用于治療或預(yù)防乳腺癌的化合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一類用于治療或預(yù)防乳腺癌的化合物，其具體為2?苯基苯并硒唑類化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽及其易水解的前藥。本發(fā)明進(jìn)一步公開了含有這些化合物的藥物組合物以及該類化合物在制備在哺乳動物中治療或預(yù)防乳腺癌方面的用途。本發(fā)明化合物能有效地抑制或減少哺乳動物乳腺癌細(xì)胞的生長或增殖，同時，該類化合物對乳腺癌細(xì)胞以外的部分試驗細(xì)胞生長沒有抑制作用，具有良好的選擇性。該類化合物顯示藥效更明顯，選擇性高，毒性低，副作用小。
【專利說明】
用于治療或預(yù)防乳腺癌的化合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。具體涉及一類2-苯基苯并硒唑化合物、這類化合物的 制備方法、其藥學(xué)上可接受的鹽、其易水解的前藥或含有這些化合物的藥物組合物，作為制 備在哺乳動物中治療或預(yù)防乳腺癌方面的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 乳腺疾病是婦女常見病，主要包括乳腺增生癥、乳房纖維腺瘤（良性腫瘤）以及乳 腺癌（孟慶春，田云霞，等.石家莊女性乳腺疾病調(diào)查分析，河北醫(yī)藥，2012,34(6):917-919)。女性乳腺癌目前已成為世界第二大常見惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅女性健康。2012年全球新 發(fā)現(xiàn)的女性乳腺癌病例達(dá)167萬，占全部女性惡性腫瘤發(fā)病率的25.2% ;乳腺癌死亡人數(shù)達(dá) 52萬，占所有女性惡性腫瘤死亡的14 · 7 %左右（Bernard W.，Stewart，Christopher P ·， Wild World Cancer Report 2014,The international agency for research on cancer，World Health Organization.)。乳腺癌的發(fā)病具有明顯的地域分布差異，歐美地 區(qū)是全球乳腺癌最高發(fā)的地區(qū)，亞非地區(qū)發(fā)病率相對較低(Perera N.M.，and Gui G.P.， Multi-ethnic differences in breast cancer: current concepts and future directions，Int · J · Cancer，2003，106:463-467)。雖然歐美地區(qū)的乳腺癌發(fā)病率持續(xù)上升， 但其死亡率呈逐年下降，這主要得益于乳腺癌病人的早期檢測與治療；而亞非地區(qū)由于檢 測技術(shù)及治療手段的落后，使得乳腺癌發(fā)病率和死亡率都呈上升趨勢(Kawamura T.，and Sobue T.,Comparison of breast cancer mortality in five countries : France, Italy,Japan,the UK and the USA from the WHO mortality database(1960-2000), Jpn.J.Clin.Oncol. ,2005,35(12):758-759)。隨著中國女性生活方式、飲食習(xí)慣以及環(huán)境 因素的變化，乳腺癌正成為威脅中國女性健康的主要因素之一。
[0003] 臨床上按免疫組化技術(shù)，將乳腺癌依據(jù)受體水平(ER、PR、HER2)及細(xì)胞增殖基因標(biāo) 記物(Ki-67)分成不同亞型：1.三陰性型（ER、PR、HER2均陰性），2.Luminal型（ER、PR陽性，但 HER2、Ki67表達(dá)存在不同差異），3.HER2過表達(dá)型(ER、PR缺失，HER過表達(dá)），其中三陰性亞型 約占乳腺癌的10-20%，其惡性程度最高，極易發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，預(yù)后較其他亞型乳腺癌 差，內(nèi)分泌治療和革巴向治療無效（Tan A.R.，and Swain S.M.，Therapeutic strategies for triple-negative breast cancer,Cancer J.,2008,14(6):343-351)〇
[0004] 目前乳腺癌治療分為手術(shù)療法、放射療法以及輔助化學(xué)療法。手術(shù)治療仍是早期 乳腺癌治療的主要手段;乳腺癌的放射治療是術(shù)后控制局部復(fù)發(fā)的重要措施之一，保乳術(shù) 后加放療能顯著降低局部復(fù)發(fā)率，平均可降低75%(Lim M.，Bellon J.R.，Gelman R.，et al，A prospective study of conservative surgery without radiation therapy in select patients with stage I breast cancer,Int.J.Radiat.,Oncol. Biol.Phys., 2006,65(4):1149)。
[0005] 作為系統(tǒng)性輔助方式的化學(xué)療法在乳腺癌全身治療中被廣泛地重視起來，最開始 臨床上使用的是CMF(環(huán)磷酰胺/甲氨蝶呤/氟尿嘧啶）、CAF(環(huán)磷酰胺/多柔比星/氟尿嘧啶） 和FEC等的治療方案（Bonadonna G.，Brusamolino E.，et al，Combination chemotherapy as an adjuvant treatment in operable breast cancer,N.Engl.J.Med.,1976,294(8): 405-410)。紫杉類藥物如紫杉醇(paclitaxel, taxol)的問世，大大提高了早期乳腺癌患者 的生存率，也為轉(zhuǎn)移性乳腺癌的救治提供了幫助。紫杉類藥物機(jī)制是作用于微管系統(tǒng)，促進(jìn) 微管蛋白的聚合，抑制其解聚，使細(xì)胞周期移行阻斷在Μ期。但紫杉類藥物選擇性差，存在嚴(yán) 重的骨髓抑制、神經(jīng)毒性、心血管肝臟毒性、過敏反應(yīng)等副作用，給病患帶來了極大的身心 痛苦。目前內(nèi)分泌治療已作為Luminal亞型乳腺癌(雌激素受體/孕激素受體陽性)的標(biāo)準(zhǔn)輔 助治療方式，其可降低該亞型乳腺癌的年死亡率達(dá)31%以上(Gralow J.R.，Burtein H.J., Wood ff.,Preoperative therapy in invasive breast cancer:pathologic assessment and systemic therapy issues in operable disease,J.Clin.Oncol.,2008,26(5):814-819)。分子靶向治療是當(dāng)今乳腺癌治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)，在中國多項臨床試驗獲得較好的療效。 其中赫賽汀、Lapatinib為針對HER2過表達(dá)晚期乳腺癌患者的高效特異性單克隆抗體；貝伐 單抗對于紫杉類耐藥晚期乳腺癌也具有療效(Miller K.D.，Chap L.I.，Holmes F.A.，et al,Randomized phase III trial of capecitabine compared with bevacizumab plus capecitabine in patients with previously treated metastatic breast cancer, J. Cl in. Oncol.，2005，23(4): 792-799)。而三陰性型和HER2過表達(dá)型乳腺癌患者，由于其雌 激素受體和孕激素受體均為陰性，因此對他莫昔芬、阿那曲唑、來曲唑、依西美坦等傳統(tǒng)的 內(nèi)分泌治療均無反應(yīng)。因此，根據(jù)不同乳腺癌亞型，開發(fā)出具有針對性的抗乳腺癌制劑迫在 眉睫。
[0006] 以苯并噻唑為母體的化合物存在廣泛的生物活性(Weekes A.A.，and Westwell A.D.,2-Arylbenzothiazole as a privileged scaffold in drug discovery, Curr .Med.Chem. ,2009,16( 19) :2430-2440) Atevens等（W00114354A1)報道的一類2-苯基 苯并噁唑化合物或2-苯并噻唑及其衍生物，它們對乳腺癌細(xì)胞具有高選擇抑制活性。
[0008] Shi和Aiello等對該類化合物對乳腺癌細(xì)胞高選擇抑制活性進(jìn)行了報道(Shi D.-F.,Bradshaw T.D.,ffrigley S.,et al,Antitumour benzothiazoles.3.Synthesis of 2-(4-aminopheny1)-benzothiazoles and evaluation of their activities against breast cancer cell lines in vitro and in vivo .[J].J Med Chem.1996,39:3375-3384；Aiello S.,Wells G.,Stone E.L.,et al,Synthesis and biological properties of benzothiazole,benzoxazole,and chromen_4-〇ne analogues of the potent antitumor 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-fluorobenzothiazole(PMX-610,NSC721648), J.Med.Chem. ,2008,51:5135-5139.)。其作用機(jī)理是誘導(dǎo)P450酶系中CYP1A1的表達(dá)，再經(jīng) CYP1A1代謝成為高活性物質(zhì)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞DNA損傷和細(xì)胞凋亡(Bradshaw T.D.，Stevens M.F.G.,Westwell A.D.,The discovery of the potent and selective antitumour agent2-(4-amin〇-3-methylphenyl)benzothiazole(DF203)and related compounds .Curr.Med .Chem.,2001,8(2)：203-210；Rodriguez M.And Potter D.A., CYPlAlregulates breast cancer proliferation and surviral,Mol.Cancer Res.2013, 11(7):780-792；ffang K.and Guengerich F.P.,Bioactivation of fluorinated 2-aryl-benzothiazole antitumor molecules by human cytochrome P450s lAland 2ffland deactivation by cytochrome P4502S1,Chem.Res .Toxicol .,2012,25,1740-1751·)。此類 化合物以Phortress為代表進(jìn)入了 I臨床研究，但該化合物對肝臟和肺的毒性，以及無法確 定其最佳治療劑量而終止臨床試驗。這有可能是該化合物本身的毒性和缺陷造成此類化合 物沒有被進(jìn)一步研究。目前Phortress未能作為抗乳腺癌藥物進(jìn)一步在臨床被應(yīng)用。
[0009] Akama等報道了一系列的5,4'_二氨基_6,8,3'_三氟黃酮類化合物，具有良好的抗 腫瘤活性，尤其是針對乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用(Akama T.，Ishida H.，Kimura U.，et al,Structure-actuvity relationships of the 7-substituents of S^'-diamino-B, 8,3'-trifluoroflavone,a potent antitumor agent,J.Med.Chem.1998,41,(12):2056-2067)〇
[0011] 含硒藥物由于它在抗腫瘤、抗病毒以及治療神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病等方面的應(yīng)用，已 成為國內(nèi)外學(xué)者研發(fā)的熱點(diǎn)，藥物研究主要集中在抗腫瘤、抗炎和抗高血壓等方面 (Romualdo C.,Stefania C.,Marina D.G.,et al,Novel selenium-containing non-natural diamino acids,Tetrahedron Lett. ,2007,48(7): 1425-1427·)。其中，有機(jī)硒類 化合物在腫瘤防治方面的作用很早就已被廣泛研究。國內(nèi)外大量研究已表明，有機(jī)硒化合 物對一系列腫瘤有確切的抵抗作用，包括大腸癌、消化道腫瘤、呼吸道腫瘤、皮膚癌、肺癌、 結(jié)腸癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌等（El-bayoumy K.，and Sinha R.， Mechanisms of mammary cancer chemoprevention by organoselenium compounds, Mutat.Res.，2004(551):181-197.)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的目的是在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，提供一類新的2-苯基苯并硒唑類化合物。 該系列化合物對乳腺癌細(xì)胞生長具有十分良好的抑制作用，同時，該類化合物對乳腺癌細(xì) 胞以外的部分試驗細(xì)胞生長沒有抑制作用，具有良好的選擇性。從而該系列化合物可能成 為新一代選擇性高、毒性低、用于治療乳腺癌的新藥。
[0013] 本發(fā)明的目的可以通過以下措施達(dá)到：
[0014] -類通式(I)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥：
[0016]其中，
[0017] R1和R2分別獨(dú)立地選自H、D、鹵素、-cn3烷基、取代的&―3烷基、&-3烷氧基或取代 的Cl-3烷氧基，所述取代基選自D、鹵素或Cl-3烷氧基；
[0018] R3和R4分別獨(dú)立地選自Η、D、鹵素、-OH、-CN、-NH 2、取代的-NH2、&-3烷基、取代的C!-3 烷基、Cl-3烷氧基或取代的Cl-3烷氧基，所述取代基選自D、鹵素、Cl-3烷基或Cl-3烷氧基；
[0019] R5選自Η、-OH、-NH2、&-3烷基、取代的3烷基、3烷氧基或取代的3烷氧基，所述 取代基選自D、鹵素、-OH、烷氧基。
[0020] 在一種優(yōu)選方案中，其中：
[0021] R1和R2分別獨(dú)立地選自H、D、鹵素、-CNXh烷基、取代的&-3烷基、&- 3烷氧基或取代 的烷氧基，所述取代基選自D、FSCh烷氧基；
[0022] R3和R4分別獨(dú)立地選自Η、D、鹵素、-OH、-CN、-NH2、取代的-NH 2、&-3烷基、取代的C!-3 烷基、Cl-3烷氧基或取代的Cl-3烷氧基，所述取代基選自D、F、Cl-3烷基或Cl-3烷氧基；
[0023] R5選自3烷氧基或取代的&―3烷氧基，所述取代基選自D、F、-〇H、-NH 2 或Cl-3烷氧基。
[0024] 在一種優(yōu)選方案中，1^和1?2分別獨(dú)立地選自!1、0、？、(：1、-^-〇1 3、-0?3、-0〇13、- OCH2CH3、-〇CF3 或-0CHF2 〇
[0025] 在一種優(yōu)選方案中，R1和R2分別獨(dú)立地選自IDJJK-CKHh-CFh-OCHsS-OOfcOfeo
[0026] 在一種優(yōu)選方案中，R3和R4分別獨(dú)立地選自H、D、鹵素、-〇!1、-^-冊2、-(^ 3、-CH2CH3、-CF3、-0CH3、-OCH2CH3、-0CHF2 或-0CF3 〇
[0027]在一種優(yōu)選方案中，R5選自 H、-NH2、-CH3、-CF3、-〇CH3、-〇CHF 2、-〇CF3、-0CH2CH3、或-OCH2CF 3〇
[0028]本發(fā)明的一種優(yōu)選方案為采用具有式（II)結(jié)構(gòu)的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或 其易水解的前藥，
[0030] 其中R1-4的定義如上所述。
[0031] 在一種優(yōu)選方案中，式（II)或式（I)中，R1和R2分別獨(dú)立地選自H、D、F、C1、-CN、_ CH 3、-CF3 或-CHF2; R3 和 R4 分別獨(dú)立地選自 H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CF3、-0CH3、-OCH2CH3、-OCHF2 或-ocf3〇
[0032] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了以下具體的化合物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的 前藥:4-(苯并硒唑-2-基)-2-溴苯胺，2-溴-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺，4-(5-氟苯并硒 唑-2-基)-2-甲基苯胺，4-(5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺，2-溴-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)-6-甲 基苯胺，4-(5-溴苯并硒唑-2-基)-2-氯苯胺，2-甲基-4-(5-甲基苯并硒唑-2-基)苯胺，2-甲 基-4-[5-(三氟甲基）苯并硒唑-2-基]苯胺，2-(3,4-二甲氧基-苯基)-5-氟-苯并硒唑，4-(6-乙氧基苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺，4-(6-乙氧基-5-氟苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺， 5_ (苯并硒唑-2-基)-2-甲氧基苯酚，2-( 3，4-二甲氧基苯基)苯并硒唑，2-氟-4- (5-氟苯并 硒唑-2-基)苯胺，2-溴-6-氟-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺，5-(5-氟苯并硒唑-2-基)-2-甲 基苯胺，2-[3_氯-4-(三氟甲氧基)苯基]-5-氟苯并硒唑，4-(5-氘苯并硒唑-2-基)-2-甲基 苯胺，2，6-二氟-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺，2-氟-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)-6-甲基苯 胺。
[0033] 本發(fā)明的化合物可以通過以下方式制備：
[0035]通式（IA)2_硝基苯胺類化合物與亞硝酸異戊酯在三氟化硼乙醚存在條件下進(jìn)行 重氮化反應(yīng)生成相應(yīng)的氟硼酸重氮鹽(IB)，該重氮鹽再與硒氰酸鉀反應(yīng)得到硒氰酸苯酯類 化合物(1C)，然后在鈉/乙醇中反應(yīng)得到二硒類硝基化合物(ID)?；衔铮↖D)在一定條件下 還原得到相應(yīng)的氨基化合物，并進(jìn)一步與相應(yīng)的苯甲醛、苯甲酰氯或苯甲酸關(guān)環(huán)反應(yīng)。所得 苯并硒唑類化合物可能為最終產(chǎn)物，或經(jīng)過還原反應(yīng)、鹵化反應(yīng)或其它反應(yīng)得到相應(yīng)的目 標(biāo)產(chǎn)物(I)。以妒、1? 2、1?3、1?4和1?5基團(tuán)的定義如上所述。
[0036] 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明中的任一化合物、其藥學(xué)上可接 受的鹽作為活性成分或主要活性成分，輔以藥學(xué)上可接受的輔料。
[0037] 本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥可應(yīng)用于制備治療或預(yù) 防乳腺癌藥物方面。
[0038]除非另有說明，下列用在權(quán)利要求書和說明書中的術(shù)語有如下含義：
[0039] "氫"，是指氕(1H)，它是氫元素的主要穩(wěn)定同位素。
[0040] "氖"，是指氫的一種穩(wěn)定形態(tài)同位素，也被稱為重氫，其元素符號為D。
[0041] "鹵素"，是指氟原子，氯原子，溴原子或碘原子。
[0042] "羥基"，是指-OH基團(tuán)。
[0043] "氰基"，是指-CN基團(tuán)。
[0044] "硝基"，是指-N02基團(tuán)。
[0045] "烷基"，是指1-10個碳原子的飽和的脂烴基，包括直鏈和支鏈基團(tuán)（本申請書中提 至_數(shù)字范圍，例如"1-10"，是指該基團(tuán)，此時為烷基，可以含1個碳原子、2個碳原子、3個碳 原子等，直至包括10個碳原子）。含1-4個碳原子的烷基稱為低級烷基。當(dāng)?shù)图壨榛鶝]有取代 基時，稱其為未取代的低級烷基。例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基或叔丁基 等。烷基可以是取代的或未取代的。
[0046] "烷氧基"表示-0-(未取代的烷基)和-0-(未取代的環(huán)烷基)基團(tuán)，其進(jìn)一步表示-〇_(未取代的烷基）。代表性實施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、環(huán)丙氧基等。
[0047] "藥學(xué)上可接受的鹽"是包含通式（I)的化合物與有機(jī)酸或無機(jī)酸形成的鹽，表示 保留母體化合物的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽。這類鹽包括：
[0048] (1)與酸成鹽，通過母體化合物的游離堿與無機(jī)酸或有機(jī)酸的反應(yīng)而得，無機(jī)酸例 如(但不限于)鹽酸、氫溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亞硫酸和高氯酸等，有機(jī)酸例如(但 不限于）乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、（D)或(L)蘋果酸、富馬酸、馬來酸、羥基苯甲酸、γ-羥基 丁酸、甲氧基苯甲酸、鄰苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、對甲苯磺酸、水 楊酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。
[0049] (2)存在于母體化合物中的酸性質(zhì)子被金屬離子代替或者與有機(jī)堿配位化合所生 成的鹽，金屬離子例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子，有機(jī)堿例如乙醇胺、二乙醇胺、 三乙醇胺、氨丁三醇、Ν-甲基葡糖胺等。
[0050] "藥用組合物"指的是在此描述的一種或多種化合物或者它們的藥學(xué)上可接受的 鹽和前藥與其它的化學(xué)成分，例如藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑的混合物。藥用組合物的 目的是促進(jìn)化合物對生物體的給藥。
[0051] "前藥"指的是在經(jīng)過生物體內(nèi)轉(zhuǎn)化后才具有藥理作用的化合物。前體藥物本身沒 有生物活性或活性很低，經(jīng)過體內(nèi)代謝后變?yōu)橛谢钚缘奈镔|(zhì)，這一過程的目的在于增加藥 物的生物利用度，加強(qiáng)靶向性，降低藥物的毒性和副作用。
[0052] 本發(fā)明進(jìn)一步要求保護(hù)包括上面所述的任一化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易 水解的前藥酰胺與其它藥用活性成分的藥物組合物。
[0053]本發(fā)明也包括上述任一化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其易水解的前藥酰胺或其 異構(gòu)體，可以用本領(lǐng)域已知的方式配制成臨床上或藥學(xué)上可接受的任一劑型。用于口服給 藥時，可制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等;也可制成□服液體制劑，如 口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩 解劑、潤滑劑等。用于腸胃外給藥時，可以制成注射劑，包括注射液、注射用無菌粉末與注射 用濃溶液。制成注射劑時，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中常規(guī)方法生產(chǎn)，配制注射劑時，可以不加 入附加劑，也可以根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑。
[0054] 本發(fā)明化合物具有全新的2-苯基-苯并硒唑母環(huán)結(jié)構(gòu)，為乳腺癌的治療或預(yù)防提 供了新的機(jī)理和治療方案，本發(fā)明的化合物具有以下特點(diǎn)：
[0055] (1)本發(fā)明化合物能有效地抑制或減少患腫瘤的哺乳動物腫瘤細(xì)胞的生長或增 殖。
[0056] (2)本發(fā)明化合物顯示較好的理化性質(zhì)，藥效更明顯，毒性低，副作用小。
【具體實施方式】
[0057]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明了，下面結(jié)合【具體實施方式】，對本 發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)該理解，這些描述只是示例性的，而并非要限制本發(fā)明的范圍。 [0058]合成實施例
[0059]實施例1:4-(苯并硒唑-2-基)-2_溴苯胺(7)的合成
[0061] 步驟A:在-10~-15°C下將2-硝基苯胺（15.0g，108mmol)的二氯甲烷（150mL)溶液 滴加到三氟化硼乙醚(23. lg，163mmol)中，攪拌15分鐘，然后在該溫度下滴加亞硝酸異戊酯 (15.26g，130mmol)的二氯甲烷(75mL)溶液。加完后繼續(xù)攪拌30分鐘，然后在-10~0°C攪拌 30分鐘。向反應(yīng)體系中滴加冷石油醚(250mL)，過濾，濾餅用冷甲基叔丁基醚(MTBE) (40mL) 洗滌，得2-硝基-苯基-氟硼酸重氮鹽(1) (18.7g)。收率為73.1 %。
[0062] 步驟B:在冰水浴下，向化合物1 (13 · 0g，54 · 9mmo 1)和水(300mL)的混合物中滴加硒 氰酸鉀(8.0g，55.5mmo 1)的水(80mL)溶液，加完后繼續(xù)攪拌30分鐘。過濾，濾餅用少量水洗 滌，在60°C真空干燥，得1-硝基-2-硒氰酸苯酯(2) (11.2g)。收率為89.8%。
[0063] 步驟C:室溫下將金屬鈉（6.(^，261111111〇1)加入到化合物2(10.58,46.2111〇1)和無水 乙醇（520mL)的混合物中，所得混合物在水浴下攪拌1小時。冷卻到0~5°C，過濾，濾餅用少 量冷乙醇洗滌，然后將收集到的固體懸浮在甲苯（100mL)中，升溫到回流使產(chǎn)品溶解，然后 趁熱過濾。濾液冷卻到0~5°C，析出固體，過濾，收集濾餅，得1，2-二(2-硝基苯基)二硒(3) (4.5g)。收率為 48.4%。
[0064] 步驟D:在40 °C下將鋅粉（13 · 5g，206mmol)加入到化合物3 (4 · 5g，11 · 2mmol)的醋酸 (90mL)懸浮液中，然后升溫到100°C并繼續(xù)攪拌2小時。將反應(yīng)混合物冷卻到50°C以下，緩慢 滴加6M鹽酸(40mL)，過濾除去不溶物，濾液用20%醋酸鈉水溶液調(diào)pH值至2~3，析出固體。 過濾，干燥濾餅，得二[(2-氨基苯基)硒基]鋅(4) (3.0g)。收率為77.8 %。
[0065] 步驟E:將化合物4 (3 · 0g，17 · 4mmo 1)和4-硝基-苯甲酰氯(4 · 77g，25 · 7mmo 1)的混合 物在110 °C攪拌2小時。冷卻到室溫，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(60mL)，用乙酸乙酯（50mL X 3)萃取，合并的有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng) 柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚= 1:5~3:1洗脫），得2-(4-硝基苯基)苯并 硒唑（5)(50011^)。收率為6.42%。1!1匪1?(0150-(16,4001〇^)38.40((1(1，了 = 2.0,6.8!^，2!1)， 8.21(d，J=8.8Hz，2H)，7.76-7.74(m，lH)，7.36-7.33(m，2H)，7.27-7.23(m，lH)。
[0066] 步驟F:將化合物5(450mg，1.48mmo 1)溶解于乙醇（10mL)，加入2M鹽酸（15mL)和錫 粉（2.258,6.74!11111〇1)，所得混合物在回流下攪拌2小時。減壓蒸除大部分溶劑，加入水 (15mL)，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9~10，二氯甲燒萃取(20mL X 3)，無水硫酸鈉干燥。減 壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:15~1:4洗脫），得 4-(苯并硒唑_2-基）苯胺(6)(30011^)。收率為74.2%。1!1匪1?(0150-(16,4001!^)38.07((1(1，了 = 0·8,8·0Ηζ，1Η)，7.89(dd，J = 0.8,8.0Hz，lH)，7· 72-7.69(m，2H)，7.46-7 ·42(ι?，1H)， 7.28-7.23(m，lH)，6.66-6.63(m，2H)，5.92(s，2H)。
[0067] 步驟G:在-10 °C下將NBS (117mg，0.657mmo 1)的二氯甲烷（15mL)溶液滴加到化合物 6(200mg，0 · 732mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，加完后在該溫度下繼續(xù)攪拌0 · 5小時。用水 (10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙 酯：石油醚=1:10洗脫），得4-(苯并硒唑-2-基）-2-溴苯胺（7) (179mg)。收率為69 · 5 %。4 NMR(DMS0-d6,400MHz)S8.10(dd，J=1.0,8.0Hz，lH)，8.02(d，J=1.0Hz，lH)，7.94(dd，J = 1·0,8·0Ηζ，1Η)，7.72(dd，J=1.0,8.0Hz，lH)，7.49-7.45(m，lH)，7 ·31-7·27(ι?，1Η)，6·88 ((1，了 = 8.4抱，1!〇,6.11(8,2!〇。]^化1，111/2):350.9[]\1-!1]-。
[0068] 實施例2:4-( 5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺（13)和2-溴-4-( 5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺 (14)的合成
[0070] 步驟A:在-10~-15 °C下將2-硝基-4-氟苯胺（5 · Og，32 · Ommol)的二氯甲烷(50mL) 溶液滴加到三氟化硼乙醚(6.8g，47.9mmol)中，攪拌15分鐘，然后在該溫度下滴加亞硝酸異 戊酯(4.5g，38.4_〇1)的二氯甲烷(25mL)溶液。加完后繼續(xù)攪拌30分鐘，然后在-10~0°C攪 拌30分鐘。向反應(yīng)混合物中滴加冷卻的石油醚(80mL)，過濾，濾餅用冷MTBE(lOmL)洗滌，得 2-硝基-4-氟苯基-氟硼酸重氮鹽(8)(13.0g)。該化合物不經(jīng)純化直接用于下一步反應(yīng)。
[0071] 步驟B:在冰水浴下，向化合物8的粗品（13.0g)和水（170mL)的混合物中滴加硒氰 酸鉀(4.84g，33.6mmol)的水（30mL)溶液，加完后繼續(xù)攪拌20分鐘。過濾，濾餅用少量水洗 滌，在60°C真空干燥，得4-氟-2-硝基-1-硒氰酸苯酯(9)(9. lg)。該化合物不經(jīng)純化直接用 于下一步反應(yīng)。
[0072] 步驟C:室溫下將金屬鈉(4.1g，178mmol)加入到化合物9的粗品（9.1g)和無水乙醇 (300mL)的混合物中，所得混合物在水浴下攪拌1小時。冷卻到0~5°C，過濾，濾餅用少量冷 乙醇洗滌。將收集到的固體懸浮在甲苯(80mL)中，升溫到回流使產(chǎn)品溶解，然后趁熱過濾。 濾液冷卻到0~5°C，析出固體，過濾，收集濾餅，得1，2-二（4-氟-2-硝基苯基）二硒（10) (2. Og)。步驟A、B和C三步反應(yīng)總收率為21.9 %。
[0073] 步驟D:將化合物10(1.49g，3.4mmol)和雷尼鎳（1.2g)懸浮在異丙醇（30mL)中，加 入85 %水合肼（1.8mL)，所得混合物升溫到回流并繼續(xù)攪拌2.5小時。通過硅藻土趁熱過濾， 濾餅用少量異丙醇洗滌，收集濾液。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物利用減壓法柱層析純化(200-300目 硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:10~1:5洗脫），得6 · 6 ' -二硒基二(3-氟苯胺）（11) (370mg)。收 率為28.8%。
[0074] 步驟E:在氮?dú)庀聦⒑谢衔?1(37〇11^，0.978111111〇1)、4-硝基苯甲醛（29611^， 1 · 958mmol)、焦亞硫酸鈉（372mg，1 · 956mmol)和無水DMS0(15mL)的混合物在120°C攪拌72小 時。冷卻到室溫，加入飽和氯化銨水溶液(60mL)，用乙酸乙酯(25mL X 3)萃取，無水硫酸鈉干 燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物利用減壓法柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:50 洗脫），得5-氟_2-(4-硝基苯基）苯并硒唑（12)(7611^)。收率為12.1%。 1!1匪1?(0130-(16， 300ΜΗζ)δ8·39-8.28(m，5H)，8.01(dd，J=2.4,9.9Hz，lH)，7.41-7.34(m，lH)。
[0075] 步驟F:將化合物12 (70mg，0.218mmo 1)溶解于乙醇（5mL)，加入水合氯化亞錫 (246mg，1.09mmo 1)，所得混合物在回流下攪拌5小時。冷卻到室溫，加入飽和食鹽水(20mL)， 用乙酸乙酯（25mLX3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物利用減壓法柱層析純化 (200-300目硅膠，乙酸乙酯：石油醚=1:15~1:5洗脫），得4-(5-氟苯并硒唑-2-基）苯胺 (13) (50mg)。收率為78.8%，MS(EI，m/z) :291.0[Μ-Η] -。
[0076] 步驟G:在冰鹽浴下將NBS( 29 · 6mg，0 · 166mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液滴加到化合 物13 (44mg，0.15lmmo 1)的二氯甲烷(40mL)溶液中，加完后在該溫度下繼續(xù)攪拌10分鐘。用 水(20mLX2)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200-300目硅膠，乙 酸乙酯:石油醚=1:20洗脫），得2-溴-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺（14)。1!1匪1?(0150-(16， 300ΜΗζ)δ8·14-8·09(m，1H)，8.03(d，J=1.8Hz，lH)，7.78-7.70(m，2H)，7.23-7.16(m，lH)， 6.87(dJ = 8.4HzaH),6.14(s,2H)〇MS(EI,m/z)：369.0[M-H]_〇.
[0077] 實施例3:4-(5-氟苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺（17)的合成
[0079] 步驟A:在40°C下將鋅粉(5.5g，84. lmmo 1)加入到化合物10(2.0g，4.57mmol)的醋 酸(40mL)懸浮液中，然后升溫到100°C并繼續(xù)攪拌3小時。將反應(yīng)混合物冷卻到50°C以下，緩 慢滴加6M鹽酸(40mL)，過濾除去不溶物，濾液用20%醋酸鈉調(diào)pH值至2~3，有固體析出。過 濾，干燥濾餅，得二[(2_氨基-4-氟苯基)硒基]鋅(15) (1.2g)。收率為61.9%。
[0080] 步驟B :將化合物15 (590mg，3 · lOmmol)和3-甲基-4-硝基苯甲酰氯（663mg， 3.32mmol)的混合物在100°C攪拌4小時。冷卻到室溫，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（15mL)，用 乙酸乙酯萃取(30mL X 2)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水（1 OmL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓 蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:15~1:1洗脫），得5-氟-2-(3-甲基-4-硝基苯基）苯并硒唑（16)(75〇11^)。收率為72.2%。 1!1匪1?(013〇-(16， 300ΜΗζ)δ8 ·32-8· 27(m，1H)，8· 19-8.13(m，3H)，7.98(dd，J = 2.4,9.9Hz，lH)，7.40-7·33(ι?， lH)，2.64(s，3H)〇
[0081 ] 步驟C:將化合物16(20011^，0.597111111〇1)溶解于乙醇（51^)，加入31鹽酸（41^)和錫 粉(8001^，6.74111111〇1)，所得混合物在回流下攪拌1.5小時。減壓蒸除大部分溶劑，加入水 (15mL)，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)pH值9~10,乙酸乙酯萃取(20mLX2)，無水硫酸鈉干燥。減壓 蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:15~1:4洗脫），得4-(5_氟苯并硒唑-2-基）-2-甲基苯胺（17) (103mg)。收率為56 · 4%。4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ 8.08-8.05(m，lH)，7.72-7.69(m，lH)，7.62-7.57(m，2H)，7.18-7.13(m，lH)，6.68(d，J= 8.4抱，1!〇,5.75(8,2!〇,2.14(8,3!〇。]^化1，111/2):305.0[]\1-!1]-。
[0082] 實施例4:2-溴-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)-6-甲基苯胺（18)的合成
[0084] 室溫下將陬5(5711^，0.320_〇1)加到化合物17(8811^，0.229111111〇1)的01^(511^)溶液 中，加完后在該溫度下繼續(xù)攪拌20分鐘。加入水(25mL)，用乙酸乙酯（20mL X 2)萃取，合并的 有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析 純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1: 5洗脫），得2-溴-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)-6-甲基苯胺（18)。（73mg)。收率為83.0% ,Η NMR(DMS0-d6,500MHz)S8 ·13-8·10(ι?，1H)，7.92 (d，J=2.0Hz，lH)，7.77-7.74(m，lH)，7.64(s，lH)，7.21-7.17(m，lH)，5.76(s，2H)，2.26(s， 3H)〇MS(EI,m/z)：384.9[M+H] +〇
[0085] 實施例5:4-(5-溴苯并硒唑-2-基)-2-氯苯胺(25)的合成
[0087] 步驟A、B和C分別參見實施例2步驟A、B和C。
[0088] 步驟D:將化合物21 (1 · 9g，3 · 393mmol)溶解于乙醇（40mL)，加入水合氯化亞錫 (3.8g，16.84mmol)，所得混合物在氮?dú)庀禄亓鲾嚢?.5小時。冷卻到室溫，加入飽和食鹽水 (20mL)，用乙酸乙酯(25mLX3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物利用減壓法柱層 析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:10洗脫），得6,6'_二硒基二(3-溴苯胺）（22) (4 5〇11^)。收率為26·5%。
[0089] 步驟E:參見實施例2步驟E，得5-溴-2-( 4-硝基苯基)苯并硒唑（23)。1!1匪1?(0130-d6,300MHz)S8.39-8.30(m，5H)，8.23(d，J = 9.0Hz，lH)，7.61(d，J = 9.0Hz，lH)。
[0090] 步驟F和G:參見實施例2步驟F，將化合物23還原得化合物24。將化合物24 (80mg， 0 · 227mmo 1)溶解于DMF(5mL)，加入NCS(34mg，0 · 255mmol)，所得混合物在室溫下攪拌過夜。 加入水(25mL)，用乙酸乙酯（15mL X 3)萃取，合并的有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液（1 OmL)洗 滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚 =1:15洗脫），得4-(5-溴苯并硒唑-2-基)-2-氯苯胺（25)。 1!1匪1?(0130-(16,3001〇^)68.10-8.04(m，2H)，7.87(s，lH)，7.68(d，J = 9.0Hz，lH)，7.43(d，J = 9.0Hz，lH)，6.88(d，J = 9.0抱，1!〇,6.16(8,2!〇。]^化1，111/2):384.9[]\1-!1]-。
[0091] 實施例6:2-甲基-4-(5-甲基苯并硒唑-2-基)苯胺(26)的合成
[0093]化合物26的制備方法參見實施例2中的步驟A、B、C和D以及實施例5中的步驟E和F。 其中實施例2步驟A中的2-硝基-4-氟苯胺用2-硝基-4-甲基苯胺替代，實施例5步驟E中的4-硝基苯甲醛用3-甲基-4-硝基苯甲醛替代。 1H MMR(DMS0-d6,500MHz)S7.89(d，J = 8.0Hz， 1H)，7.71(s，1H)，7.59-7.54(m，2H)，7.08(d，J = 8.0Hz，lH)，6.67(d，J = 8.0Hz，lH)，5.62 (8,2!〇,2.41(8,3!〇,2.14(8,3!〇。]^化1，111/2):301.0[]\1-!1]-。
[0094] 實施例7:2-甲基-4-[5-(三氟甲基)苯并硒唑-2-基]苯胺(27)的合成
[0096]化合物27的制備方法參見實施例2中的步驟A、B、C和D以及實施例5中的步驟E和F。 其中實施例2步驟A中的2-硝基-4-氟苯胺用2-硝基-4-三氟甲基苯胺替代，實施例5步驟E中 的4-硝基苯甲醛用3-甲基-4-硝基苯甲醛替代。 1H NMR(DMS0-d6,500MHz)S8.31(d，J = 8.0Hz，lH)，8.16(s，lH)，7.65-7.62(m，2H)，7.55(d，J = 8.5Hz，lH)，6.70(d，J = 8.5Hz，lH)， 5.77(8,2!〇,2.15(8,3!〇。]^"1，111/2):355.0[]\1-!1]-。
[0097]實施例8:2-(3,4-二甲氧基-苯基)-5-氟-苯并硒唑(28)的合成
[0099] 化合物28的制備方法參見實施例3步驟B，其中反應(yīng)式中的酰氯由相應(yīng)的酸跟氯化 亞砜反應(yīng)制備。MS(EI，m/z): 338 · 1 [M+H] +。
[0100] 實施例9:4-(6-乙氧基苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺(29)的合成
[0102]化合物29的制備方法參見實施例2中的步驟A、B、C和D以及實施例5中的步驟E和F。 其中步驟A中的2-硝基-4-氟苯胺用2-硝基-5-氟苯胺替代，實施例5步驟E中的4-硝基苯甲 醛用3-甲基-4-硝基苯甲醛替代。在反應(yīng)步驟C和F的還原反應(yīng)中，其溶劑為乙醇，導(dǎo)致了苯 并硒唑6位的F被乙氧基所取代。反應(yīng)的最終產(chǎn)物為4-(6-乙氧基苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯 胺（29)</H NMR(DMS0-d6,300MHz)S7.76(d，J = 8.7Hz，lH)，7.63(s，lH)，7.55-7.50(m，2H)， 6.99(d，J = 8.1Hz，lH)，6.66(d，J = 8.1Hz，lH)，5.58(s，2H)，4.09(q，J = 6.6Hz，2H)，2.13 (s,3H),1.35(t J = 6.6Hz,3H)〇MS(EI,m/z)：333.0[M+H] + 〇 [0103] 實施例10:4-(6-乙氧基-5-氟苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺(30)的合成
[0105]化合物30的制備方法參見實施例2中的步驟A、B、C和D以及實施例5中的步驟E和F。 其中實施例2步驟A中的2-硝基-4-氟苯胺用2-硝基-4，5-二氟苯胺替代，實施例5步驟E中的 4-硝基苯甲醛用3-甲基-4-硝基苯甲醛替代。在反應(yīng)步驟C和F的還原反應(yīng)中，其溶劑為乙 醇，導(dǎo)致了苯并硒唑6位的F被乙氧基所取代。反應(yīng)的最終產(chǎn)物為4-(6-乙氧基-5-氟苯并硒 唑-2-基）-2-甲基苯胺（30)</Η NMR(DMS0-d6,300MHz)S7.85(d，J = 8.4Hz，lH)，7.72(d，J = 12·0Ηζ，1Η)，7.55-7.50(m，2H)，6.66(d，J = 8.1Ηz，1Η)，5.61(s，2H)，4.16(q，J = 6.9Hz， 2H),2.13(s,3H)a.38(t J = 6.9Hz,3H)〇MS(EI,m/z)：351.0[M+H] + 〇
[0106] 實施例11:5-(苯并硒唑-2-基)-2-甲氧基苯酚(32)的合成
[0108] 以化合物3為原料，化合物32的制備方法參見實施例5中的步驟D和實施例2中的步 驟E。其中實施例2步驟E中的4-硝基苯甲醛用3-羥基-4-甲氧基苯甲醛替代。4 ^R(DMS〇-d6,300MHz)S9.55(s，lH)，8.13(d，J = 7.5Hz，lH)，7.99(d，J = 7.5Hz，lH)，7 ·51-7·44(ι?， 3H),7.36-7.30(maH),7.06(dJ = 8.4HzaH),3.85(s,3H)〇MS(EI,m/z)：306.0[M+H] + 〇
[0109] 實施例12:2-(3,4-二甲氧基苯基)苯并硒唑(33)的合成
[0111] 將含有化合物32(90mg，0 · 296mmol)、碳酸鐘（61mg，0 · 441 mmol )、鵬甲燒（126mg， 0 · 888mmo 1)和DMF (8mL)的混合物在50 °C攪拌過夜。加入水(40mL)，用乙酸乙酯（20mL X 3)萃 取，合并的有機(jī)相用飽和食鹽水（15mLX2)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱 層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚= 1:5洗脫），得2-(3,4_二甲氧基苯基)苯并硒 _(33)</ΗΜ?(0Μ50-(?6,300ΜΗζ)δ8·13((υ = 7·8Ηζ，1Η)，8·02((υ = 7·8Ηζ，1Η)，7·60-7.55(m，2H)，7.52-7.47(m，lH)，7 ·36-7·31(ι?，1Η)，7· 10(d，J = 8.1Hz，1H)，3.89(s，3H)， 3.85(s,3H)〇MS(EI,m/z)：320.0[M+H]+〇
[0112] 實施例13:2-氟-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺(34)和2-溴-6-氟-4-(5-氟苯并硒 唑-2-基)苯胺(35)的合成
[0114] 步驟A:向化合物11 (800mg，2 · 12mmo 1)的甲苯（15mL)溶液中加入三丁基膦（1 · 28g， 6.33mmol)，然后在氮?dú)庀聰嚢?分鐘，再加入3-氟-4-硝基苯甲酸(392mg，2.12mmol)，所得 混合物在氮?dú)庀禄亓鲾嚢?8小時。冷卻到室溫，加入水(25mL)，用飽和碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH值 至9~10。用乙酸乙酯(20mL X 3)萃取，合并的有機(jī)相用飽和食鹽水（15mL)洗滌，無水硫酸鈉 干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:15洗脫）， 得2_氟-4-(5-氟苯并硒唑-2-基）苯胺（34)。4 NMR(DMS〇-d6，300MHz) δ8 · 13-8 · 09(m，1H)， 7·77-7·73(m，1Η)，7·69-7.64(m，lH)，7.59-7.56(m，lH)，7.22-7.16(m，lH)，6.88-6.83(m， 1!〇,6.00(8,2!〇。]^化1，111/2):309.0[]\1-!1]-。
[0115] 步驟B :2-溴-6-氟-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺(35)的制備以化合物34為原料， 方法參見實施例2中的步驟G</H NMR(DMS0-d6,500MHz)S8.16-8.13(m，lH)，7.90(s，lH)， 7.79(dd，J = 2.0，10.0Hz，lH)，7.73(dd，J = 2.0，10.0Hz，lH)，7.24-7.20(m，lH)，6.12(s， 2H)〇MS(EI,m/z)：388.9[M+H] +〇
[0116] 實施例14:5-(5-氟苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺(37)的合成
[0118] 步驟 A:將化合物ll(800mg，2. 12mmol)和三丁基膦（1.288,6.32111111〇1)的甲苯 (15mL)溶液在氮?dú)庀聰嚢?分鐘，然后加入3-硝基-4-甲基苯甲酸（380mg，2.09mmol)，所得 混合物在氮?dú)庀禄亓鲾嚢?8小時。冷卻到室溫，加入水(30mL)，用2M氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值 至9~10。用乙酸乙酯萃取(20mLX3)，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化 (200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:20~1:2洗脫），得5-氟-2-(4-甲基-3-硝基苯基)苯 并硒唑(36)(10711^)。收率為15.3%。
[0119] 步驟B:制備5-(5-氟苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺(37)以化合物36為原料，實驗操 作參見實施例2中的步驟Fc/H NMR(DMS0-d6,500MHz)S8.17-8.14(m，lH)，7.82(dd，J = 2.5， 10·0Ηζ，1Η)，7.38(s，lH)，7.27-7.23(m，lH)，7.18(d，J = 8.0Hz，lH)，7.10(d，J = 8.0Hz， 1!〇,2.13(8,3!〇。]^化1，111/2):305.1[]\1-!1]-。
[0120] 實施例15:2-[3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]-5-氟苯并硒唑(38)的合成
[0122 ]化合物38的制備方法參見實施例2中的步驟E，其中實施例2步驟E中的4-硝基苯甲 醛用3-氯-4-(三氟甲氧基)苯甲醛替代。4 NMR(DMS0-d6,300MHz)S8.35(d，J=1.2Hz，lH)， 8·30-8·27(m，1H)，8·17-8·15(m，1H)，7·98-7.96(m，lH)，7.77-7.75(m，lH)，7·38-7·34(ι?， 1!〇。]\^化1，111/2) :394.0[]\1-!1]-。
[0123] 實施例16:4-(5-氘苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺(40)的合成
[0125] 步驟A:以化合物22和3-甲基-4-硝基苯甲醛為原料，制備化合物39的實驗操作參 見實施例2中的步驟E</H NMR(DMS0-d6,400MHz)S8.35(s，lH)，8.24(d，J = 8.4Hz，lH)，8.19 (s，lH)，8.15-8.14(m，2H)，7.62(dd，J=2.0,8.4Hz，lH)，2.65(s，3H)。
[0126] 步驟B:將化合物39(42mg，0.106mmo 1)懸浮在DMF(5mL)中，加入重水(0.5mL)及5 % 鈀碳（l〇mg)，所得混合物在氘氣中常壓攪拌過夜。通過硅澡土過濾后，加入水(20mL)，用乙 酸乙酯(20mL X 2)萃取，合并的有機(jī)相用飽和食鹽水（1 OmL X 2)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓 蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:10洗脫），得4-(5-氘 苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺(40)。4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) δ8 · 06-8 · 02 (m，2H)，7 · 62-7 · 59 (m,2H),8.16(ddJ = 2.0,8.8HzaH),6.68(d,J = 8.0HzaH),5.78(s,2H),2.14(s,3H)〇MS (EI，m/z):288.0[M-H]-。
[0127] 實施例17:2，6-二氟-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺(41)的合成
[0129]化合物41的制備方法參見實施例13中的步驟A，其中實施例13步驟A中的3-氟-4-硝基苯甲酸用3，5-二氟-4-硝基苯甲酸替代。 1H NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ8 · 18-8 · 14(m，1H)， 7.79(dd，J = 2.4，10.0Hz，lH)，7.62(dd，J = 2.4,7.2Hz，2H)，7.26-7.21(m，lH)，6.11(s， 2!〇。]\^化1，111/2):327.0[]\1-!1]-。
[0130] 實施例18:2-氟-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)-6-甲基苯胺(45)的合成
[0132] 步驟A:在冰水浴下，將NBS(5 · 0g，28 · lmmol)的DMF(20mL)溶液在氮?dú)庀碌渭拥?-氟-6-甲基苯胺(3.5g，28. Ommol)的DMF( 10mL)溶液中，加完后繼續(xù)攪拌5分鐘。然后除去冰 水浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌0.5小時。加入水（150mL)，用乙酸乙酯(80mL X 3)萃取，合并 的有機(jī)相依次用飽和碳酸氫鈉溶液(40mL X 2)和飽和食鹽水(40mL X 2)洗滌，無水硫酸鈉干 燥。減壓蒸除溶劑，得4-溴-2-氟-6-甲基苯胺(42)(5.3g)。收率為92.8 %。
[0133] 步驟B:將含有化合物42(5.38,26.0_〇1)、氰化亞銅(3.(^，33.5臟〇1)和1甲基吡 咯烷酮（15mL)的混合物在氮?dú)庀?80 °C攪拌過夜。加入水(75mL)，用乙酸乙酯（50mL X 3)萃 取，合并的有機(jī)相依次用水(30mLX 2)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸 除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:30~1:5洗脫），得4-氨 基-3-氟-5-甲基苯甲腈(43)(2.96g)。收率為75.8%。
[0134] 步驟C:將含有化合物43 (2 · 95g，19 · 6mmol)、1M氫氧化鈉溶液（50mL)和乙醇（5mL) 的混合物在回流下攪拌過夜。冷卻到室溫，加入水(50mL)，用MTBE (20mL X 2)洗滌，產(chǎn)物在水 相。水相用2M鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3~4,析出固體。過濾，濾餅干燥，得4-氨基-3-氟-5-甲基苯甲 酸(44)(2.90g)。收率為 87.5%。
[0135] 步驟D:向含有化合物 11 (1.74g，4.60mmo 1)、化合物44 (600mg，3.55mmo 1)和甲苯 (25mL)的混合物中加入三丁基膦（2.15g，10.6mmo 1)，所得混合物在氮?dú)庀禄亓鲾嚢?8小 時。冷卻到室溫，加入水(40mL)，用2M氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9~10。用乙酸乙酯（40mL X 3)萃取，合并的有機(jī)相用飽和食鹽水(25mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng) 柱層析純化(200-300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚=1:100~1:30洗脫），得2-氟-4-(5-氟苯并 硒唑-2-基）-6-甲基苯胺（45)</H NMR(DMS0-d6,400MHz)S8.14-8.10(m，lH)，7.77-7.74(m， lH),7.58-7.55(maH),7.51(saH),7.22-7.17(maH),5.76(s,2H),2.22(s,3H)〇MS(EI,m/ ζ):323·0[Μ-Η]-〇
[0136] 生物活性實施例
[0137] 實施例19:化合物對乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-468的生長抑制作用
[0138] 實驗方法與結(jié)果
[0139] 1.乳腺癌細(xì)胞MCF-7(Luminal型細(xì)胞）和MDA-MB-468(基底樣型細(xì)胞，三陰性型但 未發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化)購于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心，用DMEM培養(yǎng)液 (含10 %胎牛血清，l〇〇U/mL青霉素，0. lmg/mL鏈霉素），在37°C，5 %C02孵箱培養(yǎng)至細(xì)胞密度 達(dá)90%左右。
[0140] 2.按3X 103/孔細(xì)胞數(shù)接種于96孔板中，置37°C，5%C02孵箱培養(yǎng)24h。
[0141] 3.用DMEM培養(yǎng)液配制不同濃度梯度的試驗化合物，并按100μL孔加入，做為試驗 化合物孔;按l〇〇yL/孔加入DMEM培養(yǎng)液，做為陰性對照孔。置37°C，5 %⑶避箱中，MCF-7細(xì) 胞培養(yǎng)120h，MDA-MB-468細(xì)胞培養(yǎng)72h。
[0142] 4.將Resazurin(15mg/50mL)'Methylene Blue(25mg/10mL)'Potassium ferricyanide(0 · 329g/100mL) 'Potassium ferrocyanide(0 · 422g/100mL)溶于PBS(0 · 1M、 口!1=7.4)中，配制成41311^131116溶液，待用。
[0143] 5·細(xì)胞用PBS(0· 1Μ、ρΗ=7·4)清洗2次，按100μL7孔加入Alamar Blue溶液;在無細(xì) 胞的孔中加入l〇〇yL Alamar Blue溶液，做為空白對照孔。將96孔板置37°C，5%C02孵箱中 培養(yǎng)3h。
[0144] 6.用酶標(biāo)儀Victor X4(Perkin Elmer)在530/590nm處檢測細(xì)胞熒光值。每個濃度 重復(fù)測定4次，得出平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差。按以下公式計算細(xì)胞存活率：
[0146] 7.根據(jù)細(xì)胞存活率利用Prism Graph軟件得出藥物對細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)。 實驗結(jié)果見表1。
[0147] 表1.化合物對MCF-7和MDA-MB-468細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC5Q，nM)
[0150] *注:表1中陽性藥物紫杉醇在其最高藥物濃度（500nM)下，僅能抑制70%的MCF-7 細(xì)胞生長，由此造成了軟件計算的紫杉醇對MCF-7細(xì)胞株的IC 5Q結(jié)果偏低。
[0151] 實施例20:化合物對人肺癌細(xì)胞H1299、人結(jié)腸癌細(xì)胞HT29、人肝癌細(xì)胞SK-HEP-1、 人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、人正常肝細(xì)胞L-02和WRL-68的生長抑制作用
[0152] 試驗化合物7、17、18、34、35和41對人肺癌細(xì)胞H1299、人結(jié)腸癌細(xì)胞HT29、人肝癌 細(xì)胞SK-HEP-1、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、人正常肝細(xì)胞L-02和WRL-68進(jìn)行了生長抑制試驗，方 法參見實施例19 "化合物對乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-468的生長抑制作用。"化合物7、17、 18、34、35和41對上述細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC 5Q均大于ΙΟμΜ，無明顯抑制效果。陽性藥物紫杉 醇對上述6株細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC5Q在1.59~15.31ηΜ的范圍內(nèi)。
[0153] 實驗結(jié)果顯示，化合物7、17、18、34、35和41對乳腺癌細(xì)胞如?-7和1?從-1?-468均有 十分良好的生長抑制作用；對試驗的其它細(xì)胞株如111299、!^29、31(-冊?-1、!1(：1'116、1^-02和 WRL-68的半數(shù)抑制濃度IC5Q均大于ΙΟμΜ;而陽性藥物紫杉醇對上述除乳腺癌細(xì)胞以外的癌 細(xì)胞及正常細(xì)胞仍然有很強(qiáng)的抑制毒性。由此表明，本專利提供的化合物對乳腺癌細(xì)胞的 抑制作用具有顯著的選擇性。
【主權(quán)項】
1. 通式(I)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥：其中， R1和R2分別獨(dú)立地選自H、D、鹵素、-CNXh烷基、取代的(^-3烷基、Ch烷氧基或取代的 Cl-3烷氧基，所述取代基選自D、鹵素或Cl-3烷氧基； R3和R4分別獨(dú)立地選自Η、D、鹵素、-OH、-CN、-NH2、取代的-NH2、&-3烷基、取代的3烷基、 Cl-3烷氧基或取代的Cl-3烷氧基，所述取代基選自D、鹵素、Cl-3烷基或Cl-3烷氧基； R5選自Η、-OH、-NH2、&-3烷基、取代的&- 3烷基、&-3烷氧基或取代的Ci-3烷氧基，所述取代 基選自D、鹵素、-OH、烷氧基。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥，其中 R1和R2分別獨(dú)立地選自H、D、鹵素、-CNXh烷基、取代的(^-3烷基、Ch烷氧基或取代的 烷氧基，所述取代基選自D、FSCh烷氧基； R3和R4分別獨(dú)立地選自Η、D、鹵素、-OH、-CN、-NH2、取代的-NH 2、&-3烷基、取代的3烷基、 烷氧基或取代的烷氧基，所述取代基選自D、F、烷基或烷氧基； R5選自m-NHhCi-3烷氧基或取代的心―3烷氧基，所述取代基選自D、F、-〇H、-NH 2或 Cl 一 3烷氧基。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥，其中R1和R2 分別獨(dú)立地選自 H、D、F、Cl、-CN、-CH3、-CF3、-0CH3、-OCH2CH3、-0CF3 或-0CHF2 〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥，其中R3和R4 分別獨(dú)立地選自 Η、D、鹵素、-OH、-CN、-NH2、-CH3、-CH2CH 3、-CF3、-〇CH3、-〇CH2CH3、-〇CHF 2 或-OCF3〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥，其中R5選自 Η、-NH2、-CH3、-CF3、-0CH3、-OCHF2、-0CF3、-OCH2CH3 或-OCH2CF3 〇6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥，其中該化合 物為式(II)所示的化合物，7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥，其中R1和R2 分別獨(dú)立地選自Η、D、F、Cl、-CN、-CH3、-CF3或-CHF2; R3和R4分別獨(dú)立地選自!1、0、？、(：1、8廣1、-CN、-CH3、-CF 3、-〇CH3、-OCH2CH3、-0CHF2 或-〇CF3 〇8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥， 所述化合物選自： 4_ (苯并硒唑-2-基)-2-溴苯胺， 2-溴-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺， 4_ (5-氟苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺， 4_ (5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺， 2-溴-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)-6-甲基苯胺， 4_ (5-溴苯并硒唑-2-基)-2-氯苯胺， 2-甲基-4-(5_甲基苯并硒唑-2-基)苯胺， 2-甲基-4-[5-(三氟甲基)苯并硒唑-2-基]苯胺， 2- (3，4-二甲氧基-苯基)-5-氟-苯并硒唑， 4-(6-乙氧基苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺， 4-(6-乙氧基-5-氟苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺， 5_ (苯并硒唑-2-基)-2-甲氧基苯酚， 2- (3，4-二甲氧基苯基)苯并硒唑， 2_氟-4- (5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺， 2_溴-6-氟-4- (5-氟苯并硒唑-2-基)苯胺， 5_ (5-氟苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺， 2_ [3-氯-4-(三氟甲氧基)苯基]-5-氟苯并硒唑， 4-(5-氘苯并硒唑-2-基)-2-甲基苯胺， 2，6_二氣_4_ (5-氣苯并硒唑_2_基)苯胺， 2_氟-4-(5-氟苯并硒唑-2-基)-6-甲基苯胺。9. 一種藥物組合物，包含權(quán)利要求1-7中任一項所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽作 為活性成分或主要活性成分，輔以藥學(xué)上可接受的輔料。10. 權(quán)利要求1-7中任一項所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥在制 備治療或預(yù)防乳腺癌藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/41GK105949149SQ201610299350
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月6日
【發(fā)明人】史東方, 傅長金, 承曦, 朱江華
【申請人】江蘇新元素醫(yī)藥科技有限公司