度）。
[0058] (3)若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于150CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計 數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。
[0059] (4)若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于10CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘 以稀釋倍數(shù)計算。
[0060] (5)若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀 釋倍數(shù)計算。
[0061] (6)若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在10CFU~150CFU之間，其中一部分小于 10CFU或大于150CFU時，則以最接近10CFU或150CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。
[0062] 檢測結(jié)果如表1所示?？梢钥闯?，本發(fā)明方法的檢測結(jié)果與添加的量相同或相近， 雖偶有結(jié)果低于添加量(微生物的生長繁殖存在共生和競爭的關(guān)系，當(dāng)添加菌量少時，其是 劣勢菌群，受到樣品中處于優(yōu)勢的乳酸菌的抑制，導(dǎo)致檢測結(jié)果偏低，隨著添加菌量增加， 其由劣勢轉(zhuǎn)變?yōu)閮?yōu)勢菌群，其檢測結(jié)果越靠近添加菌量值），經(jīng)F檢驗(yàn)和T檢驗(yàn)，結(jié)果無顯著 性差異并符合微生物重復(fù)性r<0.25的規(guī)定，本方法檢測結(jié)果是準(zhǔn)確、可信的。
[0063] 表1添加非乳酸菌樣品的檢測結(jié)果
[0064]
[0065] 對比例1
[0066] 在該對比例中，按照實(shí)施例1的方法測定樣品中非乳酸菌含量，區(qū)別在于，
[0067]平板培養(yǎng)基成分：
[0068]將7.5g胰蛋白胨、7.5g白明膠蛋白胨、5.0g氯化鈉和10g瓊脂混合，并用蒸餾水定 容至1000mL，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH值至7.5，121°C高壓滅菌15min。
[0069] 檢測結(jié)果如表2所示，可以看出，按照對比例1的方法所得到的檢測結(jié)果低于添加 量，同時，低于本發(fā)明方法檢驗(yàn)結(jié)果。對比例1的檢測結(jié)果偏低最主要原因是培養(yǎng)基中沒有 提供微生物生長繁殖和發(fā)酵所需的維生素和碳源即酵母浸膏和葡萄糖，經(jīng)F檢驗(yàn)和T檢驗(yàn)分 析，對比例1所計數(shù)的結(jié)果與本發(fā)明方法計數(shù)結(jié)果存在顯著性差異，故對比例1的方法檢測 結(jié)果不準(zhǔn)確、不可信。
[0070] 表2檢測結(jié)果對比
[0071]
[0072] 對比例2
[0073] 在該對比例中，按照實(shí)施例1的方法測定樣品中非乳酸菌含量，區(qū)別在于，平板計 數(shù)瓊脂培養(yǎng)基中胰蛋白胨、酵母浸膏及葡萄糖的添加量如表3所示。
[0074] 表3非乳酸菌計數(shù)瓊脂中成分含量對應(yīng)檢測結(jié)果
[0075]
[0076] 可以看出，平板培養(yǎng)基中葡萄糖含量低于l.Og/lOOOmL或高于10.0g/1000mL，計數(shù) 結(jié)果都低于添加的量，同時低于本發(fā)明方法檢測結(jié)果，計數(shù)結(jié)果存在顯著性差異;酵母浸粉 含量低于2.0g/1000mL計數(shù)結(jié)果都低于添加的量，同時低于本發(fā)明方法檢測結(jié)果，計數(shù)結(jié)果 存在顯著性差異，高于3.0g/1000mL計數(shù)結(jié)果無顯著性差異，但會增加制備培養(yǎng)基的成本； 胰蛋白胨含量低于4.5g/1000mL或高于10.0g/1000mL，計數(shù)結(jié)果都低于添加的量，同時低于 本發(fā)明方法檢測結(jié)果。
[0077] 在本說明書的描述中，參考術(shù)語"一個實(shí)施例"、"一些實(shí)施例"、"示例"、"具體示 例"、或"一些示例"等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特 點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個實(shí)施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不 必須針對的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任 一個或多個實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領(lǐng)域的技 術(shù)人員可以將本說明書中描述的不同實(shí)施例或示例以及不同實(shí)施例或示例的特征進(jìn)行結(jié) 合和組合。
[0078] 盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例 性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述 實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測定乳制品中非乳酸菌含量的方法，其特征在于，包括： 以無菌吸管吸取25mL樣品置于盛有225mL生理鹽水的容器中，混勻，制成1:10的樣品勻 液； 將所述樣品勻液進(jìn)行梯度稀釋，得到2~3個不同濃度的稀釋液； 針對每種稀釋液，均設(shè)至少兩個平行處理和1個空白對照，其中空白對照采用〇. lmL空 白稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)基涂布，平行處理均取〇. lmL所述稀釋液涂布于平板培養(yǎng)基上； 將涂有稀釋液的平板培養(yǎng)基置于29~31攝氏度下培養(yǎng)70~74小時，計數(shù)平板培養(yǎng)基上 的所有菌落數(shù)，并基于計數(shù)結(jié)果確定乳制品中非乳酸菌含量， 所述平板培養(yǎng)基是通過下列步驟獲得的： 將5.0g胰蛋白胨、2.5g酵母浸膏、l.Og葡萄糖及15.0g瓊脂混合，并用蒸餾水定容至 10001^，煮沸溶解，調(diào)節(jié)?田直至7.0±0.2，121°(：高壓滅菌151^11，無菌條件下趁熱倒入平皿 中，每個平皿倒入10~15mL，冷卻凝固。2. -種用于測定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基，其特征在于，包括:5.Og/L的胰蛋白 胨;2.5g/L的酵母浸粉或酵母浸膏；1. Og/L的葡萄糖;15. Og/L的瓊脂；以及余量的水， 所述瓊脂培養(yǎng)基的pH值為6.8~7.2。3. -種測定乳制品中非乳酸菌含量的方法，其特征在于，包括： (1) 將乳制品與緩沖液或生理鹽水進(jìn)行混合，得到樣品勻液； (2) 將樣品勻液進(jìn)行梯度稀釋，得到稀釋液； (3) 將所述稀釋液涂布于權(quán)利要求2所述培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)；以及 (4) 基于所述培養(yǎng)的結(jié)果，確定所述乳制品中非乳酸菌含量。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，針對固體或半固體乳制品，步驟(1)包括： 將所述乳制品與緩沖液或生理鹽水置于均質(zhì)袋中均質(zhì)混合1~2分鐘，得到所述樣品勻 液，其中，所述乳制品與緩沖液或生理鹽水的體積比為1:10。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，包括： 將乳制品與緩沖液或生理鹽水進(jìn)行混合，得到樣品勻液； 將所述樣品勻液進(jìn)行第一稀釋，得到第一稀釋液，再將所述第一稀釋液進(jìn)行第二稀釋， 得到第二稀釋液； 所述第一稀釋液和第二稀釋液均設(shè)至少兩組平行處理和1個空白對照，其中空白對照 取0. lmL空白稀釋液涂布于含有所述培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，平行處理均取0. lmL所述稀釋液涂 布于含有所述培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，并將培養(yǎng)皿置于29~31攝氏度下培養(yǎng)70~74小時，計數(shù) 培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)； 按照公式N= XC/(m+0. ln2)d計算得到所述乳制品中非乳酸菌含量， 其中，N為所述乳制品中非乳酸菌數(shù)；Σ(：為所述培養(yǎng)皿上菌落數(shù)之和;m為涂布有所述 第一稀釋液的培養(yǎng)皿個數(shù);n2為涂布有所述第二稀釋液的培養(yǎng)皿個數(shù);d為所述第一稀釋液 相對于所述乳制品的稀釋度。
【專利摘要】本發(fā)明公開了用于測定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基及測定乳制品中非乳酸菌含量的方法。所述用于測定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基包括：5.0g/L的胰蛋白胨；2.5g/L的酵母浸粉或酵母浸膏；1.0g/L的葡萄糖；15.0g/L的瓊脂；以及余量的水，所述瓊脂培養(yǎng)基的pH值為6.8～7.2。利用本發(fā)明的用于測定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基能夠準(zhǔn)確地測定乳制品中非乳酸菌含量。
【IPC分類】C12Q1/04, C12Q1/06, C12Q1/10, C12Q1/14, C12R1/445, C12R1/19
【公開號】CN105624262
【申請?zhí)枴緾N201610154836
【發(fā)明人】薛志清, 宿燁, 李雪晶, 馬文麗, 吳玉秋, 梁春梅, 任麗, 吳騰, 王麗麗, 袁鳳琴, 扎木則仁, 喻東威, 宋曉東
【申請人】內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2016年3月17日