一種促雙歧桿菌增殖的鮮銀耳多糖提取方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種促雙歧桿菌增殖的鮮銀耳多糖提取方法，研究了鮮銀耳多糖浸提的最佳工藝條件。本發(fā)明屬于功能性食品技術(shù)領(lǐng)域，具體是銀耳多糖的應(yīng)用。本發(fā)明所采用的鮮銀耳不僅來源豐富，生產(chǎn)成本低，同時也是高纖維食物，銀耳多糖具有明顯促進益生菌生長的效果，可應(yīng)用于功能性食品添加劑和營養(yǎng)保健品。
【專利說明】
一種促雙歧桿菌増殖的鮮銀耳多糖提取方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及功能性食品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種促雙歧桿菌增殖的鮮銀耳多糖提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]多糖是長鏈單糖通過糖苷鍵相連組成的高分子碳水化合物分子，其水解生成單糖或寡糖，從不同植物中分離出的多糖已確定為可以促進或活化某個或某些寄居腸道的細(xì)菌益生元，從而有利于宿主的身體健康。例如，據(jù)報道，海藻多糖有改善腸道細(xì)菌紊亂和炎癥的功能，同時使免疫系統(tǒng)和新陳代謝狀態(tài)正?；?。中國臺灣金線蓮中提取的多糖有降低盲腸PH值和增加鈣吸收水平和排泄物中雙歧桿菌含量的益生元作用。除此之外，蘑菇類因其含有豐富的多糖，如甲殼素、纖維素、α-和β_葡聚糖、甘露聚糖、木聚糖、半乳糖等，也被視作益生元的主要來源。
[0003]作為中國最受歡迎的食用和醫(yī)用真菌，銀耳使用商業(yè)栽培的養(yǎng)殖方法。天然銀耳的子實體呈水白色的凝膠葉片狀，直徑可達7.5 cm，而人工養(yǎng)殖的品種會更大。銀耳由薄而豎起的，海藻狀的分層的葉片組成，通常葉片的邊緣是卷曲的。傳統(tǒng)上，銀耳通常用作營養(yǎng)食品，同時也是一味傳統(tǒng)中藥。
[0004]先前研究分析表明，新鮮銀耳含有6.7-10 %蛋白質(zhì)、65-71.2 %碳水化合物、0.6-12.8 %脂肪、2.4-2.75 %粗纖維、4.0-5.4 %無機鹽、15.2_18.76 %水和少量B族維生素。由于含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，銀耳也有一系列的生物活性。作為一種富含天然植物膠的真菌，銀耳有皮膚保濕、抑制皺紋形成和促進傷口愈合的功效。銀耳也是高纖維食物，可以促進胃腸蠕動，降低脂肪吸收率。此外，文獻也表明，多糖是銀耳的主要生物活性成分，可以抗氧化、抗腫瘤、抗糖尿病、抗炎癥和免疫調(diào)節(jié)。然而，由于目前貯藏技術(shù)的限制，銀耳通常以干制品形式存在。在干燥的過程中，大量的水溶性維生素、銀耳膠質(zhì)、碳水化合物和其他銀耳中的營養(yǎng)物質(zhì)都會流失，大大降低了銀耳的營養(yǎng)價值。
[0005]因此，本發(fā)明旨在從新鮮銀耳中提取有效促進青春雙歧桿菌增殖的多糖。通過單因素法找出最優(yōu)提取條件，并衡量其促進青春雙歧桿菌生長的能力，評估銀耳多糖作為促進腸道健康的飲食的潛力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種促雙歧桿菌增殖的鮮銀耳多糖提取方法，本發(fā)明所采用的鮮銀耳不僅來源豐富，生產(chǎn)成本低，同時也是多糖含量極高的食物，具有明顯的促益生菌生長作用。
[0007]本發(fā)明提供一種促雙歧桿菌增殖的鮮銀耳多糖的提取方法，其使用蒸餾水為提取劑，分別以不同的料液比、提取溫度和提取時間，判斷鮮銀耳多糖提取率。
[0008]所述方法具體為:新鮮銀耳和蒸餾水的料液比采用1:10-1:40g/mL;浸提溫度采用50- 80 °C;浸提時間米用1-4 h，進行反應(yīng)并記錄多糖提取率。
[0009]其中，最佳反應(yīng)條件參數(shù)為:料液比為30mL/g，浸提溫度為80 °C，浸提時間為3h0
[0010]本發(fā)明的有益效果:
此采用本【具體實施方式】提供的技術(shù)方案，具有如下的技術(shù)效果:
鮮銀耳多糖提取率為5 %，該提取物多糖和蛋白含量分別為0.38±0.02 g/g和41.70±0.17 mg/g，證實該提取物主要成分為多糖。而所得鮮銀耳多糖提取物具有顯著的促益生菌(青春雙歧桿菌)生長的作用。
【附圖說明】
[0011 ]圖1料液比對鮮銀耳多糖提取率的影響。
[0012]圖2提取溫度對鮮銀耳多糖提取率的影響。
[0013]圖3提取時間對鮮銀耳多糖提取率的影響。
[0014]圖4不同濃度銀耳多糖對雙歧桿菌增殖效應(yīng)的影響。
【具體實施方式】
[0015]本發(fā)明提供一種促雙歧桿菌增殖的鮮銀耳多糖的提取方法，其使用蒸餾水為提取劑，分別以不同的料液比、提取溫度和提取時間，判斷鮮銀耳多糖提取率。
[0016]所述鮮銀耳多糖的提取方法進一步包括:
第一步:將新鮮采收的銀耳用剪刀剪碎，并與蒸餾水混合；
第二步:將混合后的樣品置于不同提取溫度和提取時間下進行均質(zhì)提?。?br> 第三步:將提取后的樣品進行離心和過濾，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行濃縮；
第四步:將濃縮后的樣品，采用乙醇溶液進行沉降，之后再次離心；
第五步:離心之后棄上清液，取沉淀為多糖提取液，之后冷凍干燥得到新鮮銀耳多糖提取物(TOS)，并計算得率。
[0017]第六步:通過苯酚-硫酸法和考馬斯亮藍(lán)法檢測鮮銀耳提取物的多糖和蛋白含量；所述第一步中鮮銀耳的重量為5 g，料液比為1:10，1:20, 1:30和1:40 g/mL。
[0018]所述第二步中提取溫度為50，60，70和80 °C，提取時間為I，2，3和4 h。
[0019]所述第三步中過濾使用新華中速濾紙。
[0020]所述第四步中乙醇濃度為95 %，離心參數(shù)為3100 g，20 min。
[0021]所述第五步中TOS得率計算公式為;T0S(W/W)=干燥后的多糖提取物重量/新鮮銀耳的重量X 100 %。
[0022]所述第五步中多糖和蛋白含量計算公式為;T0S(w/w)=多糖或蛋白重量/提取物的重量X 100 %。
[0023]最佳反應(yīng)條件參數(shù)為:料液比為30mL/g，浸提溫度為80 °C，浸提時間為3 h，鮮銀耳多糖提取率為5 %，該提取物多糖和蛋白含量分別為0.38±0.02 g/g and 41.70±0.17mg/g，證實該提取物主要成分為多糖。
[0024]銀耳(tremella)是含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性的真菌，不僅來源豐富，生產(chǎn)成本低，同時也是高纖維食物，具有促進胃腸蠕動，減少脂肪吸收的功能，具有明顯的促益生菌生長作用。從銀耳中提取的多糖有抗氧化、抗腫瘤、抗糖尿病、抗炎癥和免疫調(diào)節(jié)的作用。
[0025]本發(fā)明旨在發(fā)明一種促雙歧桿菌增殖的鮮銀耳多糖的提取方法，通過單因素法找出最優(yōu)提取條件。并衡量其促進青春雙歧桿菌生長的能力，評估銀耳多糖作為促進健康的飲食的潛力。
[0026]本發(fā)明經(jīng)過大量的試驗，發(fā)現(xiàn)在料液比為15mL/g、提取溫度為80 °C，提取時間為3 h，可以得到多糖提取率為5 %，而在其他條件下則很難達到如此良好的提取效果。
[0027]以下采用實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明的實施方式，借此對本發(fā)明如何應(yīng)用技術(shù)手段來解決技術(shù)問題，達成技術(shù)效果的實現(xiàn)過程進行充分解釋，并據(jù)以實施。
[0028]實施例1:料液比實驗
將新鮮的銀耳5 g與蒸餾水混合，料液比為1:10，1:20, 1:30和1:40 g/mL，固定溫度為80 °C和提取時間為I h，然后進行離心、過濾、旋蒸、95 %乙醇沉降、再離心，去上清液凍干后稱重測量TOS的得率，即考察不同料液比對TOS提取率的影響。
[0029]如圖1所示，不同料液比對TOS提取有一定影響。在料液比較低時，TOS提取率隨料液比增大而提高，當(dāng)料液比為30:1 mL/g時，TOS提取量達到最大值。料液比超過30:1 mL/g后，TOS提取量急劇下降。
[0030]實施例2:提取溫度試驗
將新鮮的銀耳5 g與蒸餾水混合，料液比為30:1 mL/g，提取溫度為50，60，70和80 °C和提取時間為I h，然后進行離心、過濾、旋蒸、95%乙醇沉降、再離心，去上清液凍干后稱重測量TOS的得率，即考察不同提取溫度對TOS提取率的影響。
[0031]如圖2所示，不同浸提溫度對TOS提取有一定影響。當(dāng)所選定的提取溫度范圍內(nèi)，TOS提取率隨著溫度的升高而升高。
[0032]實施例3:提取時間試驗
將新鮮的銀耳5 g與蒸餾水混合，料液比為30:1 mL/g，提取溫度為80 °C和提取時間為1，2，3和4 h，然后進行離心、過濾、旋蒸、95 %乙醇沉降、再離心，去上清液凍干后稱重測量TOS的得率，即考察不同提取時間對TOS提取率的影響。
[0033]如圖3所示，浸提時間在3h內(nèi)，TOS提取率隨著浸提時間的延長而升高。當(dāng)浸提時間超過3 h，T0S提取率稍有下降。
[0034]實施例4:不同濃度的新鮮銀耳多糖對雙歧桿菌增殖的影響
所有發(fā)酵實驗都在發(fā)酵培養(yǎng)基(pH 6.8±0.2)中進行，其中發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:10g/L牛肉膏、3 g/L酵母粉、I g/L可溶性淀粉、3 g/L NaAc,0.02 g/L多粘菌素B、5 g/L的碳水化合物、5 g/L蛋白胨、5 g/L氯化鈉、0.5 g/L半胱氨酸鹽。其中碳水化合物為葡萄糖，F(xiàn)OS或新鮮銀耳多糖提取物(TOS)。
[0035]細(xì)菌原液接種到以葡萄糖、FOS或TOS作為碳源的發(fā)酵培養(yǎng)基上，在不同濃度碳源(0.5，1.0，2.0，4.0，8.0和16.0 g/L)下，37 °(:厭氧培養(yǎng)48 h。通過測量青春雙歧桿菌在600nm的吸光度(OD)，來判斷TOS對雙歧桿菌的促增長率。試驗重復(fù)3次，取平均值。
[0036]由圖4可看出，當(dāng)濃度為0.5-16 g/L時，隨著碳源濃度的增加，各培養(yǎng)基中雙歧桿菌0D(600)值不斷增長。但當(dāng)F0S、T0S添加量達到8 g/L時，菌體濃度趨于平緩，表明菌體幾乎不再生長。結(jié)果表明，培養(yǎng)基中的碳源添加量并非越多越好，當(dāng)濃度達到8 g/L以上時，多糖對雙歧桿菌的生長具有抑制作用，這可能是由于高滲透壓有脫水作用，導(dǎo)致細(xì)胞破裂，反而抑制了菌體生長。因此作為雙歧桿菌體外培養(yǎng)的碳源時添加量要適宜，8 g/L的添加濃度即可達到很好的增殖效果。
[0037]所有上述的首要實施這一知識產(chǎn)權(quán)，并沒有設(shè)定限制其他形式的實施這種新產(chǎn)品和/或新方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員將利用這一重要信息，上述內(nèi)容修改，以實現(xiàn)類似的執(zhí)行情況。但是，所有修改或改造基于本發(fā)明新產(chǎn)品屬于保留的權(quán)利。
[0038]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種促雙歧桿菌增殖的鮮銀耳多糖提取方法，其特征在于:使用蒸餾水為提取劑，分別以不同的料液比、提取溫度和提取時間，確定鮮銀耳多糖提取率;新鮮銀耳和蒸餾水的料液比1:10-1:40 g/mL;浸提溫度50- 80 °C;浸提時間1-4 h。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促雙歧桿菌增殖的鮮銀耳多糖提取方法，其特征在于:料液比為30 mL/g，浸提溫度為80 °C，浸提時間為3 h。
【文檔編號】C08B37/00GK105949337SQ201610314827
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月13日
【發(fā)明人】林少玲, 孔令華, 朱子瑤, 王佩瑤, 鄭寶東
【申請人】福建農(nóng)林大學(xué)