具有重要作用。
[0003] 目前研究表明，萊莉酸甲醋、乙酸、苯己比妥、咪康挫、阿司匹林、銅離子、儘離子等 能夠誘導靈芝Ξ祗合成。運些工作為研究靈芝Ξ祗生物合成的調(diào)控機制提供了很好的材料 和表型。但是考慮到靈芝作為一種藥食同源類中藥，如果想要促進其在醫(yī)學界廣泛使用的 話，必須考慮到發(fā)酵的安全性和經(jīng)濟性。萊莉酸甲醋作為一種植物激素，因存在健康安全隱 患而尚未被實際應用；苯己比妥和咪康挫是中樞神經(jīng)抑制藥，阿司匹林是一種解熱鎮(zhèn)痛藥， 運些藥物可能的殘留而對健康人產(chǎn)生不良影響；銅離子和儘離子是重金屬，可能引起人體 中毒。因此，有必要開發(fā)效果更加理想的發(fā)酵方法和條件，提高靈芝在菌絲體階段Ξ祗類化 合物含量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有技術(shù)的W上缺陷或改進需求，本發(fā)明提供了一種提高靈芝菌絲體液體發(fā) 酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其目的在于通過天然的木材降解物誘導靈芝菌絲體合成靈 芝Ξ祗，從而提高其產(chǎn)量，由此解決現(xiàn)有技術(shù)提高靈芝Ξ祗含量可能存在不良殘留物的技 術(shù)問題。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，按照本發(fā)明的一個方面，提供了一種提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵 的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其特征在于，包括W下步驟：
[0006] 擴大培養(yǎng)階段，按照質(zhì)量比例0.01-5 %向培養(yǎng)液中添加木材降解物，培養(yǎng)時間1-6 天。
[0007] 優(yōu)選地，所述提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其所述木材 降解物，含有微晶纖維素，其含量占培養(yǎng)液的0.01%至5%。
[000引優(yōu)選地，所述提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其所述木材 降解物，含有D-半乳糖，其含量占培養(yǎng)液的0.25%至1 %。
[0009] 優(yōu)選地，所述提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其所述擴大 培養(yǎng)階段為靈芝液體菌種培養(yǎng)開始24至72小時后。
[0010] 優(yōu)選地，所述提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其所述靈芝 液體菌種培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基包括:葡萄糖35克/升，蛋白腺5克/升，酵母粉5克/升，憐酸二氨 鐘0.883克/升，屯水合硫酸儀0.5克/升，維生素 B1 0.05克/升。
[0011] 優(yōu)選地，所述提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其所述靈芝 液體菌種培養(yǎng)接種量5 % -10 %，培養(yǎng)條件:轉(zhuǎn)速120-15化/min搖瓶培養(yǎng)。
[0012] 優(yōu)選地，所述提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其所述靈芝 液體菌種培養(yǎng)接種用種子液按照如下方法獲?。?br>[0013] -級種子培養(yǎng):按照體積比1:5向靈芝種子培養(yǎng)基中接種靈芝菌絲體，在溫度28-30°C，轉(zhuǎn)速120-15化/min，培養(yǎng)5天獲得一級種子液；
[0014] 二級種子培養(yǎng)，按照體積比1:10向靈芝中期培養(yǎng)基中接種一級種子液在溫度28-30°C，轉(zhuǎn)速120-15化/min,培養(yǎng)2天獲得所述靈芝液體菌種培養(yǎng)接種用種子液。
[0015] 優(yōu)選地，所述提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其所述靈芝 種子培養(yǎng)基含有:葡萄糖35g/L、蛋白腺5g/L、酵母粉2.5g/L、憐酸二氨鐘0.883g/L、屯水合 硫酸儀0.5g/L、W及維生素 B1 0.05g/L，pH為5.5;所述靈芝發(fā)酵培養(yǎng)基含有:葡萄糖35g/L、 蛋白腺5g/L、酵母粉5g/L、憐酸二氨鐘0.883g/L、屯水合硫酸儀0.5g/L、W及維生素 B1 0.05g/L，pK%5.5。。
[0016] 優(yōu)選地，所述提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，其所述靈芝 種子按照如下方法獲得：
[0017] 將靈芝菌種用PDA液體培養(yǎng)基，在溫度28-30°C且轉(zhuǎn)速120-15化/min下，活化7天， 獲得所述靈芝種子，所述PDA液體培養(yǎng)基每升含有：馬鈴馨浸提液1L、葡萄糖20g、W及瓊脂 15邑。
[0018] 總體而言，通過本發(fā)明所構(gòu)思的W上技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比，能夠取得下列有 益效果：
[0019] 本發(fā)明的目的是提供一種提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法， 在靈芝菌絲體液體發(fā)酵時添加微晶纖維素來誘導靈芝產(chǎn)生更多的胞內(nèi)靈芝Ξ祗。所使用的 誘導劑微晶纖維素安全并且價格低廉，可顯著提高胞內(nèi)靈芝Ξ祗的含量。
【附圖說明】
[0020] 圖1是本發(fā)明實施例1的測定結(jié)果；
[0021] 圖2是本發(fā)明實施例2的測定結(jié)果；
[0022] 圖3是本發(fā)明實施例3的測定結(jié)果；
[0023] 圖4是本發(fā)明實施例4的測定結(jié)果；
[0024] 圖5是本發(fā)明實施例5的測定結(jié)果；
[0025] 圖6是本發(fā)明實施例6的測定結(jié)果；
[0026] 圖7是本發(fā)明實施例7的測定結(jié)果。
【具體實施方式】
[0027] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，W下結(jié)合附圖及實施例，對 本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用W解釋本發(fā)明，并 不用于限定本發(fā)明。此外，下面所描述的本發(fā)明各個實施方式中所設及到的技術(shù)特征只要 彼此之間未構(gòu)成沖突就可W相互組合。
[0028] 本發(fā)明提供的提高靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量的方法，包括W下步 驟：
[00巧](1)種子活化:將靈芝菌種用PDA液體培養(yǎng)基在溫度28-30°C且轉(zhuǎn)速120-15化/min 下，活化7天，獲得所述靈芝種子。所述PDA液體培養(yǎng)基，每升含有：馬鈴馨浸提液1L、葡萄糖 20邑、^及瓊脂15邑。
[0030] (2)-級種子培養(yǎng):按照體積比1:5向靈芝種子培養(yǎng)基中接種靈芝菌絲體，在溫度 28-30°C，轉(zhuǎn)速120-15化/min,培養(yǎng)5天獲得一級種子液。所述靈芝種子培養(yǎng)基含有:葡萄糖 35g/L、蛋白腺5g/L、酵母粉2.5g/L、憐酸二氨鐘0.883g/L、屯水合硫酸儀0.5g/L、W及維生 素 B1 0.05g/L。
[0031] (3)二級種子培養(yǎng)，按照體積比1:10向靈芝中期培養(yǎng)基中接種一級種子液在溫度 28-30°C，轉(zhuǎn)速120-15化/min,培養(yǎng)2天獲得所述靈芝液體菌種培養(yǎng)接種用種子液。所述靈芝 中期培養(yǎng)基含有:葡萄糖35g/L、蛋白腺5g/L、酵母粉2.5g/L、憐酸二氨鐘0.883g/L、屯水合 硫酸儀〇.5g/L、W及維生素 B1 0.05g/L。
[0032] (4)靈芝液體發(fā)酵培養(yǎng)：向CYM培養(yǎng)基中接種靈芝液體菌種(3)，接種量5%-10%， 在溫度28-30°C，轉(zhuǎn)速120-15化/min,進行靈芝液體發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵，使靈芝菌絲體迅速生長 繁殖。所述CYM培養(yǎng)基的配方為:葡萄糖35克、蛋白腺5克、酵母粉5克、憐酸二氨鐘0.883克、 屯水合硫酸儀0.5克、W及維生素 B1 0.05克，用蒸饋水定容至1升，115°C滅菌25-40分鐘。
[0033] (5)擴大培養(yǎng)階段:在靈芝液體菌種培養(yǎng)0至120小時后，按照質(zhì)量比例0.01-5%向 培養(yǎng)液中添加木材降解物，培養(yǎng)1 -6天。
[0034] 所述木材降解物，含有W下成分中至少一種：
[0035] 微晶纖維素，其含量占培養(yǎng)液的0.5%至3.5% ;D-半乳糖，其含量占培養(yǎng)液的 0.25%至1%;0-鼠李糖，0.01%-1%。
[0036] 優(yōu)選地，按照質(zhì)量比例2 %向培養(yǎng)液中添加乳化劑，如%的吐溫-20，可有效提 高最終靈芝菌絲體液體發(fā)酵的胞內(nèi)靈芝Ξ祗含量。
[0037] W下為實施