一種用于動(dòng)物尿液中“瘦肉精”殘留檢測(cè)前處理的雜質(zhì)吸附型凈化柱及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品安全檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種用于動(dòng)物尿液中"瘦肉精"殘留檢測(cè) 前處理的雜質(zhì)吸附型凈化柱及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] "瘦肉精"等違禁藥物是影響畜產(chǎn)品質(zhì)量安全的一類(lèi)重要危害因子。由于，大部分 違禁藥物在動(dòng)物體內(nèi)主要通過(guò)尿液排泄。因此，當(dāng)前對(duì)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)"瘦肉精"等違禁藥物的監(jiān) 測(cè)方式主要是采集養(yǎng)殖動(dòng)物的尿液并進(jìn)行相關(guān)藥物殘留檢測(cè)。目前，動(dòng)物尿液中藥物殘留 檢測(cè)的前處理技術(shù)主要有液液萃取和固相萃取兩種方式。液液萃取的方法是根據(jù)藥物目標(biāo) 物溶解度的差異，先通過(guò)有機(jī)溶劑把目標(biāo)物從尿液中提取出來(lái)，再對(duì)溶解了目標(biāo)物的有機(jī) 溶劑進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等步驟對(duì)尿液基質(zhì)進(jìn)行凈化處理。固相萃取的方法是根據(jù)藥物目標(biāo)物與 吸附劑之間的保留特性，先調(diào)節(jié)尿液pH值，使尿液通過(guò)固相萃取柱，并將目標(biāo)物保留在固 相萃取柱上，再使用洗脫溶劑將目標(biāo)物從固相萃取柱上洗脫下來(lái)，從而達(dá)到尿液中藥物目 標(biāo)物提取和凈化的目的。但是，上述兩種凈化方式都是基于選擇性提取尿液中藥物目標(biāo)物 的原理，雖然有凈化效果較好，基質(zhì)干擾較低等優(yōu)點(diǎn)，但也存在著操作步驟多、時(shí)間長(zhǎng)、費(fèi)用 高、需要專(zhuān)用配套設(shè)備和消耗大量有機(jī)溶劑等問(wèn)題。針對(duì)動(dòng)物尿液的凈化，還可以采用吸附 雜質(zhì)從而使被測(cè)目標(biāo)物保留在過(guò)濾液中的方式，這也被稱(chēng)為雜質(zhì)吸附型凈化方式。雜質(zhì)吸 附型凈化方式具有簡(jiǎn)單、快速、低廉、環(huán)保的特點(diǎn)，但難點(diǎn)在于針對(duì)樣品基質(zhì)和被測(cè)目標(biāo)物 特性選擇合適的吸附材料和配比，進(jìn)而達(dá)到有效去除雜質(zhì)，卻不吸附被測(cè)目標(biāo)物的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的之一是提供一種雜質(zhì)吸附型凈化柱。
[0004] 本發(fā)明所提供的雜質(zhì)吸附型凈化柱由柱管和從上而下依次設(shè)于所述柱管內(nèi)的上 篩板、混合型填料和下篩板構(gòu)成，其中，所述混合型填料由C18填料與N-丙基乙二胺（PSA) 按照質(zhì)量比1:1~2混合而成。
[0005] 本發(fā)明所提供的雜質(zhì)吸附型凈化柱是通過(guò)包括下述步驟的方法制備得到的：
[0006] a)將C18填料和N-丙基乙二胺（PSA)混合均勻，得到混合型填料；其中，C18填料 與N-丙基乙二胺的質(zhì)量比為1:1~2 ;
[0007] b)在柱管的出液口一端，安裝一個(gè)篩板（下篩板），然后向所述柱管內(nèi)加入所述混 合型填料，最后在所述柱管內(nèi)所述混合型填料上方安裝另一個(gè)篩板（上篩板），將所述混合 型填料壓實(shí)，即得所述雜質(zhì)吸附型凈化柱。
[0008] 上述方法步驟b)中，所述柱管的內(nèi)徑為10mm，長(zhǎng)度為50~60mm。
[0009] 所述混合型填料的填充量為300~400mg。
[0010] 所述篩板的安裝方式可為過(guò)盈配合。
[0011] 所述篩板的材質(zhì)具體可為聚乙烯。
[0012] 所述篩板的孔徑為5-10 μ m，具體可為10 μ m。
[0013] 本發(fā)明的另一目的是提供上述雜質(zhì)吸附型凈化柱的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明所提供的雜質(zhì)吸附型凈化柱的應(yīng)用是其在對(duì)用于動(dòng)物尿液"瘦肉精"殘留 檢測(cè)的尿液樣品的前處理中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種利用所述雜質(zhì)吸附型凈化柱對(duì)用于動(dòng)物尿液"瘦 肉精"殘留檢測(cè)的尿液樣品進(jìn)行前處理的方法。
[0016] 本發(fā)明所提供的對(duì)用于動(dòng)物尿液"瘦肉精"殘留檢測(cè)的尿液樣品進(jìn)行前處理的方 法，包括下述步驟：
[0017] 在所述雜質(zhì)吸附型凈化柱的出口端連接微孔濾膜，將待處理動(dòng)物尿液與高氯酸溶 液混合，離心處理，收集上清液，將所述上清液移入所述雜質(zhì)吸附型凈化柱，使所述上清液 依次通過(guò)所述雜質(zhì)吸附型凈化柱內(nèi)的上篩板、混合型填料及下篩板，經(jīng)所述微孔濾膜過(guò)濾 后流出，得到純化的尿液樣品。
[0018] 上述方法中，所述微孔濾膜的直徑為13-17mm，孔徑為0. 22 μπι。
[0019] 所述高氯酸溶液的質(zhì)量濃度為30% -40%，具體可為30%。
[0020] 所述待處理動(dòng)物尿液與所述高氯酸溶液的體積比為1:0. 02-0. 03,具體可為 1:0. 02〇
[0021] 本發(fā)明的凈化柱利用混合填料的吸附原理，對(duì)流過(guò)凈化柱的液體待測(cè)樣品中的色 素、有機(jī)酸等雜質(zhì)進(jìn)行選擇性吸附，從而使雜質(zhì)被吸附在凈化柱上，經(jīng)凈化的流出液再經(jīng)微 孔濾膜過(guò)濾后，可直接用于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行上機(jī)測(cè)定。本發(fā)明的雜質(zhì)吸附型凈化 柱及其應(yīng)用方法的優(yōu)點(diǎn)在于制作方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉、凈化快速、益于環(huán)保、適用范圍 廣等特點(diǎn)。
【附圖說(shuō)明】
[0022] 圖1為本發(fā)明雜質(zhì)吸附型凈化柱的結(jié)構(gòu)示意圖。其中，1為管柱；2為上篩板；3為 混合型填料；4為下篩板；5為出液管。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于此。
[0024] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；下述實(shí)施例中所 用的試劑、材料等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0025] 下述實(shí)施例中所采用的標(biāo)準(zhǔn)品：克倫特羅（Clenpenterol)、萊克多巴 胺（Ractopamine)、馬布特羅（Mabuterol)、克侖普羅（Clenproperol)、妥布特羅 (Tulobuterol)、氯丙那林（Clorprenaline)、溴布特羅（Brombuterol)、班布特羅 (Bambuterol)均為 Dr. Ethrenstorfer 公司產(chǎn)品，純度 >98. 5%。
[0026] 下述實(shí)施例中所采用的柱管（內(nèi)徑10mm，長(zhǎng)度50mm，貨號(hào)：ΑΖ003)、篩板（孔徑 10以111，貨號(hào)450034)、(：18(球形封端，貨號(hào)：5180100)、^丙基乙二胺（貨號(hào)：?40100)、微 孔濾膜（直徑13mm，孔徑0. 22 μ m，貨號(hào)：AS021320-PT)均購(gòu)自天津艾杰爾科技有限公司。
[0027] 實(shí)施例1、雜質(zhì)吸附型凈化柱的制備
[0028] 一、混合型填料的配制
[0029] 1、準(zhǔn)確稱(chēng)取C18填料100g ;
[0030] 2、準(zhǔn)確稱(chēng)取N-丙基乙二胺100g ;
[0031] 3、將上述稱(chēng)量好的C18和N-丙基乙二胺置于混合器中充分混合均勻，形成混合型 填料。
[0032] 二、雜質(zhì)吸附型凈化柱的制備
[0033] 1、取一內(nèi)徑為IOmm的柱管；
[0034] 2、通過(guò)過(guò)盈連接的方式置一高分子聚乙烯材質(zhì)的篩板于柱管出液口一端；
[0035] 3、向柱管中加入300mg上述混合型填料；
[0036] 4、通過(guò)過(guò)盈連接的方式置一高分子聚乙烯材質(zhì)的篩板于混合型填料上方，并將填 料壓實(shí)。
[0037] 實(shí)施例2、雜質(zhì)吸附型凈化柱在豬尿液中"瘦肉精"多殘留同步檢測(cè)中的應(yīng)用
[0038] 一、方法性能考察
[0039] 1、標(biāo)準(zhǔn)溶液制備
[0040] 標(biāo)準(zhǔn)品：克倫特羅（Clenpenterol)、萊克多巴胺（Ractopamine)、馬布特 羅（Mabuterol)、克侖普羅（Clenproperol)、妥布特羅（Tulobuterol)、氯丙那林 (Clorprenaline)、溴布特羅（Brombuterol)和班布特羅（Bambuterol);
[0041] 準(zhǔn)確稱(chēng)取上述標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容，配制成lOOOyg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液；準(zhǔn) 確移取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液〇. 5mL，混合于IOOmL容量瓶中，用甲醇定容，配制成5 μ g/mL的混合標(biāo) 準(zhǔn)工作液。
[0042] 2、樣品前處理
[0043] 取動(dòng)物尿液11^，向其中加入20^30%高氯酸溶液，渦旋震蕩111^11，300(^離心 5min，移取上清液至凈化柱內(nèi)，凈化柱出口端連接0. 22 μ m微孔濾膜，通過(guò)柱塞桿施壓使液 體通過(guò)凈化柱和微孔濾膜流出，控制流速10~15滴/min，使用進(jìn)樣瓶盛接過(guò)濾液，供高效 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。
[0044] 3、儀器方法
[0045] Waters ACQUITY UPLC BEH C18 色譜柱（1.7 μ m、2. IXlOOmm);柱溫：40°C ;樣品 室溫度4°C;進(jìn)樣體積5. 0 μ L ;流動(dòng)相A為0. 1 % (V/V)甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，梯度 洗脫條件見(jiàn)表1，流速為0. 30mL/min。
[0046] 表1流動(dòng)相梯度條件
[0047]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雜質(zhì)吸附型凈化柱，其由柱管和從上而下依次設(shè)于所述柱管內(nèi)的上篩板、混 合型填料和下篩板構(gòu)成，其中，所述混合型填料由C18填料與N-丙基乙二胺按照質(zhì)量比 1:1~2混合而成。
2. -種制備權(quán)利要求1所述雜質(zhì)吸附型凈化柱的方法，包括下述步驟： a) 將C18填料和N-丙基乙二胺混合均勻，得到混合型填料；其中，C18填料與N-丙基 乙二胺的質(zhì)量比為1:1~2 ; b) 在柱管的出液口一端，安裝一個(gè)篩板，然后向所述柱管內(nèi)加入所述混合型填料，最后 在所述柱管內(nèi)所述混合型填料上方安裝另一個(gè)篩板，將所述混合型填料壓實(shí)，即得所述雜 質(zhì)吸附型凈化柱。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟b)中，所述柱管的內(nèi)徑為10mm，長(zhǎng)度 為 50mm ~60mm ； 所述混合型填料的填充量為300~400mg。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述篩板的安裝方式為過(guò)盈配合； 所述篩板的材質(zhì)為聚乙烯； 所述篩板的孔徑為5 μ m-ΙΟ μ m。
5. 權(quán)利要求1所述雜質(zhì)吸附型凈化柱在對(duì)用于動(dòng)物尿液藥物殘留檢測(cè)的尿液樣品的 前處理中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于：所述藥物殘留為瘦肉精殘留。
7. -種利用權(quán)利要求1所述的雜質(zhì)吸附型凈化柱對(duì)用于動(dòng)物尿液藥物殘留檢測(cè)的尿 液樣品進(jìn)行前處理的方法，包括下述步驟： 在所述雜質(zhì)吸附型凈化柱的出口端連接微孔濾膜，將待處理動(dòng)物尿液與高氯酸溶液混 合，離心處理，收集上清液，將所述上清液移入所述雜質(zhì)吸附型凈化柱，使所述上清液依次 通過(guò)所述雜質(zhì)吸附型凈化柱內(nèi)的上篩板、混合型填料及下篩板，經(jīng)所述微孔濾膜過(guò)濾后流 出，得到純化的尿液樣品，其中，所述藥物殘留為瘦肉精殘留。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述微孔濾膜的直徑為13-17mm，孔徑為 0. 22 μπι ； 所述高氯酸溶液的質(zhì)量濃度為30% -40% ; 所述待處理動(dòng)物尿液與所述高氯酸溶液的體積比為1:0. 02-0. 03。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種用于動(dòng)物尿液中瘦肉精殘留檢測(cè)前處理的雜質(zhì)吸附型凈化柱及其制備方法。所述凈化柱采用C18填料與N-丙基乙二胺以質(zhì)量比1:1～2混合的混合物為填料。本發(fā)明還提供了一種采用該雜質(zhì)吸附型凈化柱對(duì)用于動(dòng)物尿液藥物殘留檢測(cè)的尿液樣品進(jìn)行前處理的方法。本發(fā)明的凈化柱利用混合填料的吸附原理，對(duì)流過(guò)凈化柱的待測(cè)尿液中的色素、有機(jī)酸等雜質(zhì)進(jìn)行選擇性吸附，從而使雜質(zhì)被吸附在凈化柱上，經(jīng)凈化的流出液再經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾后，可直接用于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行上機(jī)測(cè)定。優(yōu)點(diǎn)在于制作方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉、凈化快速、益于環(huán)保、適用范圍廣等特點(diǎn)。
【IPC分類(lèi)】B01D15-20, G01N1-34
【公開(kāi)號(hào)】CN104826359
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510224687
【發(fā)明人】王瑞國(guó), 蘇曉鷗, 王培龍, 李陽(yáng), 張維, 索德成
【申請(qǐng)人】中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所
【公開(kāi)日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年5月5日