專利名稱：膠體金免疫層析狂犬病病毒抗體檢測(cè)試劑條及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)狂犬病病毒抗體的試劑條，本發(fā)明還涉及該試劑條的制備方法。
狂犬病的預(yù)防和治療，均采用注射狂犬疫苗的方法，但疫苗注射后人體內(nèi)是否產(chǎn)生了有效抗體，目前還沒(méi)有適合的檢測(cè)方法，注射了疫苗仍有死亡病例發(fā)生。
本發(fā)明的目的是要提供一種能夠簡(jiǎn)易、快捷地檢測(cè)狂犬病病毒特異抗體的試劑條。
本發(fā)明的另一目的是要提供該試劑條的制備方法。
本發(fā)明的解決方案是在硝酸纖維素膜上包被檢測(cè)線和對(duì)照線，檢測(cè)線側(cè)貼有金標(biāo)抗體吸水纖維，對(duì)照線側(cè)貼有吸水濾紙，其中檢測(cè)線是包被狂犬病毒抗原，對(duì)照線是包被金標(biāo)抗體，狂犬病毒抗原合適包被量為5—15μg蛋白，金標(biāo)結(jié)合物合適抗體量為2—8μg/ml。檢測(cè)時(shí)，抽取被測(cè)者少量血液，滴在該試劑條上，對(duì)比檢測(cè)線和對(duì)照線的顏色，確定人體內(nèi)是否產(chǎn)生了有效抗體。
本發(fā)明試劑條的制備方法是采用狂犬病毒標(biāo)準(zhǔn)株CVS株，感染傳代地鼠腎細(xì)胞(BHK)，制備特異性狂犬病毒抗原，制備免疫層析紙條。用膠體金標(biāo)記抗人IgG的多克隆抗體，制成金標(biāo)結(jié)合物纖維條。
本發(fā)明的試劑條具有以下優(yōu)點(diǎn)檢測(cè)狂犬病毒抗體的方法簡(jiǎn)單、易操作、快速、特異性好，不需要借助其它儀器設(shè)備，適合各級(jí)醫(yī)院及個(gè)人使用。
以下結(jié)合附圖
及實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)一步說(shuō)明附圖為本發(fā)明的試劑條示意圖。
本發(fā)明的試劑條是在硝酸纖維素膜1上包被檢測(cè)線2和對(duì)照線3，檢測(cè)線2側(cè)貼有金標(biāo)抗體吸水纖維4，對(duì)照線3側(cè)貼有吸水濾紙5，其中檢測(cè)線2包被的是狂犬病毒抗原，對(duì)照線3包被的是金標(biāo)抗體，狂犬病毒抗原合適包被量為10μg蛋白，金標(biāo)結(jié)合物合適抗體量為4μg/ml。將試劑條裝入塑料檢測(cè)板中可制成試劑盒。
其制備方法是采用狂犬病毒標(biāo)準(zhǔn)株CVS株，感染地鼠腦組織懸液，感染BHK單層細(xì)胞(1代)，病變后收上清液，感染BHK單層細(xì)胞(2代)，在35℃條件下經(jīng)過(guò)24—48小時(shí)，洗三次換無(wú)血清液，在35℃條件下經(jīng)過(guò)4—5天，收毒液，通過(guò)離心機(jī)處理，條件為5000rpm/min離心15min，收上清液，加入1/10000β丙內(nèi)酯滅活，經(jīng)超濾濃縮，采用瓊脂糖凝膠過(guò)濾，制得狂犬病毒抗原，在硝酸纖維素膜上包被狂犬病毒抗原線和金標(biāo)抗體線制成試劑條。
用本發(fā)明的試劑條檢測(cè)狂犬病毒抗體的敏感性適宜與酶聯(lián)法測(cè)抗體比較，偏低一個(gè)滴度，特異性好，穩(wěn)定性好。用參比血清標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)定，血清含中和抗體達(dá)0.5IU/ml值時(shí)，檢測(cè)線2出現(xiàn)紫紅色的陽(yáng)性反應(yīng)，如檢測(cè)線2無(wú)此反應(yīng)，即為陰性，表明血清中沒(méi)有狂犬病抗體或抗體量不足，對(duì)照線3不管血清中有沒(méi)有狂犬病抗體均出現(xiàn)紫紅色的陽(yáng)性反應(yīng)，表明試劑條有效，如對(duì)照線3無(wú)反應(yīng)，說(shuō)明試劑條失效。根據(jù)WHO規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，中和抗體達(dá)到0.5IU時(shí)，人體才能有免疫力，否則應(yīng)及時(shí)加強(qiáng)免疫。
權(quán)利要求
1.一種膠體金免疫層析狂犬病病毒抗體檢測(cè)試劑條，其特征在于硝酸纖維素膜(1)上包被檢測(cè)線(2)和對(duì)照線(3)，檢測(cè)線(2)側(cè)貼有金標(biāo)抗體吸水纖維(4)，對(duì)照線(3)側(cè)貼有吸水濾紙(5)，其中檢測(cè)線(2)包被的是狂犬病毒抗原，對(duì)照線(3)包被的是金標(biāo)抗體，狂犬病毒抗原合適包被量為5—15μg蛋白，金標(biāo)結(jié)合物合適抗體量為2—8μg/ml。
2.一種膠體金免疫層析狂犬病病毒抗體檢測(cè)試劑條的制備方法，其特征在于采用狂犬病毒標(biāo)準(zhǔn)株CVS株，感染傳代地鼠腎細(xì)胞(BHK)，制備特異性狂犬病毒抗原，制備免疫層析紙條。用膠體金標(biāo)記抗人IgG的多克隆抗體，制成金標(biāo)結(jié)合物纖維條。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑條的制備方法，其特征在于采用狂犬病毒標(biāo)準(zhǔn)株CVS株，感染地鼠腦組織懸液，感染BHK單層細(xì)胞(1代)，病變后收上清液，感染BHK單層細(xì)胞(2代)，在35℃條件下經(jīng)過(guò)24—48小時(shí)，洗三次換無(wú)血清液，在35℃條件下經(jīng)過(guò)4—5天，收毒液，通過(guò)離心機(jī)處理，條件為5000rpm/min離心15min，收上清液，加入1/10000β丙內(nèi)酯滅活，經(jīng)超濾濃縮，采用瓊脂糖凝膠過(guò)濾，制得狂犬病毒抗原，在硝酸纖維素膜上包被狂犬病毒抗原線和金標(biāo)抗體線制成試劑條。
全文摘要
一種膠體金免疫層析狂犬病病毒抗體檢測(cè)試劑條,是在硝酸纖維素膜上包被檢測(cè)線和對(duì)照線,檢測(cè)線側(cè)貼有金標(biāo)抗體吸水纖維,對(duì)照線側(cè)貼有吸水濾紙,其中檢測(cè)線是包被狂犬病毒抗原,對(duì)照線是包被金標(biāo)抗體。其制備方法是采用狂犬病毒標(biāo)準(zhǔn)株CVS株,感染傳代地鼠腎細(xì)胞(BHK),制備特異性狂犬病毒抗原,制備免疫層析紙條。用膠體金標(biāo)記抗人IgG的多克隆抗體,制成金標(biāo)結(jié)合物纖維條。檢測(cè)時(shí),抽取被測(cè)者少量血液,滴在該試劑條上,對(duì)比檢測(cè)線和對(duì)照線的顏色,確定人體內(nèi)是否產(chǎn)生了有效抗體。
文檔編號(hào)G01N33/53GK1326101SQ0011046
公開(kāi)日2001年12月12日 申請(qǐng)日期2000年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月26日
發(fā)明者安米, 安獻(xiàn)祿, 萬(wàn)志恒, 張福琴, 辛革亮, 權(quán)寅妮, 張華 申請(qǐng)人:長(zhǎng)春奇龍生物技術(shù)研究所