異卡波肼的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了異卡波肼的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的異卡波肼的藥物組合物中含有異卡波肼和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，異卡波肼、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)糖尿病合并牙周炎具有治療作用；異卡波肼和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)糖尿病合并牙周炎的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療糖尿病合并牙周炎的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
異卡波肼的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及異卡波肼的新用途，具體涉及異卡波肼的藥物組 合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 異卡波肼為非選擇性單胺氧化酶抑制劑.與單胺氧化酶A和B產(chǎn)生不可逆性結(jié)合作 用，影響單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的代謝。單胺氧化酶受抑制后，可增加中樞神經(jīng)部位單胺含量，起 到抗抑郁作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種異卡波肼的藥物組合物，該藥物組合物中含有異卡波 肼和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，異卡波肼和該天然產(chǎn)物可協(xié)同治療糖尿病合并牙周炎。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0007] -種異卡波肼的藥物組合物，包括異卡波肼、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥 學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。
[0009] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將罌粟殼粉碎，用85~95%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用8 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70 %乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70 % 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0011] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療糖尿病合并牙周炎的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述異卡波肼的藥物組合物在制備治療糖尿病合并牙周炎的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0017] 本發(fā)明提供的異卡波肼的藥物組合物中含有異卡波肼和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn) 物，異卡波肼、化合物(I)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)糖尿病合并牙周炎具有治療作用;異卡波肼和化合 物（I)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)糖尿病合并牙周炎的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療糖尿病合 并牙周炎的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0019] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0020] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0021]分離方法：（a)將罌粟殼(2kg)粉碎，用90%乙醇熱回流提取(20LX 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫12 個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個(gè)柱體積）、20:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (8個(gè)柱 體積)和5:1(10個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用 正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1(8個(gè)柱體積）、5:1(10個(gè)柱體積)和2:1(5個(gè)柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0022] 結(jié)構(gòu)確證:HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z 469.3271，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C30H44〇4，不飽和度為9。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ppm，CDC13，600MHz): H-1 (1 · 47，m)，H-1 (2 · 90， ddd，J=13.2,7.3,4.4Hz)，H-2(2.41，ddd，J=15.8,6.4,4.4Hz)，H-2(2.65，ddd，J=15.8， ll.l，7.3Hz)，H-5(1.31，m)，H-6(1.52，m)，H-6(1.63，m)，H-7(1.78，m)，H-7(1.91，m)，H-9 (2.55，s)，H-15(5.43，d，J=10.3Hz)，H-16(5.52，d，J=10.3Hz)，H-18(2.86，d，J = 11.5Hz)，H-19(1.73，m)，H-21(1.34，m)，H-21(1.57，m)，H-22(1.66，m)，H-22(1.74，m)，H-23 (1.09，s)，H-24(1.06，s)，H-25(1.28，s)，H-26(1.26，s)，H-27(1.36，s)，H-28(0.89，s)，H-29(0.85，(1，了 = 6.3他），!1-30(1.23,8)，12-0!1(6.38,8);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。（卯111，〇)(：1 3， 125MHz):39.2(CH2，1-C)，34.3(CH2,2-C)，215.6(C，3-C)，47.5(C，4-C)，55.2(CH，5-C)，19.7 (CH2,6-C)，36.4(CH2,7-C)，51.0(C，8-C)，58.7(CH，9-C)，37.2(C，10-C)，196.2(C，n-C)， 144.8(C，12-C)，143.2(C，13-C)，38.6(C，14-C)，133.4(CH，15-C)，142.3(CH，16-C)，43.7 (C，17-C)，42.3(CH，18-C)，41.7(CH，19-C)，70.5(C，20-C)，35.8(CH2,21-C)，35.8(CH2,22-C)，26.6(CH3,23-C)，21.7(CH3,24-C)，15.7(CH3,25-C)，19.7(CH3,26-C)，14.8(CH 3,27-C)， 19 · 3(CH3，28-C)，11 · 2(CH3，29-C)，29 · 4(CH3，30-C)。紅外波譜表明該化合物含有α，β-不飽 和羰基（1705cm-4，羥基（3425cm-4，羰基（1760cm-3，雙鍵（1663cm-4和偕二甲基（1380cm 一 4基團(tuán)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有30個(gè)碳信號(hào)，包括八個(gè)甲基，六個(gè)亞甲基，六個(gè)次 甲基(兩個(gè)烯烴碳），以及十個(gè)季碳(兩個(gè)羰基，一對(duì)四取代烯烴碳，一個(gè)連氧碳），以上功能 結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為五環(huán)三萜結(jié)構(gòu)。 1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示的七個(gè)單峰 甲基質(zhì)子信號(hào) δΗ 1.09(3H，s)，1.06(3H，s)，1.28(3H，s)，1.26(3H，s)，1.36(3H，s)，0.89 (3H，s)和1.23(3H，s)，一個(gè)雙峰甲基質(zhì)子信號(hào)δ Η 〇.85(3!1，(1，1 = 6.3抱）以及1!1-匪1?數(shù)據(jù)表 明該化合物為烏蘇烷型三萜類化合物。在該烏蘇烷型化合物中，C-3和C-l 1位形成酮基，C-12與C-13、C-15與C-16形成雙鍵結(jié)構(gòu)。HMBC譜中Me-23和Me-24與C-3的相關(guān)性以及它們的碳 化學(xué)位移進(jìn)一步確證C-3位形成酮基。另HMBC譜中，H-9和H-18與C-12，H-18和Me-27與C-13， 12-OH與C-12相關(guān)信號(hào)以及它們的碳化學(xué)位移表明該化合物存在烯醇式結(jié)構(gòu)，羥基連接在 C-12位與C-12和C-13形成的雙鍵構(gòu)成烯醇式結(jié)構(gòu)。HMBC譜中12-OH和H-9與C-11的相關(guān)信號(hào) 以及碳化學(xué)位移確認(rèn)C-11位形成羰基。此外，HMBC譜中H-18、H-19、Me-29和Me-30與C-20的 相關(guān)信號(hào)以及C-20碳化學(xué)位移表明C-20位連有一個(gè)羥基。NOESY譜中Me-28和Me-29與H-18 存在相關(guān)信號(hào)，但Me-30與H-18沒有相關(guān)信號(hào)，表明C-20位的羥基為β構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、 HMBC譜和NOESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體 構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如 下：
[0024] 實(shí)施例2:藥理作用
[0025]本實(shí)施例使用腹腔注射鏈脲佐菌素，并以直徑0.20mm的絲線結(jié)扎大鼠雙側(cè)上頌第 二磨牙頸部制備治療糖尿病合并牙周炎大鼠模型，觀察藥物降低牙齒松動(dòng)度，提高大鼠外 周血白細(xì)胞介素 -2(IL-2)含量、降低白細(xì)胞介素 -Ιβ(Ι?-Ιβ)等方面的抗糖尿病合并牙周炎 作用。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動(dòng)物
[0028] 選用10月齡SD大鼠，體重(400±50)g，雌雄各半，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研 究所提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施條件:成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院動(dòng)物觀察室。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 異卡波肼購自中國(guó)藥品生物制品檢定所?；衔?I)自制，制備方法見實(shí)施例1。
[0031] 1.3大鼠分組及模型制備
[0032] 大鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、異卡波肼組 (180mg · kg-"、化合物⑴組（180mg · kg-Ο、異卡波肼與化合物（I)組合物組【90mg · kg-1異 卡波肼+90mg · kg-1化合物（I)】。各組大鼠均以軟食飼養(yǎng)，按60mg/kg腹腔注射鏈脲佐菌素溶 液，72h后測(cè)空腹血糖，高于16.7mmol/L為糖尿病模型建立成功。糖尿病模型建立成功1周 后，開始建立糖尿病合并牙周炎模型，除正常對(duì)照組外，其余組大鼠均用2%戊巴比妥鈉 30mg/kg全麻下，以直徑0.20mm的絲線結(jié)扎大鼠雙側(cè)上頌第二磨牙頸部，制造牙周炎動(dòng)物模 型。正常對(duì)照組不造模，各給藥組造模后開始藥物干預(yù)，按照上述劑量連續(xù)灌胃給藥7d，正 常對(duì)照組與模型對(duì)照組大鼠灌胃給予純化水。給藥結(jié)束后，測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。
[0033] 1.4牙齒松動(dòng)度測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0034] 每只大鼠造模各2顆牙齒，頰舌向松動(dòng)者計(jì)1分，頰舌向、近中遠(yuǎn)中向均松動(dòng)者計(jì)2 分;頰舌向、近中遠(yuǎn)中向和垂直向均松動(dòng)者計(jì)3分。
[0035] 1.5IL-2、IL_10 測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0036] 5%水合氯醛全麻各大鼠，將全部大鼠經(jīng)腹主動(dòng)脈取血5ml(加肝素鈉抗凝）， 1000r/min離心10min，吸取上清液0.5ml，裝管標(biāo)記后，用IL-2、IL-Ιβ試劑盒測(cè)定其濃度。 [0037] 1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0038]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0039] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0040] 2.1對(duì)糖尿病合并牙周炎模型大鼠牙齒松動(dòng)度的影響
[0041]與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠牙齒松動(dòng)度評(píng)分明顯增加(P<0.01);與模型 對(duì)照組比較，異卡波肼與化合物（I)組合物組大鼠牙齒松動(dòng)度評(píng)分明顯減小(P<〇.01);與 模型對(duì)照組比較，異卡波肼組、化合物（I)組牙齒松動(dòng)度評(píng)分減小(P<〇.05)。結(jié)果見表1。 [0042] 2.2對(duì)糖尿病合并牙周炎模型大鼠外周血中11^-2、幾-10含量的影響 [0043] 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠的IL-2明顯降低(P<0.01)，、IL_li3含量明顯 升高（P<0.01)。與模型對(duì)照組比較，異卡波肼與化合物（I)組合物組IL-2明顯升高（P< 0.01)，IL-li3含量明顯降低(P<0.01);與模型對(duì)照組比較，異卡波肼組、化合物（I)組IL-2 升高(P<0.05)，IL-lf3含量降低(P<0.05)。結(jié)果見表1。
[0044]表1對(duì)糖尿病合并牙周炎模型大鼠牙齒松動(dòng)度和外周血中IL-2、IL_li3含量的影響
[0047]早在1928年，William等通過研究認(rèn)為，糖尿病患者與非糖尿病患者的牙周炎具有 不同特征，因此提出了 "糖尿病性牙周炎"的概念。糖尿病患者因牙周組織中糖分解代謝、蛋 白質(zhì)和脂肪合成代謝減弱，對(duì)局部致病因子敏感性增高，且多合并微循環(huán)障礙，導(dǎo)致牙周組 織細(xì)菌繁殖加速，牙周炎已經(jīng)成為糖尿病繼神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變、血管病變、腎病及傷口 愈合不良之后的第六并發(fā)癥。
[0048]近年來，眾多研究顯示牙周炎的發(fā)病過程與細(xì)胞因子的分泌異常導(dǎo)致促炎/抑炎 平衡失調(diào)有密切關(guān)系，多表現(xiàn)為Thl細(xì)胞功能相對(duì)亢進(jìn)，Th2細(xì)胞功能不足。IL-2、IL-Ιβ等是 細(xì)胞免疫應(yīng)答中的關(guān)鍵因子，IL-2是引起T細(xì)胞增殖的主要細(xì)胞因子，能促進(jìn)T細(xì)胞的增殖 和活化，抑制T細(xì)胞的凋亡、刺激NK細(xì)胞的生長(zhǎng)和增強(qiáng)其殺傷功能、激發(fā)B細(xì)胞生長(zhǎng)及抗體產(chǎn) 生，已經(jīng)有部分學(xué)者通過實(shí)驗(yàn)證明其與牙周炎免疫狀態(tài)有關(guān);IL-Ιβ則在牙周炎的骨破壞過 程中還發(fā)揮著重要作用，IL-Ιβ可促進(jìn)骨吸收，且其水平與牙周附著喪失顯著相關(guān)。
[0049] 上述結(jié)果表明，異卡波肼、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)糖尿病合并牙周炎具有治療 作用；異卡波肼和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)糖尿病合并牙周炎的治療效果進(jìn)一步提高，可 以開發(fā)成治療糖尿病合并牙周炎的藥物。
[0050] 上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物α)，2. -種異卡波肼的藥物組合物，其特征在于:包括異卡波肼、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的異卡波肼的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體 或潤(rùn)滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的異卡波肼的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將罌 粟殼粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗 脫12個(gè)柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療糖尿病合并牙周炎的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的異卡波肼的藥物組合物在制備治療糖尿病合并牙周炎的 藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P1/02GK105949270SQ201610384227
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月28日
【發(fā)明人】劉慎權(quán)
【申請(qǐng)人】劉慎權(quán)