一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法；步驟如下：1、在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線接種，作為斜面保藏菌；2、在瓊脂斜面中挑取1個典型的細菌菌落，接種于營養(yǎng)肉湯中得到細菌菌懸液；3、吸取細菌菌懸液，移入裝有PBS的試管中，充分混勻、稀釋后作為接種菌懸液；4、制作加樣袋；5、將加樣袋加入無菌水預潤濕作為空白對照品，加樣袋中分別加入抗菌蠶砂制品及非抗菌蠶砂制品，加入無菌水預潤濕作為待測樣品及對照樣品；6、將待測樣品、對照樣品和空白對照品分別置于涂布接種菌懸液的瓊脂平板表面，取少量接種菌懸液滴加于三個樣品上；7、在培養(yǎng)期間，記錄并獲得蠶砂制品的抗菌性能。通過上述方式，本發(fā)明操作簡單、速度快、使用成本低。
【專利說明】
一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及蠶砂制品抗細菌性能，特別是一種操作簡單、速度快、使用成本低的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法。
【背景技術】
[0002]蠶砂，又名蠶矢，多產于江蘇、浙江、四川等地，為蠶蛾科昆蟲家蠶蛾幼蟲的干燥糞便。性味甘溫，有燥濕、祛風、化濁、活血定痛之功效。民間用蠶砂作枕芯的填充物，有清肝明目、養(yǎng)目、養(yǎng)腦、治高血壓、耳鳴等功效，嬰幼兒使用效果更為明顯。蠶砂枕采用優(yōu)質蠶砂為原料，保持頭部溫度均恒。做到真正涼頭熱腳、健康睡眠，老年人使用可祛風除濕、聰耳明目、和胃化濁。無毒無副作用，常年有效，老幼咸宜。醫(yī)學證明，蠶砂枕能祛風除濕，涼爽止汗，祛署退火，健腦益智。特別有益于青少年和幼兒枕出健康周正的頭型。但蠶砂制品易發(fā)生腐敗，腐敗后的產品不僅影響其使用功效，嚴重時亦會對人體產生危害，敏感體質的人可能會產生過敏反應等。因此，蠶砂制品生產廠家將蠶砂用作填充物時一般多采用抗菌抑菌處理以防止其發(fā)生腐敗，以期使得蠶砂制品更好的應用于人們日常生活中。
[0003]然而，要對蠶砂制品進行抗菌檢測，判斷其抗菌性能及功效，目前沒有現存的檢測方法可以采用，最終無法實施蠶砂制品的抗菌性能評估。為此，本發(fā)明反復探索了各種抗菌檢測實驗方法，并進行了對比試驗，最終采用瓊脂平皿法實現了對蠶砂制品的抗菌性能檢測。蠶砂大小不一，呈顆粒狀，因而導致其檢測操作困難，針對這一問題，本發(fā)明采用與蠶砂材料類同的家蠶絲綢制成蠶砂試驗套，將蠶砂放入套中完成了蠶砂的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抗菌檢測試驗，為蠶砂抗菌制品的開發(fā)以及對現有的各種抗菌產品的檢測提供基礎，對建立香砂制品抗囷性能的標準檢測方法具有現實意乂。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明主要解決的技術問題是提供一種操作簡單、速度快、使用成本低的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法。
[0005]為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的一個技術方案是一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，具體步驟如下:
步驟I:細菌凍干菌菌粉中加入溶菌肉湯，37 °C ± 1°C恒溫振蕩培養(yǎng)18小時，然后用接種針于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線，37°C±1°C，培養(yǎng)24小時，此斜面可在2?8°C下保存I個月，作為斜面保藏菌；
步驟2:在步驟I得到的瓊脂斜面中挑取I個典型的細菌菌落，接種于20mL營養(yǎng)肉湯中，37 °C ± TC，振蕩培養(yǎng)18?20小時，得到細菌菌懸液;然后利用分光光度法測定細菌濃度，此菌懸液活菌數應達到I X 19?5 X 109CFU/mL;
步驟3:吸取步驟2中的細菌菌懸液1.8mL~2.5mL，移入裝有9mL PBS的試管中，充分混勻，依次進行10倍梯度稀釋，稀釋至活菌數為200CFU?250CFU的范圍，作為接種菌懸液；
步驟4:剪取真絲圓片，兩片對稱縫制真絲布袋作為加樣袋，真絲邊緣不超過0.3mm，121°〇濕熱滅菌15min;
步驟5:在步驟4中的加樣袋中分別加入抗菌蠶砂制品及非抗菌蠶砂制品，加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預潤濕，使蠶砂的濕度平衡至90%以上，作為待測樣品及對照樣品。
[0006]步驟6:將步驟4中的加樣袋加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預潤濕，作為抗菌性能檢測的空白對照品；
步驟7:取步驟3制備的接種菌懸液均勻涂布于瓊脂平板培養(yǎng)基中，將步驟5中的待測樣品、對照樣品及步驟6中的空白對照品分別置于瓊脂平板表面，取少量步驟3制備的接種菌懸液分別滴加于每個待測樣品、對照樣品及空白對照品上，37°C±1°C培養(yǎng)18?24小時，每個樣品至少3個平行試驗；
步驟8:在培養(yǎng)期間，記錄各樣品表面細菌生長情況，將待測樣品、對照樣品和空白對照品培養(yǎng)后的各平行試驗的實際活菌數值的平均值分別記為數值A、B和C。按下式計算抗菌蠶砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，獲得蠶砂制品的抗菌性能，以百分率計。
[0007]優(yōu)選的，所述菌株選用金黃色葡萄球菌ATCC6538或大腸桿菌ATCC 11299或大腸桿菌ATCC8739或大腸桿菌ATCC29522。
[0008]優(yōu)選的，步驟3中的細菌菌懸液吸取量，根據大腸桿菌取吸取量的下限，金黃色葡萄球菌取吸取量的上限。
[0009]優(yōu)選的，步驟4中的真絲加樣袋為GB/T7568.6-2002標準真絲制品，直徑3.8 土0.5 cm，真絲邊緣不超過0.3mm。
[0010]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明所述的一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，操作簡單、速度快、使用成本低;通過利用溶出性抗菌劑可以離開蠶砂制品進入培養(yǎng)皿的特性，采用在蠶砂制品上接種測試菌的方法，利用肉眼及顯微鏡鏡檢等方法觀察蠶砂制品的微生物生長情況，來檢測蠶砂制品的抗細菌性能，從而實現對蠶砂制品的抗細菌性能的評估。適用于抗菌劑整理的蠶砂制品的抗細菌性能評估。
【具體實施方式】
[0011]下面對本發(fā)明的較佳實施例進行詳細闡述，以使本發(fā)明的優(yōu)點和特征能更易于被本領域技術人員理解，從而對本發(fā)明的保護范圍做出更為清楚明確的界定。
[0012]本發(fā)明實施例包括:
一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，具體步驟如下:
步驟1:細菌凍干菌菌粉中加入2mL溶菌肉湯，所述菌株選用金黃色葡萄球菌ATCC 6538或大腸桿菌ATCC 11299或大腸桿菌々10:8739或大腸桿菌410:29522;在371€±1°(:恒溫振蕩培養(yǎng)18小時，然后用接種針于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線，37°C ±1°C，培養(yǎng)24小時，此斜面可在2?8°C下保存I個月，作為斜面保藏菌；
步驟2:在步驟I得到的瓊脂斜面中挑取I個典型的細菌菌落，接種于20mL營養(yǎng)肉湯中，在371:±1°(:，13(^/1^11，振蕩培養(yǎng)18~20小時，得到細菌菌懸液;然后利用分光光度法測定細菌濃度，此菌懸液活菌數應達到I X 19?5 X 109CFU/mL;
步驟3:吸取步驟2中的細菌菌懸液1.8mL~2.5mL，所述細菌菌懸液吸取量，根據大腸桿菌取吸取量的下限，金黃色葡萄球菌取吸取量的上限;移入裝有9mL PBS的試管中，充分混勻，依次進行10倍梯度稀釋，稀釋至活菌數為200CFU?250CFU的范圍，作為接種菌懸液；
步驟4:剪取直徑為3.8 ± 0.5cm真絲圓片，兩片對稱縫制真絲布袋作為加樣袋，真絲邊緣不超過0.3臟，121°(^濕熱滅菌15111；[11;
步驟5:在步驟4中的加樣袋中分別加入抗菌蠶砂制品及非抗菌蠶砂制品，加入含有
0.05%非離子潤濕劑的無菌水預潤濕，使蠶砂的濕度平衡至90%以上，作為待測樣品及對照樣品；
步驟6:將步驟4中的加樣袋加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預潤濕，作為抗菌性能檢測的空白對照品；
步驟7:取步驟3制備的接種菌懸液均勻涂布于瓊脂平板培養(yǎng)基中，將步驟5中的待測樣品、對照樣品及步驟6中的空白對照品分別置于瓊脂平板表面，在每個待測樣品、對照樣品及空白對照品上分別均勻滴加0.2±0.0lmL接種菌懸液，每個樣品至少3個平行試驗，37°C± 1°C培養(yǎng)18?24h，記錄抗菌性能檢測結果；
步驟8:在培養(yǎng)期間，記錄蠶砂制品表面細菌增長情況、通過顯微鏡下觀測的微觀增長和通過肉眼范圍內觀察的宏觀增長，記錄待測樣品、對照樣品和空白對照品培養(yǎng)后的各平行試驗的實際活菌數值的平均值，分別記為數值A、B和C。按下式計算抗菌蠶砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，獲得蠶砂制品的抗菌性能，以百分率計。
[0013]本實施例的具體實施步驟如下，(I)金黃色葡萄球菌凍干菌菌粉中加入2mL溶菌肉湯，37°C 土 1°C恒溫振蕩培養(yǎng)18h，用接種針于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線，37°C 土 1°C，培養(yǎng)24小時，挑取典型的細菌菌落，接種于20mL營養(yǎng)肉湯中，37 °C ± TC，130r/min，振蕩培養(yǎng)18小時，得到活菌數為2 X 19CFlVmL細菌菌懸液；
(2)吸取2.5mL金黃色葡萄球菌菌懸液，加入含有9mL PBS的試管中，充分混勻，依次10倍稀釋至活菌數為220CFU的濃度，作為接種菌懸液；
(3)采用GB/T7568.6-2002標準真絲制品，剪取直徑為3.8±0.5cm的真絲圓片，真絲邊緣不超過0.3mm，兩片對稱縫制真絲加樣袋，121°C濕熱滅菌15min;
(4)在加樣袋中分別加入1.5g抗菌蠶砂及1.5g非抗菌蠶砂，加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預潤濕，使蠶砂的濕度平衡至90%以上，作為待測樣品及對照樣品。以不加蠶砂的加樣袋作為空白對照品。
[0014](5)用涂布棒將ImL濃度為220CFU的金黃色葡萄球菌菌懸液均勻分散于營養(yǎng)瓊脂平板表面，將待測樣品、對照樣品及空白對照品分別置于瓊脂平板表面，在每個待測樣品、對照樣品及空白對照品上分別均勻滴加0.2mL濃度為220CFU的金黃色葡萄球菌菌懸液，每個樣品3個平行試驗，37°C±1°C培養(yǎng)24h，得到抗菌性能檢測結果。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明所述的一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，操作簡單、速度快、使用成本低;通過利用溶出性抗菌劑可以離開蠶砂制品進入培養(yǎng)皿的特性，采用在蠶砂制品上接種測試菌的方法，利用肉眼及顯微鏡鏡檢等方法觀察蠶砂制品的微生物生長情況，來檢測蠶砂制品的抗細菌性能，從而實現對蠶砂制品的抗細菌性能的評估。適用于抗菌劑整理的蠶砂制品的抗細菌性能評估。
[0016]以上僅是本發(fā)明的具體應用范例，對本發(fā)明的保護范圍不構成任何限制。凡采用等同變換或者等效替換而形成的技術方案，均落在本發(fā)明權利保護范圍之內。
【主權項】
1.一種檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，其特征在于:具體步驟如下: 步驟1:細菌凍干菌菌粉中加入溶菌肉湯，37°C ± 1°C恒溫振蕩培養(yǎng)18小時，然后用接種針于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面劃線，37°C±1°C，培養(yǎng)24小時，此斜面可在2?8°C下保存I個月，作為斜面保藏菌； 步驟2:在步驟I得到的瓊脂斜面中挑取I個典型的細菌菌落，接種于20mL營養(yǎng)肉湯中，37 °C ± TC，振蕩培養(yǎng)18?20小時，得到細菌菌懸液;然后利用分光光度法測定細菌濃度，此菌懸液活菌數應達到I X 19?5 X 109CFU/mL; 步驟3:吸取步驟2中的細菌菌懸液1.8mL~2.5mL，移入裝有9mL PBS的試管中，充分混勻，依次進行10倍梯度稀釋，稀釋至活菌數為200CFU?250CFU的范圍，作為接種菌懸液； 步驟4:剪取真絲圓片，兩片對稱縫制真絲布袋作為加樣袋，真絲邊緣不超過0.3mm，121°〇濕熱滅菌15min; 步驟5:在步驟4中的加樣袋中分別加入抗菌蠶砂制品及非抗菌蠶砂制品，加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預潤濕，使蠶砂的濕度平衡至90%以上，作為待測樣品及對照樣品； 步驟6:將步驟4中的加樣袋加入含有0.05%非離子潤濕劑的無菌水預潤濕，作為抗菌性能檢測的空白對照品； 步驟7:取步驟3制備的接種菌懸液均勻涂布于瓊脂平板培養(yǎng)基中，將步驟5中的待測樣品、對照樣品及步驟6中的空白對照品分別置于瓊脂平板表面，取少量步驟3制備的接種菌懸液分別滴加于每個待測樣品、對照樣品及空白對照品上，37°C±1°C培養(yǎng)18?24小時，每個樣品至少3個平行試驗； 步驟8:在培養(yǎng)期間，記錄各樣品表面細菌生長情況，將待測樣品、對照樣品和空白對照品培養(yǎng)后的各平行試驗的實際活菌數值的平均值分別記為數值A、B和C。按下式計算抗菌蠶砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，獲得蠶砂制品的抗菌性能，以百分率計。2.根據權利要求1所述的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，其特征在于:所述菌株選用金黃色葡萄球菌ATCC 6538或大腸桿菌ATCC 11299或大腸桿菌ATCC8739或大腸桿菌ATCC29522。3.根據權利要求1所述的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，其特征在于:步驟3中的細菌菌懸液吸取量，根據大腸桿菌取吸取量的下限，金黃色葡萄球菌取吸取量的上限。4.根據權利要求1所述的檢測蠶砂制品抗細菌性能的方法，其特征在于:步驟4中的真絲加樣袋為GB/T7568.6-2002標準真絲制品，直徑3.8 ±0.5cm，真絲邊緣不超過0.3mm。
【文檔編號】C12R1/19GK105925662SQ201610420306
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月14日
【發(fā)明人】王毅婧, 董斌
【申請人】蘇州市職業(yè)大學