国产精品1024永久观看,大尺度欧美暖暖视频在线观看,亚洲宅男精品一区在线观看,欧美日韩一区二区三区视频,2021中文字幕在线观看

  • <option id="fbvk0"></option>
    1. <rt id="fbvk0"><tr id="fbvk0"></tr></rt>
      <center id="fbvk0"><optgroup id="fbvk0"></optgroup></center>
      <center id="fbvk0"></center>

      <li id="fbvk0"><abbr id="fbvk0"><dl id="fbvk0"></dl></abbr></li>

      一種固定化菌及其制備κ?卡拉膠寡糖的方法

      文檔序號:10679846閱讀:369來源:國知局
      一種固定化菌及其制備κ?卡拉膠寡糖的方法
      【專利摘要】本發(fā)明涉及一種固定化菌及其制備κ?卡拉膠寡糖的方法,屬于固定化細胞技術(shù)領(lǐng)域。選擇人工沸石,通過靜電吸附作用,將κ?卡拉膠降解菌Thalassospira sp. Fjfst?332附著于沸石表面,制備成菌體高濃度富集的微球,將固定好的菌株無菌條件下發(fā)酵降解κ?卡拉膠,制備κ?卡拉膠低聚糖。該固定化菌制備工藝簡單,成本低,機械強度好,固定菌與發(fā)酵酶液易分離,降解κ?卡拉膠的效果好,可較好的應(yīng)用于工廠批量生產(chǎn)κ?卡拉膠低聚糖。
      【專利說明】
      一種固定化菌及其制備K-卡拉膠寡糖的方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      [0001]本發(fā)明屬于固定化細胞技術(shù)領(lǐng)域,涉及一種固定化菌及其制備κ-卡拉膠寡糖的方法。
      【背景技術(shù)】
      [0002]固定化細胞技術(shù)是指用物理或化學(xué)的手段將游離細胞定位于限定的空間區(qū)域,并使其保持催化活性、反復(fù)使用的方法。與游離細胞相比,固定化細胞穩(wěn)定性增強,具有細胞密度高,微生物流失少及產(chǎn)物分離容易等優(yōu)點,由于固定化細胞保持了細胞的生命活動能力,它不但比游離細胞的發(fā)酵更具有優(yōu)越性,而且比固定化酶有更多的優(yōu)點,因為固定化細胞省去了制備酶或含酶細胞處理過程所需要的完整酶系,并能不斷產(chǎn)生新酶及其所需的輔助因子,且固定化方法較簡單,可以連續(xù)發(fā)酵,節(jié)約了成本,而且在蒸餾和提取前不用分離去細胞,能一邊徘出發(fā)酵液,一邊進行培養(yǎng),排除了產(chǎn)物抑制和消耗。
      [0003]沸石是一種以硅鋁氧四面體為基本結(jié)構(gòu)單元,具有開曠硅氧格架的分子篩。硅氧四面體通過處于四面體頂點的氧原子相互連接,形成首尾銜接、中空環(huán)狀結(jié)構(gòu)的硅鋁氧四面體群,成為沸石的骨架。這種空曠的硅鋁氧骨架結(jié)構(gòu),,具有許多排列整齊的晶穴、晶孔和孔道,使得沸石具有較強的陽離子交換性能和吸附性能。
      [0004]沸石具有較大的比表面積,其表面還具有很大的色散力和靜電力,故其具有較強的吸附力類似于一般多孔性材料。沸石的孔穴和孔道大小均勾,直徑在0.3?Inm之間,也就是說,小于這個直徑的物質(zhì)能被吸附,而大于這個直徑的物質(zhì)則被排除在外不被吸附,這種現(xiàn)象被稱為“分子篩”作用,所以說沸石具有選擇吸附的特性。
      [0005]目前報道中,沸石多用于吸附處理氨氮廢水,將沸石吸附與生物法相結(jié)合,去除富營養(yǎng)水體中的氨氮,是目前研究的熱點。沸石在吸附氨氮的同時,可作為微生物生長的載體,氨氮一部分被沸石吸附,然后被硝化、反硝化等脫氮菌進一步轉(zhuǎn)化另一部分被微生物作為氮源合成新細胞。在此過程中,沸石不僅為生物硝化和反硝化作用提供了營養(yǎng)源,同時還為微生物的生長提供了附著表面,經(jīng)過一定時間后,沸石表面會形成生物膜。
      [0006]目前卡拉膠低聚糖制備方法主要有:物理降解法、化學(xué)降解法及酶解法。其中,化學(xué)法是制備卡拉膠低聚糖主要方法,但化學(xué)降解方法存在反應(yīng)條件不易控制、降解產(chǎn)率低、目的產(chǎn)物不易分離等瓶頸問題,制約了其在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。而酶解法能彌補化學(xué)降解法的不足,不但對生產(chǎn)工藝要求簡單,反應(yīng)條件溫和、產(chǎn)物活性高,而且產(chǎn)物專一,從而成為制備卡拉膠低聚糖的熱點。κ-卡拉膠酶能水解κ-卡拉膠的β-1,4糖苷鍵產(chǎn)生低聚糖,可用于紅藻細胞壁結(jié)構(gòu)的分析和原生質(zhì)體的制備。而海洋微生物產(chǎn)酶量低、酶活性普遍不高,成為了酶解法制備卡拉膠低聚糖的技術(shù)瓶頸。
      [0007]已有報道中,尚未見到采用固定化細胞技術(shù)發(fā)酵制備卡拉膠低聚糖,也未見采用沸石做載體固定化細胞或酶生產(chǎn)制備K-卡拉膠低聚糖。其中,集美大學(xué)肖安風(fēng)以公開了一種固定化κ -卡拉膠酶及其制備κ -卡拉膠寡糖的方法。但由于酶固定化技術(shù)中存在的問題如:酶活力的損失、酶純化等,本發(fā)明以實驗組自主篩選的K-卡拉膠降解菌為材料,制備固定化菌株降解K-卡拉膠,進一步應(yīng)用于K-卡拉膠低聚糖的制備工藝中。為實現(xiàn)工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)K-卡拉膠寡糖提供理論依據(jù)。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0008]本發(fā)明的目的提供一種固定化菌株及其制備K-卡拉膠低聚糖的方法,通過固定菌微球的制備,固定化菌株的最佳發(fā)酵條件及重復(fù)使用率的研究,為固定化菌生產(chǎn)K-卡拉膠低聚糖提供理論依據(jù)。
      [0009]本發(fā)明的技術(shù)方案:
      一種固定化菌及其制備κ-卡拉膠寡糖的方法,固定化菌株制備步驟如下:配置發(fā)酵培養(yǎng)基,加入0.3?Ig沸石(40?60目)于30ml培養(yǎng)基中,滅菌后接種細胞濕重0.5?1.5g菌泥,在250C,13(^/11^11的恒溫搖床培養(yǎng)16~24 h。將固定化細胞與培養(yǎng)基分離,用0.9的%生理鹽水清洗固定化細胞,洗去殘留液,4 °C保存固定化細胞。
      [0010]菌株sp.Fjfst-332,為實驗室自主篩選獲得,保藏號為CCTCC M2013706,經(jīng)檢測可有效酶解κ-卡拉膠獲得κ-卡拉膠低聚糖的野生菌。
      [0011 ] 菌泥為菌株TiaJassosjDira sp.Fjfst-332經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)后,采用0.9wt%生理鹽水清洗2?3次,10000r/min離心20min獲得。
      [0012]固定化海旋菌TiaJassosjDirasp.Fjfst-332制備κ-卡拉膠寡糖的方法,制備包括如下步驟:
      1)取固定化菌株無菌狀態(tài)下加入30mL發(fā)酵培養(yǎng)基中,25°C,130r/min恒溫搖床中發(fā)酵培養(yǎng)24 h后,分離載體與發(fā)酵液,發(fā)酵液8000r/min離心20min取上清酶液;
      2)上清酶液經(jīng)1kDa超濾膜濃縮后,按1:20(v/v)的比例加入到0.5wt% κ-卡拉膠水溶液中,酶解24 h;
      3)酶解液加熱5min停止反應(yīng),10000r/min離心30min去除未降解的κ-卡拉膠片段,取上清液分別過1kDa及3kDa超濾膜,收集分子量小于3kDa的酶解液,經(jīng)旋蒸后真空冷凍干燥,得到不同聚合度的κ-卡拉膠低聚糖。
      [0013]發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:氯化鈉15g/L,低聚果糖I g/L,K-卡拉膠3 g/L,酵母膏Ig/L,NaNO3 2 g/L,MgSO4.7H20 0.5g/L,K2HPO4 I g/L,CaCl2 0.1 g/L,余量為去離子水,pH7.5±0.1ο
      [0014]本發(fā)明的效益在于:該菌株固定化制備工藝簡單、成本低并可大量生產(chǎn),固定化菌酶解κ-卡拉膠效果好,效率高,且重復(fù)使用率高,產(chǎn)物易分離,對于實現(xiàn)卡拉膠低聚糖產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)有重要的應(yīng)用價值。以一定配比的固定菌與κ-卡拉膠發(fā)酵液混合生產(chǎn)κ-卡拉膠低聚糖,酶解時間與游離菌株發(fā)酵相比,縮短了 4倍。
      【附圖說明】
      [0015]圖1沸石固定菌原理圖。
      [0016]圖2沸石電鏡掃描圖。
      [0017]圖3沸石固定化菌株的電鏡掃描圖。
      [0018]圖4傅里葉紅外光譜圖分析。
      [0019]圖5沸石固定化菌株發(fā)酵生產(chǎn)K-卡拉膠低聚糖的穩(wěn)定性。
      [0020]圖6沸石固定化菌株發(fā)酵生產(chǎn)κ-卡拉膠酶的產(chǎn)酶曲線。
      [0021]圖7固定化菌株制備κ-卡拉膠低聚糖的TLC圖。
      【具體實施方式】
      [0022]以下是說明本發(fā)明的具體實施例,但本發(fā)明并不限于此:
      實施例1
      固定化海旋菌TiaJassosjDira sp.Fjfst-332制備κ-卡拉膠寡糖的方法:
      固定化菌株制備步驟如下:配置發(fā)酵培養(yǎng)基,加入0.3g沸石40目于30ml培養(yǎng)基中,滅菌后接種細胞濕重Ig菌泥,在25°C,130r/min的恒溫搖床培養(yǎng)16 h。將固定化細胞與培養(yǎng)基分離,用0.9wt%生理鹽水清洗固定化細胞,洗去殘留液,4 °C保存固定化細胞。
      [0023]所述菌株Tia^assosjoira sp.Fjfst-332,為實驗室自主篩選獲得,經(jīng)檢測可有效酶解κ-卡拉膠獲得κ-卡拉膠低聚糖的野生菌。
      [0024]所述菌懸液為菌株77?a2ass0sj0irasp.F jf st-332經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)后,采用0.9wt%生理鹽水清洗3次,10000r/min離心20min獲得。
      [0025]固定化海旋菌TiaJassosjDirasp.Fjfst_332制備κ-卡拉膠寡糖的方法,制備包括如下步驟:
      1)取固定化菌株無菌狀態(tài)下加入30mL發(fā)酵培養(yǎng)基中,25°C,130r/min恒溫搖床中發(fā)酵培養(yǎng)24 h后,分離載體與發(fā)酵液,發(fā)酵液8000r/min離心20min取上清酶液;
      2)上清酶液經(jīng)1kDa超濾膜濃縮后,按1:20(v/v)的比例加入到0.5wt% κ-卡拉膠水溶液中,酶解24 h;
      3)酶解液加熱5min停止反應(yīng),10000r/min離心30min去除未降解的κ-卡拉膠片段,取上清液分別過1kDa及3kDa超濾膜,收集分子量小于3kDa的酶解液,經(jīng)旋蒸后真空冷凍干燥,得到不同聚合度的κ-卡拉膠低聚糖。
      [0026]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:氯化鈉15g/L,低聚果糖I g/L,K-卡拉膠3 g/L,酵母膏I g/L,NaNO3 2 g/L,MgSO4-7H20 0.5g/L,K2HPO4 I g/L,CaCl2 0.1 g/L,余量為去離子水,pH 7.5±0.1。
      [0027]圖1為沸石固定化菌體的原理圖,沸石以硅(鋁)氧四面體為基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)單元,硅氧四面體通過處于四面體定點的氧原子相互連接,形成中空環(huán)裝結(jié)構(gòu)的硅(鋁)氧四面體群。這種空曠的骨架結(jié)構(gòu),具有許多排列整齊的晶穴、晶孔和孔道,使得沸石具有較強的陽離子交換性能和吸附性能。同時,沸石表面積較大,具有很大的靜電力,因此,該固定菌以沸石為載體,通過靜電作用力及吸附性能,把菌體牢牢吸附于沸石表面,形成堅固的沸石固定菌微球。
      [0028]將沸石和本實施例的沸石固定化菌株做電鏡掃描圖,結(jié)果如圖2和圖3所示。由圖2可知,未吸附菌體前的沸石顆粒,粒徑分布較大,表面光滑,形狀規(guī)則。圖3顯示,吸附菌體的沸石表面呈現(xiàn)凹坑孔道,此大孔載體的孔道內(nèi)布滿了微生物,表明菌體吸附后生長分散于此,菌體多為短桿狀及球狀菌。
      [0029]圖4為本實施例的沸石和沸石固定化菌株的傅里葉紅外光譜圖分析。由圖4可知,沸石的基本骨架吸收峰在(400?1200cm—結(jié)合水振動吸收帶為1600?3700 cm—S S1-O或Al-O的彎曲振動峰為400?500 cm工。由圖4分析可知,453.12 cm 1N444.95 cm 1處分別存在硅氧四面體S1-O-Si的振動峰;3436.10 cm_\3464.70 cm—1和1646.31 cm—1處分別有沸石結(jié)合水的吸收峰;而1008.85 cm—1處的強吸收峰為沸石的骨架振動。其中,固定化前后,沸石原有的1380.70 cm—\1458.34 cm—1吸收峰消失,1465-1340 cm—1為C-H彎曲振動,可能由于菌體與沸石的結(jié)合,使該振動峰消失。
      [0030]圖5為本實施例沸石固定化菌株發(fā)酵生產(chǎn)K-卡拉膠低聚糖的穩(wěn)定性圖,由圖5可知,該沸石固定菌的穩(wěn)定性及重復(fù)使用率較高,使用第5次時,降解能力仍然保留65%。圖6為本實施例沸石固定化菌株發(fā)酵生產(chǎn)K-卡拉膠酶的產(chǎn)酶曲線,由圖6可知,固定菌由于菌體大量富集,形成高濃度的菌體微球,其降解底物效率較游離菌高,由原來的36 h縮短至8 h,效率提高了4倍。圖7為本實施例固定化菌株制備K-卡拉膠低聚糖的TLC圖,由圖7薄層層析圖可知,固定化前后,菌體產(chǎn)物K-卡拉膠低聚糖組分不變,說明菌體吸附于沸石上,并沒有變性,具有較好的遺傳穩(wěn)定性和功能性。
      [0031]實施例2
      固定化海旋菌TiaJassosjDira sp.Fjfst_332制備κ-卡拉膠寡糖的方法:
      固定化菌株制備步驟如下:配置發(fā)酵培養(yǎng)基,加入0.5g沸石50目于30ml培養(yǎng)基中,滅菌后接種細胞濕重Ig菌泥,在25°C,130r/min的恒溫搖床培養(yǎng)18 h。將固定化細胞與培養(yǎng)基分離,用0.9wt%生理鹽水清洗固定化細胞,洗去殘留液,4 °C保存固定化細胞。
      [0032]所述菌株Tia^assosjoira sp.Fjfst-332,為實驗室自主篩選獲得,經(jīng)檢測可有效酶解K-卡拉膠獲得K-卡拉膠低聚糖的野生菌。
      [0033]所述菌懸液為菌株77?a2ass0sj0irasp.F jf st_332經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)后,采用
      0.9wt%生理鹽水清洗2次,10000r/min離心20min獲得。
      [0034]固定化海旋菌TiaJassosjDirasp.Fjfst_332制備κ-卡拉膠寡糖的方法,制備包括如下步驟:
      1)取固定化菌株無菌狀態(tài)下加入30mL發(fā)酵培養(yǎng)基中,25°C,130r/min恒溫搖床中發(fā)酵培養(yǎng)24 h后,分離載體與發(fā)酵液,發(fā)酵液8000r/min離心20min取上清酶液;
      2)上清酶液經(jīng)1kDa超濾膜濃縮后,按1:20(v/v)的比例加入到0.5wt% κ-卡拉膠水溶液中,酶解24 h;
      3)酶解液加熱5min停止反應(yīng),10000r/min離心30min去除未降解的κ-卡拉膠片段,取上清液分別過1kDa及3kDa超濾膜,收集分子量小于3kDa的酶解液,經(jīng)旋蒸后真空冷凍干燥,得到不同聚合度的κ-卡拉膠低聚糖。
      [0035]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:氯化鈉15g/L,低聚果糖I g/L,K-卡拉膠3 g/L,酵母膏I g/L,NaNO3 2 g/L,MgSO4-7H20 0.5g/L,K2HPO4 I g/L,CaCl2 0.1 g/L,余量為去離子水,pH 7.5±0.1。
      [0036]實施例3
      固定化海旋菌Tia^assosjoira sp.Fjfst_332制備κ-卡拉膠寡糖的方法:
      固定化菌株制備步驟如下:配置發(fā)酵培養(yǎng)基,加入Ig沸石60目于30ml培養(yǎng)基中,滅菌后接種細胞濕重1.5g菌泥,在25°C,130r/min的恒溫搖床培養(yǎng)20 h。將固定化細胞與培養(yǎng)基分離,用0.9wt%生理鹽水清洗固定化細胞,洗去殘留液,4 °C保存固定化細胞。
      [0037]所述菌株Tia^assosjoira sp.Fjfst-332,為實驗室自主篩選獲得,經(jīng)檢測可有效酶解κ-卡拉膠獲得K-卡拉膠低聚糖的野生菌。
      [0038]所述菌懸液為菌株77?a2ass0sj0irasp.F jf st_332經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)后,采用0.9wt%生理鹽水清洗2次,10000r/min離心20min獲得。
      [0039]固定化海旋菌TiaJassosjDirasp.Fjfst_332制備κ-卡拉膠寡糖的方法,制備包括如下步驟:
      1)取固定化菌株無菌狀態(tài)下加入30mL發(fā)酵培養(yǎng)基中,25°C,130r/min恒溫搖床中發(fā)酵培養(yǎng)24 h后,分離載體與發(fā)酵液,發(fā)酵液8000r/min離心20min取上清酶液;
      2)上清酶液經(jīng)1kDa超濾膜濃縮后,按1:20(v/v)的比例加入到0.5wt% κ-卡拉膠水溶液中,酶解24 h;
      3)酶解液加熱5min停止反應(yīng),10000r/min離心30min去除未降解的κ-卡拉膠片段,取上清液分別過1kDa及3kDa超濾膜,收集分子量小于3kDa的酶解液,經(jīng)旋蒸后真空冷凍干燥,得到不同聚合度的κ-卡拉膠低聚糖。
      [0040]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:氯化鈉15g/L,低聚果糖I g/L,K-卡拉膠3 g/L,酵母膏I g/L,NaNO3 2 g/L,MgSO4-7H20 0.5g/L,K2HPO4 I g/L,CaCl2 0.1 g/L,余量為去離子水,pH 7.5±0.1。
      [0041 ] 實施例4
      固定化海旋菌Tia^assosjoira sp.Fjfst_332制備κ-卡拉膠寡糖的方法:
      固定化菌株制備步驟如下:配置發(fā)酵培養(yǎng)基,加入Ig沸石40目于30ml培養(yǎng)基中,滅菌后接種細胞濕重Ig菌泥,在25°C,130r/min的恒溫搖床培養(yǎng)24h。將固定化細胞與培養(yǎng)基分離,用0.9wt%生理鹽水清洗固定化細胞,洗去殘留液,4 °C保存固定化細胞。
      [0042]所述菌株Tia^assosjoira sp.Fjfst_332,為實驗室自主篩選獲得,經(jīng)檢測可有效酶解κ-卡拉膠獲得κ-卡拉膠低聚糖的野生菌。
      [0043]所述菌懸液為菌株77?a2ass0sj0irasp.F jf st_332經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)后,采用0.9wt%生理鹽水清洗3次,10000r/min離心20min獲得。
      [0044]固定化海旋菌TiaJassosjDirasp.Fjfst_332制備κ-卡拉膠寡糖的方法,制備包括如下步驟:
      1)取固定化菌株無菌狀態(tài)下加入30mL發(fā)酵培養(yǎng)基中,25°C,130r/min恒溫搖床中發(fā)酵培養(yǎng)24 h后,分離載體與發(fā)酵液,發(fā)酵液8000r/min離心20min取上清酶液;
      2)上清酶液經(jīng)1kDa超濾膜濃縮后,按1:20(v/v)的比例加入到0.5wt% κ-卡拉膠水溶液中,酶解24 h;
      3)酶解液加熱5min停止反應(yīng),10000r/min離心30min去除未降解的κ-卡拉膠片段,取上清液分別過1kDa及3kDa超濾膜,收集分子量小于3kDa的酶解液,經(jīng)旋蒸后真空冷凍干燥,得到不同聚合度的κ-卡拉膠低聚糖。
      [0045]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:氯化鈉15g/L,低聚果糖I g/L,K-卡拉膠3 g/L,酵母膏I g/L,NaNO3 2 g/L,MgSO4-7H20 0.5g/L,K2HPO4 I g/L,CaCl2 0.1 g/L,余量為去離子水,pH 7.5±0.1。
      [0046]實施例中采用的檢測方法:
      κ-卡拉膠酶活力測定:取I mL酶液加入到盛有5 mL 0.2%卡拉膠底物的試管中,于32 °C恒溫水浴反應(yīng)60 min,對照組用I mL滅活酶液和5mL底物溶液混合。以反應(yīng)液中還原糖的增加量作為檢測酶活力的指標。還原糖的測定則采用DNS法(3,5_ 二硝基水楊酸)。取I mL反應(yīng)液加I mL DNS溶液,沸水浴反應(yīng)5 min后,冷卻,定容至10 mL,于540 nm下測定吸光值。以半乳糖做標準曲線,根據(jù)反應(yīng)組和對照組吸光值的差值計算還原糖的產(chǎn)生量。I個酶活力單位(U)定義為在32°C條件下,每分鐘產(chǎn)生I Hg還原糖(以半乳糖計)所需要的酶量。
      [0047]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例,凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾,皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
      【主權(quán)項】
      1.一種固定化菌株,其特征在于:固定化菌株制備步驟如下:配置發(fā)酵培養(yǎng)基,加入0.3?Ig 40?60目的沸石于30ml培養(yǎng)基中,滅菌后接種細胞濕重0.5?1.5g菌泥,在25°C,130r/min的恒溫搖床培養(yǎng)16?24 h,將固定化細胞與培養(yǎng)基分離,用0.9wt%生理鹽水清洗固定化細胞,洗去殘留液,4°C保存固定化細胞。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化菌株,其特征在于:所述的菌株rAaiassospirasp.Fjfst-332,保藏號為CCTCC M 2013706,經(jīng)檢測可有效酶解κ-卡拉膠獲得κ-卡拉膠低聚糖的野生菌。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化菌株,其特征在于:所述的菌泥為菌株TXaiassosjDirasp.Fjfst-332經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)后,采用0.9wt%生理鹽水清洗2~3次,10000r/min離心20min獲得。4.一種如權(quán)利要求1所述的固定化菌制備κ-卡拉膠寡糖的方法,其特征在于:κ-卡拉膠低聚糖的制備包括如下步驟: 1)取固定化菌株無菌狀態(tài)下加入30mL發(fā)酵培養(yǎng)基中,25°C,130r/min恒溫搖床中發(fā)酵培養(yǎng)24 h后,分離載體與發(fā)酵液,發(fā)酵液8000r/min離心20min取上清酶液; 2)上清酶液經(jīng)1kDa超濾膜濃縮后,按體積比1:20的比例加入到0.5wt% κ-卡拉膠水溶液中,酶解24 h; 3)酶解液加熱5min停止反應(yīng),10000r/min離心30min去除未降解的κ-卡拉膠片段,取上清液分別過1kDa及3kDa超濾膜,收集分子量小于3kDa的酶解液,經(jīng)旋蒸后真空冷凍干燥,得到不同聚合度的κ-卡拉膠低聚糖。5.根據(jù)權(quán)利要求1和4所述的一種固定化菌及其制備κ-卡拉膠寡糖的方法,其特征在于:發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:氯化鈉15 g/L,低聚果糖I g/L,ic-卡拉膠3 g/L,酵母膏I g/L,NaNO3 2 g/L,MgSO4.7Η20 0.5g/L,K2HPO4 I g/L,CaCl2 0.1 g/L,余量為去離子水,pH =7.5±0.1 ο6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種固定化菌制備κ-卡拉膠寡糖的方法,其特征在于:所述不同聚合度的κ-卡拉膠低聚糖分別為二糖、四糖、六糖、八糖。
      【文檔編號】C12N11/14GK106047855SQ201610692642
      【公開日】2016年10月26日
      【申請日】2016年8月22日
      【發(fā)明人】郭娟娟, 鄭寶東, 黃志偉, 張怡, 張龍濤, 盧旭
      【申請人】福建農(nóng)林大學(xué)
      網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
      • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
      1