一種液體中細(xì)菌的計(jì)數(shù)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及一種液體中的粒子計(jì)數(shù)方法，具體涉及一種液體中細(xì)菌的計(jì)數(shù)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)菌是自然界分布最廣、個(gè)體數(shù)量最多的生命體，是構(gòu)成自然界物質(zhì)循環(huán)的主要部分;按照基本形態(tài)可分為球菌、桿菌和螺旋菌等。細(xì)菌廣泛分布于環(huán)境中，人體身上也帶有相當(dāng)多的細(xì)菌;據(jù)估計(jì)，人體內(nèi)及表皮上的細(xì)菌細(xì)胞總數(shù)約是人體細(xì)胞總數(shù)的十倍;細(xì)菌對環(huán)境、人類和動(dòng)物既有用處又有危害，一些細(xì)菌作為病原體，可以導(dǎo)致霍亂、肺結(jié)核等疾病，也會(huì)導(dǎo)致植物產(chǎn)生疾病;細(xì)菌對人類的活動(dòng)有很大的影響，例如酸奶的制作、抗生素的制造、廢水的處理等，都與細(xì)菌有關(guān)，細(xì)菌在生物技術(shù)領(lǐng)域，也有廣泛的應(yīng)用；另外，某些細(xì)菌在環(huán)境監(jiān)測、食品安全以及醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域也是重要檢測指標(biāo)，例如大腸桿菌的檢測;傳統(tǒng)的檢測細(xì)菌的方法，例如涂布計(jì)數(shù)法，發(fā)酵法等方法操作復(fù)雜、耗時(shí)長并且誤差大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供一種易于操作、快速和成本低的液體中細(xì)菌的計(jì)數(shù)方法。
[0004]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種液體中細(xì)菌的計(jì)數(shù)方法，包括如下步驟:
[0005]取需要檢測的溶液，選擇三個(gè)連續(xù)級的10倍稀釋梯度，得到三個(gè)稀釋度溶液；
[0006]從每個(gè)稀釋度溶液中分別取三份樣品得到AlA^A3,形成液滴后逐滴滴下；
[0007]用激光束從液滴一側(cè)射入，從液滴中射出形成投影；
[0008]獲取每滴溶液的投影圖像，對投影圖像采用模式識別判斷是否有細(xì)菌，采用MPN計(jì)數(shù)方法計(jì)算細(xì)菌數(shù)量。
[0009]進(jìn)一步的，將液滴逐滴滴到超疏水材料上，激光束從液滴上部射入，分別進(jìn)行投影。
[0010]進(jìn)一步的，所述液滴采用蠕動(dòng)栗通過導(dǎo)管將水樣抽出形成。
[0011 ]進(jìn)一步的，所述液滴通過注射器形成。
[0012]進(jìn)一步的，所述激光束為可見光激光。
[0013]進(jìn)一步的，所述MPN計(jì)數(shù)方法步驟如下:
[0014]每個(gè)液滴中有細(xì)菌標(biāo)記為+，沒有細(xì)菌標(biāo)記為-;
[0015]每個(gè)稀釋度的三份樣品HA3中存在+，記為I，沒有+，記為O;
[0016]將每個(gè)稀釋度的三份樣品的標(biāo)記相加，為該稀釋度的標(biāo)記；
[0017]將三個(gè)稀釋度的標(biāo)記按順序排列，形成一組三位數(shù)，檢索MPN表中的排列查每毫升中細(xì)菌數(shù)量。
[0018]進(jìn)一步的，操作過程在黑暗的環(huán)境中進(jìn)行。
[0019]進(jìn)一步的，獲取投影圖像之前，調(diào)整激光光束的位置，待細(xì)菌移動(dòng)到液滴中央位置時(shí)，再獲取投影圖像。
[0020]進(jìn)一步的，所述超疏水材料由四甲硅烷和含氟硅氧烷負(fù)載在玻璃上構(gòu)成。
[0021]進(jìn)一步的，溶液進(jìn)行稀釋之前，在溶液中添加細(xì)菌染色劑或者添加納米粒子。
[0022](I)本發(fā)明不需要進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)合微生物檢測和光學(xué)現(xiàn)象，檢測過程簡單、分析過程快速；
[0023](2)本發(fā)明采用的設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單、成本低，可以對水樣給出定性定量結(jié)果；
[0024](3)本發(fā)明可以快速、準(zhǔn)確識別不同細(xì)菌，方法操作簡單，適用于大范圍檢測。
【附圖說明】
[0025]圖1為本發(fā)明水樣的處理方法。
[0026]圖2為本發(fā)明具體實(shí)施例一的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0027]圖3為本發(fā)明具體實(shí)施例二的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0028]圖4為本發(fā)明具體實(shí)施例三的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0029]圖中:1-激光發(fā)生器，2-液滴，3-細(xì)菌，4-屏幕，5-拍照裝置，6_處理裝置，7_超疏水材料，8-注射器，9-蠕動(dòng)栗。
【具體實(shí)施方式】
[0030]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0031 ] 一種液體中細(xì)菌的計(jì)數(shù)方法，包括如下步驟:
[0032]取需要檢測的溶液，選擇三個(gè)連續(xù)級的10倍稀釋梯度，得到三個(gè)稀釋度溶液；
[0033]從每個(gè)稀釋度溶液中分別取三份樣品得到AlA^A3,形成液滴后逐滴滴下；
[0034]用激光束從液滴一側(cè)射入，從液滴中射出形成投影；
[0035]獲取每滴溶液的投影圖像，對投影圖像采用模式識別判斷是否有細(xì)菌，采用MPN計(jì)數(shù)方法計(jì)算細(xì)菌數(shù)量。
[0036]進(jìn)一步的，將液滴逐滴滴到超疏水材料上，激光束從液滴上部射入，分別進(jìn)行投影;超疏水材料的表面與水的接觸角大于150°，滾角小于10°的特性，將水樣滴在超疏水材料表面，液滴形成一個(gè)球狀液滴并保持其形狀不變。
[0037]進(jìn)一步的，所述液滴采用蠕動(dòng)栗通過導(dǎo)管將水樣抽出形成;蠕動(dòng)栗可以控制出水速度以及出水量，利用蠕動(dòng)栗通過導(dǎo)管將水樣抽出，水樣從導(dǎo)管另一頭緩慢流出形成液滴，可以維持其形狀不變。
[0038]進(jìn)一步的，所述液滴通過注射器形成;將注射器倒置，緩慢推動(dòng)活塞擠出水樣，從針頭流出的水樣形成液滴懸掛于針頭，并維持其形狀不變。
[0039]形成液滴的方式并不僅限于上述三種方式還可以采用模板法，即在透明材質(zhì)上形成球孔，將液體注入形成球滴。
[0040]進(jìn)一步的，所述激光束為可見光激光，一般采用波長為532nm的激光，也可以采用波長較小的綠光激光，能夠減小衍射現(xiàn)象。
[0041]進(jìn)一步的，操作過程在黑暗的環(huán)境中進(jìn)行，能夠保證拍攝出的圖片更加清晰。
[0042]每個(gè)稀釋度均取三份樣品AlA^A3分別檢測;可以提高測試的精度。
[0043]進(jìn)一步的，所述MPN計(jì)數(shù)方法步驟如下:
[0044]每個(gè)液滴中有細(xì)菌標(biāo)記為+，沒有細(xì)菌標(biāo)記為
[0045]每個(gè)稀釋度的三份樣品HA3中存在+，記為I，沒有+，記為O;
[0046]將每個(gè)稀釋度的三份樣品的標(biāo)記相加，為該稀釋度的標(biāo)記；
[0047]將三個(gè)稀釋度的標(biāo)記按順序排列，形成一組三位數(shù)，檢索MPN表中的排列查每毫升中細(xì)菌數(shù)量。
[0048]進(jìn)一步的，獲取投影圖像之前，調(diào)整激光光束的位置，待細(xì)菌移動(dòng)到液滴中央位置時(shí)，再獲取投影圖像。
[0049]進(jìn)一步的，所述超疏水材料由四甲硅烷和含氟硅氧烷負(fù)載在玻璃上構(gòu)成。
[0050]進(jìn)一步的，溶液進(jìn)行稀釋之前，在溶液中添加細(xì)菌染色劑或者添加納米粒子;將細(xì)菌進(jìn)行染色或者采用納米粒子對細(xì)菌進(jìn)行標(biāo)記可以使得投影圖像更加清晰。
[0051]根據(jù)水樣中細(xì)菌的污染程度大致濃度確定稀釋倍數(shù)，水樣可以是任意體液(血液、尿液和唾液)，也可以是環(huán)境水樣，甚至是食品等液體;譬如唾液，那么用棉簽沾取，溶解在生理鹽水中，然后按照本發(fā)明的方法進(jìn)行處理;血液、生理鹽水稀釋，都可以按本發(fā)