, Pc-Hp), 7.47 (d, J = 8.0 Hz, 2H, Ar-H), 7.18 (s, 2H, Ar-H), 7.08 -7.02 (m, 1H, Ar-H), 6.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H, Ar-H), 6.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H, Ar-H), 6.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H, N-H), 4.93 (s, 1H, CH), 4.66 - 4.50 (m, 3H, CH, CH2), 4.29 (s, 1H, CH), 3.76-3.79 (m, 2H, CH2), 3.47 (s, 3H, CH 3), 2.86-2.83 (m, 1H, CH), 2.79 - 2.73 (m, 1H, CH), 2.73-2.67 (m, 1H, CH), 2.38 (d, J = 18.7 Hz, 1H, CH), 2.30-2.25 (m, 2H, CH2), 2.13-2.10 (m, 1H, CH), 2.01-1.97 (m, 1H, CH), 1.58-1.46 (m, 1H, CH), 1.27 - 1.11 (m, 2H, CH2), 1.01 (d, J = 4.0 Hz, 3H, CH3); MS (ESI): m/z 1265.8 (100%, [M] -); HRMS (ESI) m/z 計(jì) 算值為 C68H5iN9〇i3Zn [M+H]+ 1266.2931,實(shí)際值為 1266.2980. 實(shí)施例8 化合物αν)，即式αν)所示的羧基鋅酞菁-阿霉素偶聯(lián)物：
將1-(3, 3-二甲基-4-羧基-丙氧基)酞菁鋅(化合物(4))(0.036mmol)、阿霉素鹽酸鹽 (0.054mmol)、l-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(0.043mmol)、l-羥基苯并三 P坐（0.043mmol)、4-二甲氨基吡啶（0.043mmol)溶于溶劑DMF(8ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)?拌反應(yīng)20小時，通過薄層色譜監(jiān)控反應(yīng)終點(diǎn)。將反應(yīng)液慢慢倒入250ml冰水混合物中，有沉 淀析出，靜置，用微孔有機(jī)膜抽濾，水洗多次后收集固體，冷凍干燥，得粗產(chǎn)物藍(lán)灰色粉末。 粗產(chǎn)物用少量DMF溶解過Bio-Beads S-X3型凝膠柱，洗脫劑為DMF，收集流下來的第一個灰 色帶，蒸干，真空干燥，得到終產(chǎn)物灰色粉末，產(chǎn)率14%。
[0045] 產(chǎn)物在DMF中的最大吸收峰位于678nm處，在1%蓖麻油衍生物（Cremophor EL， wt%)水溶液中的最大吸收波長位于682nm處。
[0046] 產(chǎn)物的表征數(shù)據(jù)如下:MS (ESI): m/z 1215.8 (100%, [M-H] - )· 應(yīng)用實(shí)施例1 將本發(fā)明所述的羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物溶于DMF中，制成5μΜ的光敏藥劑，測試它們 的單線態(tài)氧產(chǎn)率。
[0047] 單線態(tài)氧產(chǎn)率的測定是采用以DPBF( 1，3-diphenyl isobenzofuran)為探針的穩(wěn)態(tài) 法。配制酞菁化合物（5μΜ)和DPBF(35yM)的混合溶液，利用2 610 nm的紅光（15mW/cm2)對其 進(jìn)行光照，隨著光照時間的增長，測定不同光照時間下DPBF在414nm處紫外吸收值的變化， 并以無取代鋅酞菁作為參照物計(jì)算單線態(tài)氧產(chǎn)率。具體實(shí)驗(yàn)步驟參見《Journal of Photochemistry and Photobiology A: Chemistry)), 2009, 201( 1) ,23-31 〇
[0048]上述波長大于610nm的紅光是通過500W的鹵素?zé)暨B接隔熱水槽加大于610nm的濾 光片來提供的。
[0049] 結(jié)果表明，實(shí)施例5-8所述的羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物，即化合物（I)、（II)、 (III)和(IV)，在DMF中的單線態(tài)產(chǎn)率分別為0.37、0.51、0.44、0.42，說明本發(fā)明所提供的羧 基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物是高效的光敏劑。
[0050] 應(yīng)用實(shí)施例2 將羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物溶于DMF中，制5μΜ的光敏藥劑，測試它們的光穩(wěn)定性。 [0051 ]將酞菁化合物的DMF溶液用波長2 610 nm的紅光（15mW/cm2)照射，測定不同照射 時間后，酞菁配合物在最大吸收波長處吸收值的變化，具體實(shí)驗(yàn)步驟參見《Journal of Photochemistry and Photobiology A：Chemistry)), 2009, 201( 1) ,23-31 〇
[0052]結(jié)果顯示，實(shí)施例5-8所述羧基鋅酞菁-阿霉素偶聯(lián)物在DMF中的光降解速率常數(shù) 分別為8 · 9 X 10-3、1 · 01 X 10-2、1 · 48 X 10-2、1 · 56 X 10-2/ min，四個酞菁化合物較無取代酞菁 鋅(光降解速率常數(shù)為1.78ΧΚΓ2/ min)穩(wěn)定，說明本發(fā)明所提供的偶聯(lián)物具有較高的光穩(wěn) 定性。
[0053] 應(yīng)用實(shí)施例3 將羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物溶于1%蓖麻油衍生物(Cremophor EL，wt%)水溶液中，制 成0.08mM的光敏藥劑，測試它們對人肝癌細(xì)胞HepG2的暗毒性(化學(xué)治療活性)和光動力活 性。
[0054]將0.08mM的光敏藥劑稀釋到細(xì)胞培養(yǎng)液中，制成不同濃度的含羧基酞菁鋅-阿霉 素偶聯(lián)物的細(xì)胞培養(yǎng)液。將癌細(xì)胞分別在含有不同濃度的羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物的培 養(yǎng)液中培養(yǎng)2小時，爾后棄培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞后，加入新的培養(yǎng)液(不含酞菁化合物）。 光照實(shí)驗(yàn)組，對細(xì)胞進(jìn)行紅光照射(所用激發(fā)光光源為波長大于610nm的紅光，照射30分鐘， 照射光的功率為15mw · cnf2);不照光組，將細(xì)胞置于暗處20分鐘。光照或不光照后，細(xì)胞的 存活率采用MTT法考察。具體實(shí)驗(yàn)步驟參見《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters)), 2006, 16,245〇-2453〇
[0055]上述波長大于610nm的紅光是通過500W的鹵素?zé)暨B接隔熱水槽加大于610nm的濾 光片來提供的。
[0056]結(jié)果表明，如果進(jìn)行紅光照射，實(shí)施例5-8所述的酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物顯示了顯 著高的光動力活性，光動力抑制癌細(xì)胞的半致死濃度(IC5Q，即殺死50%癌細(xì)胞所需的藥物濃 度)為0.4-0.70 X 10_6mol/L，大約1.5 X 10_6mol/L即可100%殺死癌細(xì)胞。另一方面，實(shí)施例 5-8所述的酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物也顯示了有效的化療活性，不進(jìn)行光照條件下，殺死50%癌 細(xì)胞所需的藥物濃度IC^15-20X1(T 6 mol/L。這說明本發(fā)明所提供的酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián) 物具有光動力治療和化學(xué)治療雙重作用，既可作為高效的光敏劑，又可作為光療/化療聯(lián)用 藥物。
[0057] 應(yīng)用實(shí)施例4 利用本發(fā)明所述酞菁-阿霉素偶聯(lián)物制備光動力藥物（即光敏藥劑)或光動力-化療聯(lián) 用藥物的方法是：以水或水與其他物質(zhì)的混合液為溶劑，其中其它物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不高于 10%，溶解所述酞菁-偶聯(lián)物，配制成一定濃度的藥劑，酞菁-阿霉素偶聯(lián)物的濃度不高于其 飽和濃度;在制成的溶液中加入抗氧化劑、緩沖劑和等滲劑作為添加劑以保持光敏藥劑的 化學(xué)穩(wěn)定性和生物相容性;所述其他物質(zhì)為蓖麻油聚氧乙烯35醚、二甲亞砜、乙醇、甘油、N， N-二甲基甲酰胺、聚乙二醇300-3000、環(huán)糊精、葡萄糖、吐溫、聚乙二醇單硬脂酸酯中的一種 或幾種。
[0058]將本發(fā)明所述酞菁-阿霉素偶聯(lián)物溶解在5_35%(wt%)二甲亞砜的水溶液，可作為 局部給藥用的制劑。
[0059] 應(yīng)用實(shí)施例5 本發(fā)明所制備的光動力藥物或光敏劑，在光動力治療，或光動力診斷，或光動力消毒中 的使用方法與已有技術(shù)中運(yùn)用非本發(fā)明所述的酞菁或卟啉化合物制備的光動力藥物或光 敏劑的使用方法相同，但需配套適宜的光源，所述適宜的光源可以由普通光源連接合適的 濾光片來提供或由特定波長的激光來提供，光源的波長范圍為300_800nm，優(yōu)選670-700 nm〇
[0060]以上所述僅為本發(fā)明的部分較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變 化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物，其特征在于:其結(jié)構(gòu)式如下：2. -種制備如權(quán)利要求1所述的羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物的方法，其特征在于:包括 以下步驟： 以羧基酞菁鋅和阿霉素鹽酸鹽為反應(yīng)物，以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳酰二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯并三唑、4-二甲氨基吡啶存在和氮?dú)獗Ｗo(hù) 下，室溫-35 °C繼續(xù)攪拌反應(yīng)8-24h，進(jìn)而通過萃取法或溶劑法，以及柱層析法純化得到羧基 酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物； 所述的羧基酞菁鋅為： ν"''' ?3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物的方法，其特征在于:羧基酞 菁鋅和阿霉素鹽酸鹽的投料摩爾比為1:1-2; 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸 鹽、1-羥基苯并三唑和4-二甲氨基吡啶的用量皆為每mmol羧基酞菁鋅用l-3mmol;溶劑的用 量5-10mL。4. 一種如權(quán)利要求1所述的羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物在制備光動力藥物或光敏藥劑 中的應(yīng)用。5. -種如權(quán)利要求1所述的羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物在制備具有光動力治療-化學(xué)治 療雙重效應(yīng)的藥物中的應(yīng)用。6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物的應(yīng)用，其特征在于：用水，或 水和其它物質(zhì)的混和溶液，其中其它物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不高于10%，作為溶劑，溶解羧基酞菁 鋅-阿霉素偶聯(lián)物，配制成含一定濃度的藥劑，羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物的濃度不高于其 飽和濃度;在制成的溶液中加入抗氧化劑、緩沖劑和等滲劑作為添加劑以保持藥劑的化學(xué) 穩(wěn)定性和生物相容性;所述的其它物質(zhì)是蓖麻油聚氧乙烯35醚、二甲亞砜、乙醇、甘油、N，N-二甲基甲酰胺、聚乙二醇300-3000、環(huán)糊精、葡萄糖、吐溫、聚乙二醇單硬脂酸酯中的一種或 幾種的混合物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物及其制備方法和應(yīng)用，屬于光敏劑和藥物制備領(lǐng)域。羧基酞菁鋅-阿霉素偶聯(lián)物的結(jié)構(gòu)式如下：（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）或（Ⅳ）。該化合物是新型光敏藥物，且為具有光動力治療和化療雙重效應(yīng)的抗癌藥物。同時，產(chǎn)物組成單一、結(jié)構(gòu)明確，制備工藝簡單。
【IPC分類】A61K31/7135, A01P1/00, A61P9/10, A61P31/04, A61P27/02, A61K47/48, C07H15/252, A01N43/90, A61P35/02, C07H1/00, A61K41/00, A61P31/12, A61P17/00, A61P35/00, A61P1/02
【公開號】CN105622682
【申請?zhí)枴緾N201610134923
【發(fā)明人】黃劍東, 陳星偉, 鄭巧鳳, 柯美榮
【申請人】福州大學(xué)
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2016年3月10日