15、第一流道16，流道內(nèi)的空氣以及多余的引物預(yù)混合液從第一出口通孔17排出。為了確保添加入反應(yīng)腔內(nèi)的引物預(yù)混合液量相同，在添加時(shí)，需要確保引物預(yù)混合液充滿每一個(gè)第一凹槽流孔。
[0085]S2、向反應(yīng)腔組21添加引物預(yù)混合液時(shí)，平移上層載體I，使第一凹槽流孔組15與反應(yīng)腔組21相流通，此時(shí)，引物預(yù)混合液從第一凹槽流孔15流入反應(yīng)腔組21和第三凹槽流孔組25內(nèi)。
[0086]S3、將上層載體I移動(dòng)回預(yù)設(shè)位置，準(zhǔn)備添加聚合酶預(yù)混合液。
[0087]S4、從聚合酶進(jìn)樣口組12加入聚合酶，并使聚合酶充滿第二凹槽流孔組14。
[0088]從聚合酶進(jìn)樣口組12加入聚合酶預(yù)混合液，通過梳齒形通道22流入第三凹槽流孔組25中。梳齒形通道22中的空氣以及多余的聚合酶預(yù)混合液從第二出口通孔18中流出。為了確保聚合酶預(yù)混合液添加量相同，要確保第三凹槽流孔組內(nèi)充滿聚合酶混合液。所述聚合酶預(yù)混合液包括聚合酶、dNTP、Mg2+、反應(yīng)緩沖液。
[0089]S5、向反應(yīng)腔組21中添加聚合酶時(shí)，平移上層載體I，使反應(yīng)腔組21與第二凹槽流孔組14相流通，如圖5所示，聚合酶從第二凹槽流孔組14流入反應(yīng)腔組21和第三凹槽流孔組25內(nèi)。
[0090]S6、將上層載體I移動(dòng)回預(yù)設(shè)位置。
[0091]S7、從樣品進(jìn)樣口組11加入樣品，使樣品直接進(jìn)入反應(yīng)腔中。
[0092]S8、控制加熱裝置使反應(yīng)液保持在反應(yīng)溫度下。在本實(shí)施例中，一般反應(yīng)溫度在60Γ?65Γ0
[0093]進(jìn)行陰性、陽性對照實(shí)驗(yàn)時(shí)，移動(dòng)上層玻璃至圖8的位置，此時(shí)，位于梳齒形通道22一側(cè)的反應(yīng)腔組內(nèi)便不會(huì)加入聚合酶預(yù)混合液。將芯片移動(dòng)回初始位置，添加陽性DNA樣品，經(jīng)過反應(yīng)時(shí)間后，在未加入聚合酶預(yù)混合液的反應(yīng)腔中形成無聚合酶的陰性對照組，在與第三凹槽流孔組25位于同一條直線上的第二流道24中形成無DNA的陰性對照組，添加陽性DNA樣品的反應(yīng)腔即為陽性對照組。
[0094]此外，若在上層玻璃、下層玻璃上分別設(shè)置軸對稱的通孔、凹槽或流道，在步驟S3后，重新引物進(jìn)樣口組13加入引物，并平移上層載體I，使第一凹槽流孔組15與另一側(cè)的反應(yīng)腔組21相流通，引物從第一凹槽流孔15流入另一側(cè)的反應(yīng)腔組21內(nèi)。
[0095]經(jīng)過40分鐘的反應(yīng)時(shí)間之后，觀察每個(gè)反應(yīng)腔的濁度，可直接定性反應(yīng)結(jié)果。本實(shí)例中對8個(gè)不同DNA樣品進(jìn)行了等溫?cái)U(kuò)增，避免了繁瑣的溫度循環(huán)，大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，降低了試驗(yàn)操作強(qiáng)度。
[0096]上述各實(shí)施方式是實(shí)現(xiàn)本實(shí)用新型的具體實(shí)施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解，而在實(shí)際應(yīng)用中，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對其作各種改變，而不偏離本實(shí)用新型的精神和范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，包括相互貼合的上層載體(I)和下層載體(2);所述上層載體(I)與所述下層載體(2)之間能夠相對水平滑動(dòng)； 所述上層載體(I)上設(shè)有樣品進(jìn)樣口組(11)、聚合酶進(jìn)樣口組(12)、引物進(jìn)樣口組(13)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)、第一凹槽流孔組(15)、第二凹槽流孔組(14)、第一流道(16); 所述下層載體(2)上設(shè)有進(jìn)樣槽(23)、第二流道組(24)、反應(yīng)腔組(21)、梳齒形通道(22)、第三凹槽流孔組(25);所述反應(yīng)腔組(21)設(shè)于所述梳齒形通道(22)齒端之間或一側(cè)，且所述反應(yīng)腔組(21)的流入端與所述梳齒形通道(22)的齒端位于同一直線上； 所述上層載體(I)和下層載體(2)位于初始位置時(shí)，所述樣品進(jìn)樣口組(11)與所述反應(yīng)腔組(21)的位置相流通;所述聚合酶進(jìn)樣口組(12)與所述梳齒形通道(22)、第三凹槽流孔組(25)、第二出口通孔(18)相流通;所述引物進(jìn)樣口組(13)與所述進(jìn)樣槽(23)、第二流道組(24)、第一凹槽流孔組(15)、第一流道(16)、第一出口通孔(17)相流通； 向所述反應(yīng)腔組(21)添加引物時(shí)，平移所述上層載體(I)，使所述第一凹槽流孔組(15)與所述反應(yīng)腔組(21)相流通，引物從所述第一凹槽流孔(15)流入所述反應(yīng)腔組(21)內(nèi)； 向所述反應(yīng)腔組(21)添加聚合酶時(shí)，平移所述上層載體(I)，使所述反應(yīng)腔組(21)與所述第二凹槽流孔組(14)相流通，聚合酶從所述第二凹槽流孔組(14)流入所述反應(yīng)腔組(21)內(nèi)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，所述上層載體和下層載體為長方形載體。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，所述第一凹槽流孔組(15)包括若干個(gè)第一凹槽流孔，所述第二凹槽流孔組(14)包括若干個(gè)第二凹槽流孔，所述第三凹槽流孔組(25)包括若干個(gè)第三凹槽流孔;所述反應(yīng)腔組(21)包括若干個(gè)反應(yīng)腔;所述樣品進(jìn)樣口組(11)包括若干個(gè)樣品進(jìn)樣口； 所述樣品進(jìn)樣口均勻地排列在同一條直線上;所述第一凹槽流孔均勻地排列在同一條直線上，所述引物進(jìn)樣口(13)與所述第一凹槽流孔排列在同一條直線上，所述第二凹槽流孔均勻地排列在同一條直線上，所述樣品進(jìn)樣口與所述第一凹槽流孔的位置相對應(yīng)，所述第二凹槽流孔與所述樣品進(jìn)樣口交錯(cuò)排列；所述第三凹槽流孔均勻地排列在同一條直線上，所述反應(yīng)腔均勻地排列在同一條直線上;所述第二流道組(24)包括位于一條直線上的第二流道和與所述第三凹槽流孔組(25)位于同一條直線上的第二流道； 所述樣品進(jìn)樣口所在的直線、第一凹槽流孔所在的直線、第二凹槽流孔所在的直線與所述上層載體(I)的中央水平軸相平行;所述反應(yīng)腔所在的直線、第三凹槽流孔所在的直線與所述下層載體(2)的中央水平軸相平行。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，所述上層載體(I)上設(shè)有兩組所述樣品進(jìn)樣口組(U)、聚合酶進(jìn)樣口組(12)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)、第二凹槽流孔組(14);每一組樣品進(jìn)樣口組(11)、聚合酶進(jìn)樣口組(12)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)、第二凹槽流孔組(14)位于所述上層載體(I)的中央水平軸的一側(cè)； 兩組所述樣品進(jìn)樣口組(U)、聚合酶進(jìn)樣口組(12)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)、第二凹槽流孔組(14)、相對于所述上層載體(I)的中央水平軸軸對稱； 所述下層載體(2)上設(shè)有兩組所述反應(yīng)腔組(21)、梳齒形通道(22)、第三凹槽流孔組(25);每一組所述反應(yīng)腔組(21)、梳齒形通道(22)、第三凹槽流孔組(25)位于所述下層載體(2)的中央水平軸的一側(cè)； 兩組所述反應(yīng)腔組(21)、梳齒形通道(22)、第三凹槽流孔組(25)相對于所述下層載體(2)的中央水平軸軸對稱。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，所述引物進(jìn)樣口(13)與所述第一凹槽流孔排列在所述上層載體(I)的中央水平軸上，所述進(jìn)樣槽位于所述下層載體(2)的中央水平軸上。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，所述第一流道為T字形流道。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，俯視所述第一凹槽流孔、第二凹槽流孔、第三凹槽流孔時(shí)，所述第一凹槽流孔為十字形;所述第二凹槽流孔、第三凹槽流孔為長方形。8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，每一個(gè)所述第一凹槽流孔的容積相同；每一個(gè)所述第二凹槽流孔的容積相同；每一個(gè)所述反應(yīng)腔的容積相同。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，所述反應(yīng)腔、第一凹槽流孔、第二凹槽流孔之間的容積比為10:6:3。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的平板原位核酸擴(kuò)增芯片，其特征在于，所述樣品進(jìn)樣口組(11)、聚合酶進(jìn)樣口組(12)、引物進(jìn)樣口組(13)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)的直徑為Imn1
【專利摘要】本實(shí)用新型屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種平板原位核酸擴(kuò)增芯片，該芯片由相互貼合、可滑動(dòng)的上、下層載體構(gòu)成，上、下層載體為同等大小的長方形，當(dāng)下層固定時(shí)，上層載體可相對摩擦滑動(dòng)。在下層載體的上貼合面上開設(shè)各種開口向下的凹槽流道、微腔，在上層載體的下貼合面上開設(shè)各種開口向上的凹槽流孔、微腔，以及一些進(jìn)、出口通孔，通過定量加樣及不同模式的檢測，可同時(shí)對不同樣品進(jìn)行有效操作，并且降低了實(shí)驗(yàn)成本。所述芯片可應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)檢測、環(huán)境檢測、食品檢測等。
【IPC分類】C12M1/00
【公開號】CN205329004
【申請?zhí)枴緾N201521043308
【發(fā)明人】唐毓祎, 潘迎捷, 張煒佳
【申請人】上海海洋大學(xué)
【公開日】2016年6月22日
【申請日】2015年12月15日