一種靈芝實(shí)體小分子肽的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種提取方法，具體涉及一種靈芝實(shí)體小分子肽的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]小分子肽是多肽的一種分類，分子量段一般在1000道爾頓以下，也稱作小肽、低聚肽或小分子活性肽，一般由2-6個(gè)氨基酸組成，其具有不需要消化、直接吸收，吸收時(shí)不需要消耗人體能量、不會(huì)增加人體胃腸功能負(fù)擔(dān)且能在人體吸收功能喪失時(shí)迫使人體吸收的優(yōu)點(diǎn)，此外其還具有載體的功能，能將人食的其它營(yíng)養(yǎng)載在其本體上，輸送到人體的細(xì)胞、組織，將各種微量元素運(yùn)輸?shù)饺梭w的各個(gè)部位。
[0003]但是目前天然存在的肽是很少的，現(xiàn)在小分子肽的生產(chǎn)主要是由蛋白水解而得到的，蛋白水解的方法主要有酸法、堿法和酶法，其中酸、堿法都有成本高、工藝復(fù)雜、水解程度不易控制、對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重等缺點(diǎn)，而且在高堿或高酸的情況下，蛋白與糖和油脂等雜質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生褐色物質(zhì)甚至產(chǎn)生有害物質(zhì)，他們都會(huì)影響小分子肽的品質(zhì)。酶的水解比較溫和，無(wú)不良副反應(yīng)發(fā)生，但酶作用的單一性使得通過(guò)一種酶很難達(dá)到理想的水解效果，而且蛋白提取率低。
[0004]近年來(lái)，小分子肽的應(yīng)用價(jià)值越來(lái)越受到人們的重視，其相關(guān)研究也多有報(bào)道，如中國(guó)專利CN 103409491A公開(kāi)了一種大米蛋白小分子肽的制備方法，其包括以下步驟:原料預(yù)處理、粉碎、調(diào)槳、洗滌、調(diào)漿、反應(yīng)、濃縮、脫水等步驟。而關(guān)于靈芝實(shí)體小分子肽的提取還鮮有報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種靈芝實(shí)體小分子肽的提取方法。
[0006]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:
[0007]—種靈芝實(shí)體小分子肽的提取方法，包括以下步驟，
[0008](I)取靈芝進(jìn)行干燥，再將干燥后的靈芝粉碎成靈芝粉末；
[0009](2)將靈芝粉末與水?dāng)嚢杌旌暇鶆虺苫旌弦海訜峄旌弦褐?5-100°C后，保溫一段時(shí)間，再冷卻；
[0010](3)往冷卻后的混合液中加入堿性蛋白酶，并調(diào)節(jié)pH至9-11，然后加熱混合液到50-55 0C，保溫一段時(shí)間，得堿性溶液；
[0011](4)往堿性溶液中加入中性蛋白酶，并調(diào)節(jié)pH至6.5-7，然后加熱至50-55°C，保溫一段時(shí)間，得中性溶液；
[0012](5)往中性溶液中加入胃蛋白酶，并調(diào)節(jié)pH至3.6-3.8，然后加熱至50-55°C，保溫一段時(shí)間，得酸性溶液；
[0013](6)將酸性溶液加熱至90-100°C，保溫一段時(shí)間，過(guò)濾得濾液；
[0014](7)對(duì)濾液進(jìn)行脫色處理得澄清液體，濃縮澄清液體并干燥得靈芝實(shí)體小分子肽粉末。
[0015]進(jìn)一步地，步驟(I)中所述干燥為將靈芝在45_55°C的溫度下干燥10_15h。
[0016]進(jìn)一步地，步驟(I)中所述靈芝粉末的細(xì)度為100-150目。
[0017]進(jìn)一步地，步驟(2)中靈芝和水的重量比為1:15，將靈芝和水在攪拌速度為50-60r/min的條件下混合攪拌均勾;所述加熱溫度升高的速率為15-25 °C/min;所述保溫的時(shí)間為15-20min;所述冷卻為冷卻至50-55°C。
[0018]進(jìn)一步地，步驟(3)中堿性蛋白酶的活力為50萬(wàn)u/g，所述堿性蛋白酶的重量與靈芝粉末的重量比為1:100;步驟(3)中使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH;步驟
(3)中所述的保溫時(shí)間為3-4h。堿性蛋白酶指在堿性條件下能夠水解蛋白質(zhì)肽鍵的酶，它能水解蛋白質(zhì)分子肽鏈生成多肽或氨基酸，堿性蛋白酶適合的PH范圍為8-11，適宜的溫度范圍為50-55 0C，反應(yīng)的時(shí)間大概在3-4小時(shí)，所以在加入堿性蛋白酶之后要調(diào)節(jié)pH并加熱，使其達(dá)到適合堿性蛋白酶的PH及溫度，并在適合堿性蛋白酶存活的溫度及pH條件反應(yīng)3-4h。
[0019]進(jìn)一步地，步驟(4)中性蛋白酶的活力為15萬(wàn)u/g，所述中性蛋白酶的重量與靈芝粉末的重量比為1:100;步驟(4)中使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的鹽酸水溶液調(diào)節(jié)pH;步驟(4)中所述的保溫時(shí)間為3-4h。中性蛋白酶是由枯草芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵提取而得的，屬于一種內(nèi)切酶，可用于各種蛋白質(zhì)水解處理，適宜的溫度范圍為50-55 0C、適宜的pH范圍為6.5-7。它可把動(dòng)植物的大分子蛋白質(zhì)水解成小分子肽或氨基酸，以利于蛋白質(zhì)的有效吸收和利用，水解度高、風(fēng)味佳。
[0020]進(jìn)一步地，步驟(5)中胃蛋白酶的活力為5萬(wàn)u/g，所述胃蛋白酶的重量與靈芝粉末的重量比為1: 100;步驟(5)中使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12 %的鹽酸水溶液調(diào)節(jié)pH;步驟(5)中所述的保溫時(shí)間為3-4h。胃蛋白酶是一種消化性蛋白酶，由胃部中的胃黏膜主細(xì)胞所分泌，功能是將食物中的蛋白質(zhì)分解為小的肽片段。
[0021]進(jìn)一步地，步驟(6)中所述保溫的時(shí)間為20-25min;所述過(guò)濾為用400-450目的過(guò)濾裝置進(jìn)行過(guò)濾。在90-100°C的條件下保溫20-25min為了對(duì)酶進(jìn)行滅活處理，對(duì)酶進(jìn)行滅活處理后用400-450目的粗紗布或?yàn)V紙進(jìn)行過(guò)濾，得到濾液。
[0022 ]進(jìn)一步地，步驟(7)中往濾液中加入占所述濾液重量2 % -4 %的活性炭，在60-70 V的溫度下攪拌脫色20-30min，然后過(guò)濾得澄清液體;濃縮澄清液體至其原有重量的10%-15%，再進(jìn)行干燥得靈芝實(shí)體小分子肽粉末?；钚蕴渴且环N黑色多孔的固體炭質(zhì)，主要成分為碳、并含少量氧、氫、硫、氮氯等元素，具有很強(qiáng)的吸附性能，為用途極廣的一種工業(yè)吸附劑。濃縮時(shí)將澄清液體加熱到60 °C左右采用真空濃縮，干燥時(shí)采用噴霧干燥或冷凍干燥。
[0023]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明所述的靈芝實(shí)體小分子肽的提取方法利用復(fù)合生物酶酶解技術(shù)，并通過(guò)調(diào)節(jié)酶解參數(shù)，最大程度的發(fā)揮了各種酶制劑的作用，從而大大降低了酶制劑的用量，節(jié)約了生產(chǎn)成本，而且所得產(chǎn)品的分子量主要分布在100-700D之間，所得的小分子肽多為二肽、三肽、四肽等極易被人體吸收利用的小分子結(jié)構(gòu)，分子量分布于100-700的小分子肽占蛋白總量的90 %以上；
[0024]經(jīng)常食用本發(fā)明所述的靈芝實(shí)體提取的小分子肽具有抗腫瘤、提高免疫力、降血糖、抗氧化、降血脂與抗衰老的功效，而且沒(méi)有任何已知副作用，過(guò)多的攝入會(huì)迅速隨尿液和膽汁排出，因此可以廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥原料和保健食品中。
【具體實(shí)施方式】
[0025]實(shí)施例一
[0026]—種靈芝實(shí)體小分子肽的提取方法，包括以下步驟:
[0027](I)將靈芝在45°C的溫度下干燥1h，將干燥后的靈芝粉碎成顆粒細(xì)度為100目的靈芝粉末;將靈芝進(jìn)行粉碎，有利于靈芝和水的充分混合，便于靈芝中有效成分的析出；
[0028](2)將重量比為1:15的靈芝和水在攪拌速度為50r/min的條件下混合攪拌均勻成混合液，然后將其加熱至95°C，并保溫15min后再冷卻至50°C，在加熱時(shí)保持溫度升高的速率為15 °C /min，因當(dāng)溫度加熱到95 °C時(shí)有利于靈芝中有效成分的析出；
[0029 ] (3)往冷卻后的混合液中加入活力為50萬(wàn)u/g堿性蛋白酶，所加堿性蛋白酶的重量與靈芝粉末的重量比為1:100，因堿性蛋白酶適合的pH范圍為8-11，所以在加入堿性蛋白酶之后，需調(diào)節(jié)PH至9，然后加熱混合液到50°C，保溫3h得堿性溶液;作為一種優(yōu)選的方案，調(diào)節(jié)PH時(shí)使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的氫氧化鈉水溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)；
[0030](4)往堿性溶液中加入活力為15萬(wàn)u/g的中性蛋白酶，所加的中性蛋白酶的重量與靈芝粉末的重量比為1:100，因中性蛋白酶適宜的pH范圍為6.5-7.0，所以在加入中性蛋白酶之后需要調(diào)節(jié)PH至6.5，然后加熱至50°C，保溫3h，得中性溶液;作為一種優(yōu)選的方案，調(diào)節(jié)PH時(shí)使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的鹽酸水溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)；
[0031](5)往中性溶液中加入活力為5萬(wàn)u/g的胃蛋白酶，所加的胃蛋白酶的重量與靈芝粉末的重量比為1:100，然后調(diào)節(jié)pH至3.6，并加熱至50°C，保溫3h，得酸性溶液;作為一種優(yōu)選的方案，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的鹽酸水溶液調(diào)節(jié)pH;
[0032](6)將酸性溶液加熱至90°C，保溫20min對(duì)酶進(jìn)行滅活處理，然后用400目的濾紙進(jìn)行過(guò)濾得濾液；
[0033](7)對(duì)濾液進(jìn)行脫色處理得澄清液體，濃縮澄清液體并干燥得靈芝實(shí)體小分子肽粉末。往濾液中加入占所述濾液重量2%的活性炭，在60°C的溫度下攪拌脫色20min，然后過(guò)濾得澄清液體；將澄清液體加熱到60°C采用真空濃縮，將澄清液體濃縮至其原有重量的10%，再采用噴霧干燥得靈芝實(shí)體小分子肽粉末。
[0034]實(shí)施例二
[0035]—種靈芝實(shí)體小