一種基于Ion Pronton測序平臺的簡易SNP試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種試劑盒，具體涉及一種基于1n Pronton測序平臺的簡易SNP試劑盒，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]單核苷酸多態(tài)性(Singlenucleotidepolymorphism，SNP)是全基因組關(guān)聯(lián)分析(Genome_wideassociat1nstudy，GWAS)、醫(yī)學(xué)檢測等研究的基礎(chǔ)。SNP是一種最理想的分子標(biāo)記，在人類疾病基因的鑒定及篩查、個性化醫(yī)療，動植物的分子設(shè)計育種等方面均有著至關(guān)重要的作用和應(yīng)用前景。目前用于二代測序技術(shù)(Next-generat1n sequencing，NGS)的文庫構(gòu)建方法主要有WGR(Whole genome resequencing)、GBS(Genotyping by sequencing)以及MSG(MyL tiplexedshotgun genotyping)、RAD_seq (Restrict1n-site-associat1nDNA sequencing)等，但這些方法均有很大的局限性。
[0003]二代測序技術(shù)平臺，主要有 Life Technologies 的 1n Proton 和 Illumina 的HiSeq，兩個測序平臺均具有測序通量高、準(zhǔn)確度高和成本低等優(yōu)點(diǎn)，研究人員指出，較之HiSeq, Proton的運(yùn)行時間“明顯縮短”，從上機(jī)測序到后期數(shù)據(jù)處理，整個過程僅需要11.5小時即可完成，而前者則需要6天。在整個高通量檢測的流程中，測序文庫的構(gòu)建至關(guān)重要，文庫質(zhì)量對最終測序結(jié)果的準(zhǔn)確性影響非常大，其中文庫構(gòu)建試劑盒中的冷凍的試劑反復(fù)凍融多次，會造成試劑活性降低甚至失效，是至關(guān)文庫質(zhì)量的一個關(guān)鍵性因素。
[0004]現(xiàn)有的1n Proton測序平臺的文庫構(gòu)建方法整個流程繁瑣耗時，且多個純化步驟要求樣品DNA的起始量非常高，另外文庫構(gòu)建過程用到的試劑繁多而導(dǎo)致其成本較高，所以探索一種操作簡單、高效、低成本、穩(wěn)定可靠的SNP檢測方法已經(jīng)成為不得不解決的問題。
【實用新型內(nèi)容】
[0005]針對上述問題，本實用新型提供了一種基于1n Pronton測序平臺的簡易SNP試劑盒，其目的在于:解決現(xiàn)有技術(shù)對SNP表達(dá)檢測通量不高，檢測成本過高而且方法繁瑣、試劑反復(fù)凍融等不足，提供一種簡單、省時、低成本、高效率、穩(wěn)定可靠的簡易的SNP檢測試劑盒。
[0006]本實用新型的技術(shù)解決方案:
[0007]—種基于1n Pronton測序平臺的簡易SNP試劑盒，包括:盒體、2個隔板和接頭盒，所述2個隔板置于盒體內(nèi)，將盒體分成三個隔間，所述接頭盒放置在中間的隔間，所述接頭盒內(nèi)裝有96個裝有不同接頭溶液的0.2ml的PCR管，所述2個海綿襯底放置于盒體兩側(cè)的隔間內(nèi)，所述海綿襯底上打有8個孔，所述孔內(nèi)放置有2個裝有溶液I的試管、2個裝有溶液II的試管、2個裝有酶I的試管、2個裝有酶I Buffer的試管、2個裝有酶II的試管、2個裝有酶II Buffer的試管、2個裝有PCRMix的試管和2個裝有擴(kuò)增引物的試管，其中:溶液I含有20mMTris-HCl和0.1mMEDTA，溶液II為無核酸水，酶I為限制性內(nèi)切酶MspI，酶I Buffer為10 XMspI反應(yīng)Buffer，酶II為一種快速連接酶，酶II Buffer為快速連接酶反應(yīng)Buffer，PCR Mix為PCR反應(yīng)預(yù)混液，含有PCR反應(yīng)Buffer和PCR反應(yīng)酶，接頭為含有barcode標(biāo)識的接頭引物對溶液，帶有barcode標(biāo)識的接頭序列，擴(kuò)展引物為擴(kuò)增文庫所用的上下游引物對溶液。
[0008]所述兩個海綿襯底為紅色或藍(lán)色。
[0009]所述2個裝有溶液I的試管，2個裝有溶液II的試管、2個裝有酶I的試管、2個裝有酶I Buffer的試管、2個裝有酶II的試管、2個裝有酶II Buffer的試管、2個裝有PCR Mix的試管、2個裝有擴(kuò)增引物的試管為紅色或藍(lán)色且?guī)в新菪w的1.5ml的離心管。
[0010]本實用新型的有益效果:
[0011]本實用新型通過在本試劑盒中設(shè)置2個隔離板，使得一個空間變?yōu)槿齻€空間，能有效防止試劑交叉等引起的污染，將除接頭外的所有試劑分成兩管存儲，可以有效減少試劑反復(fù)凍融的風(fēng)險，使得實驗更準(zhǔn)確，本試劑盒在用于SNP檢測的文庫構(gòu)建時，簡單、省時、低成本、高效率。
【附圖說明】
[0012]圖1:本實用新型結(jié)構(gòu)原理示意圖。
[0013]圖2:本實用新型接頭盒示意圖。
[0014]其中:I盒體2隔板3海綿襯底4裝有溶液I的試管5裝有溶液II的試管6裝有酶I的試管7裝有酶I Buffer的試管8裝有酶II的試管9裝有酶II Buffer的試管10裝有PCRMix的試管11裝有擴(kuò)增引物的試管12容器孔13接頭盒14 PCR管。
【具體實施方式】
[0015]下面結(jié)合附圖和實施例來對本實用新型做進(jìn)一步描述:
[0016]如圖1至2所示，一種基于1n Pronton測序平臺的簡易SNP試劑盒，包括:盒體1、2個隔板2和接頭盒13，2個隔板2置于盒體I內(nèi)，將盒體I分成三個隔間，所述接頭盒13放置在中間的隔間，所述接頭盒13內(nèi)裝有96個裝有不同接頭溶液的0.2ml的PCR管14，所述2個海綿襯底3放置于盒體I兩側(cè)的隔間內(nèi)，所述海綿襯底3上打有8個容器孔12，所述容器孔12內(nèi)放置有2個裝有溶液I的試管4、2個裝有溶液II的試管5、2個裝有酶I的試管6、2個裝有酶I Buffer的試管7、2個裝有酶II的試管8、2個裝有酶II Buffer的試管
9、2個裝有PCRMix的試管10和2個裝有擴(kuò)增引物的試管11，具體試管的放置位置為，2個海綿襯底體3最上面一排的兩個容器孔12內(nèi)，分別放置I個裝有溶液I的試管4、I個裝有溶液II的試管5 ;海綿襯底體3的第二排的兩個容器孔12內(nèi)，分別放置I個裝有酶I的試管6、I個裝有酶I Buffer的試管7 ;海綿襯底體3第三排的兩個容器孔12內(nèi)，分別放置I個裝有酶II的試管8、I個裝有酶II Buffer的試管9 ;海綿襯底體3上最下面一排兩個容器孔12內(nèi)，分別放置I個裝有PCRMix的試管10和I個裝有擴(kuò)展引物的試管11。
[0017]其中:溶液I含有20mMTris-HCl和0.1mMEDTA,溶液II為無核酸水，酶I為限制性內(nèi)切酶MspI，酉每I Buffer為lOXMspI反應(yīng)Buffer，酶II為一種快速連接酶，酶II Buffer為快速連接酶反應(yīng)Buffer，PCR Mix為PCR反應(yīng)預(yù)混液，含有PCR反應(yīng)Buffer和PCR反應(yīng)酶，接頭為含有barcode標(biāo)識的接頭引物對溶液，帶有barcode標(biāo)識的接頭序列，擴(kuò)展引物為擴(kuò)增文庫所用的上下游引物對溶液。
[0018]綜上，本實用新型達(dá)到預(yù)期目的。
【主權(quán)項】
1.一種基于1n Pronton測序平臺的簡易SNP試劑盒，其特征在于:包括盒體、2個隔板和接頭盒，所述2個隔板置于盒體內(nèi)，將盒體分成三個隔間，所述接頭盒放置在中間的隔間，所述接頭盒內(nèi)裝有96個裝有不同接頭溶液的0.2ml的PCR管，所述2個海綿襯底放置于盒體兩側(cè)的隔間內(nèi)，所述海綿襯底上打有8個孔，所述孔內(nèi)放置有2個裝有溶液I的試管、2個裝有溶液II的試管、2個裝有酶I的試管、2個裝有酶I Buffer的試管、2個裝有酶II的試管、2個裝有酶II Buffer的試管、2個裝有PCRMix的試管和2個裝有擴(kuò)增引物的試管，其中:溶液I含有20mMTris-HCl和0.1mMEDTA，溶液II為無核酸水，酶I為限制性內(nèi)切酶MsplH I Buffer為10 XMspI反應(yīng)Buffer，酶II為一種快速連接酶，酶II Buffer為快速連接酶反應(yīng)Buffer，PCR Mix為PCR反應(yīng)預(yù)混液，含有PCR反應(yīng)Buffer和PCR反應(yīng)酶，接頭為含有barcode標(biāo)識的接頭引物對溶液，帶有barcode標(biāo)識的接頭序列，擴(kuò)展引物為擴(kuò)增文庫所用的上下游引物對溶液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于1nPronton測序平臺的簡易SNP試劑盒，其特征在于:所述2個海綿襯底為紅色或藍(lán)色。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于1nPronton測序平臺的簡易SNP試劑盒，其特征在于:所述2個裝有溶液I的試管，2個裝有溶液II的試管、2個裝有酶I的試管、2個裝有酶I Buffer的試管、2個裝有酶II的試管、2個裝有酶II Buffer的試管、2個裝有PCR Mix的試管、2個裝有擴(kuò)增引物的試管為紅色或藍(lán)色且?guī)в新菪w的1.5ml的離心管。
【專利摘要】本實用新型公開一種基于Ion？Pronton測序平臺的簡易SNP試劑盒，包括：盒體、2個隔板和接頭盒，所述2個隔板置于盒體內(nèi)，將盒體分成三個隔間，所述接頭盒放置在中間的隔間，所述接頭盒內(nèi)裝有96個裝有不同接頭溶液的0.2ml的PCR管，所述2個海綿襯底放置于盒體兩側(cè)的隔間內(nèi)，所述海綿襯底上打有8個孔，所述孔內(nèi)放置有2個裝有溶液Ⅰ的試管、2個裝有溶液Ⅱ的試管、2個裝有酶Ⅰ的試管、2個裝有酶ⅠBuffer的試管、2個裝有酶Ⅱ的試管、2個裝有酶ⅡBuffer的試管、2個裝有PCRMix的試管和2個裝有擴(kuò)增引物的試管，本試劑盒在用于SNP檢測的文庫構(gòu)建時，簡單、省時、低成本、高效率。
【IPC分類】C12Q1/68, C12M1/00
【公開號】CN204824848
【申請?zhí)枴緾N201520498118
【發(fā)明人】趙曉芳
【申請人】江蘇蘇博生物醫(yī)學(xué)科技有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年7月10日