本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,特別涉及嗜鐵素在降低土壤重金屬濃度中的應(yīng)用。
背景技術(shù):
嗜鐵素(siderophore)是一類由微生物在低鐵條件下合成的小分子量的,能特異地螯合Fe3+的一種螯合因子,合成后被分泌到微生物的細(xì)胞外或細(xì)胞表面獲取Fe3+,或者將鐵變?yōu)榭扇苄问焦┙o微生物利用。目前已發(fā)現(xiàn)500多種化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的嗜鐵素,根據(jù)螯合基團(tuán)的化學(xué)特性不同,可分為三大類:氧肟酸型(Hydroxamate)、兒茶酚型(Catechol,即鄰苯二酚)和檸檬酸型(α-hydroxycarboxylic)(也稱α-羥基羧酸型)。
嗜鐵素具有防止病蟲害、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的作用,同時(shí)也是環(huán)境修復(fù)的一種新工具。嗜鐵素作為一種鐵結(jié)合能力極強(qiáng)的物質(zhì),在鐵吸收干預(yù)方面具有巨大的應(yīng)用前景。目前,去鐵靈作為一種嗜鐵素,已被開(kāi)發(fā)作為地中海貧血病的一種輔助治療藥物。嗜鐵素的種類繁多,化學(xué)結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜,人工化學(xué)合成的難度大、步驟多、產(chǎn)率低、成本很高。通過(guò)生物工程發(fā)酵產(chǎn)生嗜鐵素的研究國(guó)內(nèi)外已經(jīng)開(kāi)始起步,Calvente等人報(bào)道了利用紅酵母發(fā)酵產(chǎn)生嗜鐵素,Sarma等也報(bào)道了通過(guò)熒光假單胞菌發(fā)酵生產(chǎn)嗜鐵素。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的是提供嗜鐵素在降低土壤重金屬濃度中的應(yīng)用。
將嗜鐵素用于降低土壤中的重金屬濃度,發(fā)現(xiàn)其對(duì)重金屬有螯合作用,特別是對(duì)銅、鉻、鋅三種重金屬的螯合效果最佳,重金屬的降低率分別達(dá)到了84.54%、95.20%、82.89%。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
1、嗜鐵素來(lái)源:
本發(fā)明從楊樹中分離一種能高產(chǎn)嗜鐵素的內(nèi)生菌株,經(jīng)分子鑒定為吡咯伯克霍爾德氏菌(B.pyrrocinia),隸屬于洋蔥伯克霍爾德氏菌群(Bcc)中的基因型IX,命名為吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007菌株,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC,編號(hào)為M209028,保藏日期為2009年2月18日。該菌株在MSA-CAS混合檢測(cè)平板上有明顯嗜鐵圈。
2、培養(yǎng)基配方:
蔗糖-天冬酰胺培養(yǎng)基(MSA)(嗜鐵素篩選培養(yǎng)基):蔗糖20g/L,天冬酰胺2g/L,K2HPO4 1g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,121℃,20min滅菌。
3、嗜鐵素發(fā)酵液制備
單菌落接種于NB培養(yǎng)基,30℃,pH 7,1/2通氣量,培養(yǎng)過(guò)夜,按照1%的接種量轉(zhuǎn)接到20mLMSA液體培養(yǎng)基中,30℃,200rpm振蕩培養(yǎng)24h,得發(fā)酵液。
4、嗜鐵素對(duì)土壤重金屬的螯合作用
將上述發(fā)酵液10000rpm離心5min,取上清,制備嗜鐵素粗提液,作為嗜鐵素制劑。根據(jù)土壤中重金屬檢測(cè)范圍,配制重金屬混合液,添加等體積嗜鐵素制劑,以去離子水為空白,靜置過(guò)夜后,測(cè)定樣品中各重金屬含量。