一種陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，包括：步驟1：準(zhǔn)確稱量哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)4.1g，并加入95ml蒸餾水加熱溶解。步驟2：對步驟1中的溶解液高壓滅菌。步驟3：將溶解液冷卻至50℃左右無菌操作加入5ml脫纖維兔血和組合抑菌劑。步驟4：傾倒于已滅菌玻璃平皿，作為兔血哥比瓊脂單層培養(yǎng)基，冷確備用。步驟5：將陰道加德納菌接種于已制備好的兔血哥比瓊脂單層培養(yǎng)基，分區(qū)劃線接種。步驟6：置于35℃，5%CO2孵育48小時。本發(fā)明僅使用兔血和哥倫比亞血瓊脂兩種成分作為營養(yǎng)物質(zhì)，配制成單層培養(yǎng)基，能達(dá)到陰道加德納菌分離效果，實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)基制備成本低廉、操作方便、原料易得等特點(diǎn)，利于不同等級醫(yī)院廣泛開展。
【專利說明】
_種陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]陰道加德納菌(gardnerella vaginalis GV)在細(xì)菌性陰道病的微生物菌群中含量明顯高于其它正常菌群，歷來被國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為細(xì)菌性陰道病的重要致病菌之一。GV感染還可引起輸卵管異位妊娠、胎膜早破、絨毛膜羊膜炎、產(chǎn)褥期感染、子宮內(nèi)膜炎及新生兒早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局。
[0004]GV的分離培養(yǎng)法仍然是GV檢測的國際公認(rèn)金標(biāo)準(zhǔn)。GV生長條件較為苛刻，生長過程中需多種營養(yǎng)物質(zhì)參與。普通羊血平板，經(jīng)過35?37°C，5%C02，48?72h培養(yǎng)會形成針尖大小的菌落，且不易辨認(rèn)，缺乏特異性菌落形態(tài)特征，極易造成日常工作中的漏檢。國內(nèi)學(xué)者選擇在的培養(yǎng)中加入多種營養(yǎng)成份(哥比瓊脂、人全血及血漿、心腦浸液、酵母浸膏、營養(yǎng)肉湯等來促進(jìn)GV的生長，提高檢出的陽性率。GV在含人血培養(yǎng)基上產(chǎn)生β溶血，β溶血的出現(xiàn)不僅可以作為GV特異性的一個菌落生長特征，同時也有利于陽性檢出率的提高。
[0005]目前國內(nèi)外大多文獻(xiàn)采有含人血雙層培養(yǎng)基加多種營養(yǎng)成份分離陰道加德納菌，在全國中心血站血液供應(yīng)嚴(yán)重不足情況下，人血價格昂貴且不易獲得。雙層培養(yǎng)基制備復(fù)雜、增加污染機(jī)會。心腦浸液、酵母浸膏等營養(yǎng)成份的添加導(dǎo)致成本增加。因此，研究即可成本低廉、配制程序簡單，同時保證穩(wěn)定細(xì)菌分離效果培養(yǎng)基，是廣泛應(yīng)用的前提條件。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的:提供一種陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，材料易得、制備簡便、成本低廉，使其在各級醫(yī)院均能廣泛開展，提高陰道加德納菌分離率。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
一種陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，該方法至少包括如下步驟:
步驟1:準(zhǔn)確稱量哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)4.1g，并加入95ml蒸餾水加熱溶解。
[0008]步驟2:對步驟I中的溶解液高壓滅菌。
[0009]步驟3:將溶解液冷卻至50°C左右無菌操作加入5ml脫纖維兔血和組合抑菌劑。
[0010]步驟4:無菌操作傾倒于已滅菌玻璃平皿，制備成兔血哥比瓊脂單層培養(yǎng)基，冷確備用。
[0011]步驟5:將陰道加德納菌接種于已制備好的兔血哥比瓊脂單層培養(yǎng)基，分區(qū)劃線接種。
[0012]步驟6:置于35Γ，5%C02孵育48小時。
[0013]上述的陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，其中，在所述的步驟I中，所述的哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)4.1g溶解后的pH值為7.2-7.4。
[0014]上述的陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，其中，在所述的步驟2中，所述的高壓滅菌的溫度為121°C，高壓滅菌的時間為15分鐘。
[0015]上述的陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，其中，在所述的步驟3中，所述的溶解液加入脫纖維兔血和組合抑菌劑后的終濃度為:兩性霉素B 2^^/1111;慶大霉素Syg/ml;萘啶酮酸30pg/mlo
[0016]上述的陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，其中，在所述的步驟6中，孵育48小時后，菌落呈圓形、光滑、濕潤、露滴樣形態(tài)，最大菌體直徑達(dá)0.985mm，β溶血環(huán)最大直徑達(dá)2.273mm。
[0017]本發(fā)明僅使用兔血和哥倫比亞血瓊脂兩種成分作為營養(yǎng)物質(zhì)，只配制成單層培養(yǎng)基，就能達(dá)到陰道加德納菌分離效果，實(shí)現(xiàn)了培養(yǎng)基制備成本低廉、操作方便、原料易得等特點(diǎn)，有利于在不同等級的醫(yī)院廣泛開展。
[0018]
【附圖說明】
[0019]圖1是本發(fā)明一種陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法的流程圖。
[0020]
【具體實(shí)施方式】
[0021]以下結(jié)合附圖進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)施例。
[0022]請參見附圖1所示，一種陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，該方法至少包括如下步驟:
步驟1:準(zhǔn)確稱量哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)4.1g，并加入95ml蒸餾水加熱溶解。
[0023]步驟2:對步驟I中的溶解液高壓滅菌。
[0024]步驟3:將溶解液冷卻至50°C左右無菌操作加入5ml脫纖維兔血和組合抑菌劑。
[0025]步驟4:無菌操作傾倒于已滅菌玻璃平皿，制備成兔血哥比瓊脂單層培養(yǎng)基，冷確備用。
[0026]步驟5:將陰道加德納菌接種于已制備好的兔血哥比瓊脂單層培養(yǎng)基，分區(qū)劃線接種。
[0027]步驟6:置于35°C，5%C02孵育48小時。
[0028]在所述的步驟I中，所述的哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)4.1g溶解后的pH值為7.2-7.4。
[0029]在所述的步驟2中，所述的高壓滅菌的溫度為121°C，高壓滅菌的時間為15分鐘。
[0030]在所述的步驟3中，所述的溶解液加入脫纖維兔血和組合抑菌劑后的終濃度為:兩性霉素B 2yg/ml;慶大霉素5yg/ml;萘啶酮酸30yg/ml。
[0031]在所述的步驟6中，孵育48小時后，菌落呈圓形、光滑、濕潤、露滴樣形態(tài)，用游標(biāo)卡尺測得最大菌體直徑可達(dá)0.985mm，因加入兔血產(chǎn)生的β溶血環(huán)大小明顯，β溶血環(huán)最大直徑可達(dá)2.273mm。
[0032]在本發(fā)明中，菌落人肉眼清晰可辨，能夠達(dá)到陰道加德納菌分離效果。兔血哥比瓊脂單層培養(yǎng)基是一種節(jié)約成本、配制方便，具有重要的臨床應(yīng)用價值的陰道加德納菌分離培養(yǎng)基。
[0033]綜上所述，本發(fā)明僅使用兔血和哥倫比亞血瓊脂兩種成分作為營養(yǎng)物質(zhì)，只配制成單層培養(yǎng)基，就能達(dá)到陰道加德納菌分離效果，實(shí)現(xiàn)了培養(yǎng)基制備成本低廉、操作方便、原料易得等特點(diǎn)，有利于在不同等級的醫(yī)院廣泛開展。
[0034]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)變換，或直接或間接運(yùn)用附屬在其他相關(guān)產(chǎn)品的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，其特征在于:該方法至少包括如下步驟: 步驟1:準(zhǔn)確稱量哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)4.1g，并加入95ml蒸餾水加熱溶解； 步驟2:對步驟I中的溶解液高壓滅菌； 步驟3:將溶解液冷卻至50 °C左右無菌操作加入5ml脫纖維兔血和組合抑菌劑； 步驟4:無菌操作傾倒于已滅菌玻璃平皿，制備成兔血哥比瓊脂單層培養(yǎng)基，冷確備用； 步驟5:將陰道加德納菌接種于已制備好的兔血哥比瓊脂單層培養(yǎng)基，分區(qū)劃線接種； 步驟6:置于350C，5%C02孵育48小時。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，其特征在于:在所述的步驟I中，所述的哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)4.1g溶解后的pH值為7.2-7.4。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，其特征在于:在所述的步驟2中，所述的高壓滅菌的溫度為121°C，高壓滅菌的時間為15分鐘。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，其特征在于:在所述的步驟3中，所述的溶解液加入脫纖維兔血和組合抑菌劑后的終濃度為:兩性霉素B 2^^/1111;慶大霉素5yg/ml ；萘啶酮酸30yg/ml。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的陰道加德納菌培養(yǎng)基制備方法，其特征在于:在所述的步驟6中，孵育48小時后，菌落呈圓形、光滑、濕潤、露滴樣形態(tài)，最大菌體直徑達(dá)0.985mm，β溶血環(huán)最大直徑達(dá)2.273mm。
【文檔編號】C12R1/01GK105861372SQ201610271076
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月27日
【發(fā)明人】陳遠(yuǎn)翔
【申請人】陳遠(yuǎn)翔