專利名稱：將物質(zhì)導(dǎo)入到細胞中的方法以及該方法的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在體內(nèi)和體外將物質(zhì)導(dǎo)入到哺乳動物干細胞和/或先祖細胞中的方法，以及此類方法的應(yīng)用。
以前的研究表明，短的單鏈DNA能被各種培養(yǎng)的細胞迅速內(nèi)化(Bennett，R.M.，Gabor，G.T.and Merritt，M.M.，臨床研究雜志.76，2182-2190(1985)；Loke，S.L.，Stein，C.A.，Zhang，X.H.，Mori，K.，Nakanishi，M.，Subasinghe，C.，Cohen，J.S.and Neckers，L.M.，美國國家科學院院刊86，3474-3478(1989)；Yakubov，L.A.，Deeva，E.A.，Zarytova，V.F.，Ivanova，E.M.，Ryte，A.S.，Yurchenko，L.V.，and Vlassov，V.V.，美國國家科學院院刊86，6454-6458(1989)；Iversen，P.L，Zhu，S.，Meyer，A.，and Zon，G.，反義研究和開發(fā).，2，211-222(1992)；Wu-Pong，S.，Weiss，T.L.，and Hunt，C.A.藥物研究。9，1010-1017(1992)；Chan，T.M.，F(xiàn)ramton，G and Cameron，J.S.，臨床實驗免疫學。91，110-114(1993))。有報道在人白細胞中有介導(dǎo)DNA吸收和破壞的DNA受體((Bennet，R.M.，Gabor，G.T.and Merritt，M.M.臨床研究雜志。76，2182-2190(1985))。
但是，裸露的DNA，RNA和寡核苷酸在體內(nèi)通常是不能跨越細胞膜的(Boado，R.J.，Tsukamoto，H.and Pardrige，W.M.藥理科學雜志。87，1308-1315(1998))。因此，就有了幾種介導(dǎo)跨膜轉(zhuǎn)運系統(tǒng)相互作用的將DNA和可溶性載體，受體結(jié)構(gòu)或綴合物相互結(jié)合的策略(參見，WO 96/15811；WO 94/25608；Kato，Y.and Sugiyama，Y.Crit.Rev.Ther.Drug Carrier syst.14，287-331(1997))。
總的說來，退化或損傷之后的神經(jīng)元的替換不是哺乳動物大腦的特征。因此，神經(jīng)元的喪失被認為是持續(xù)的。已經(jīng)有了在海馬形成中的長期的出生后顆粒細胞層的神經(jīng)退化的描述(Altman，J.and Das，G.D.，J.Comp.Neurol.124319-335(1965)；Altman，J.and Das，G.D.，自然2141098-1101(1967)；Caviness，V.S.jr.，J.CompNeurol.151113-120(1973)；Gueneau，G.，Privat，A.，Drouet，J.，and Court，L.，神經(jīng)科學發(fā)展。5，345-358(1982)；Eckenhoff，M.F.and Rakic，P.，神經(jīng)科學雜志。8，2729-2747(1988))。最近已經(jīng)知道在成人中廣泛存在著細胞發(fā)生和神經(jīng)發(fā)生(Eriksson，P.S.，Perfilieva，E.，Bjork-Eriksson，T.，Alborn，A.，Nordborg，C.，Peterson，D.A.，Gage，F(xiàn).H.，自然醫(yī)藥。41313-1317(1998)。
顆粒細胞層的新生的神經(jīng)元表達分化神經(jīng)元的標記并有和分化的顆粒細胞相應(yīng)的表型特征(Kaplan，M.S.and Bell，D.H.，神經(jīng)科學雜志。41429-1441(1984)；Cameron，H.A.，Wooley，C.S.，McEwen，B.S.，andGould，E.，神經(jīng)科學。56337-344(1993)；Cameron，H.A.，Wooley，C.S.，and Gould，E.，大腦研究。611342-346(1993))。進一步的，這些神經(jīng)元還在苔蘚纖維中形成了軸突并與它們在海馬CA3中的靶形成了突觸(Seki，T.and Arai，Y.，神經(jīng)科學雜志。132351-2358(1993)；Stanfiled，B.B.，and Trice，J.E.，實驗大腦研究。72399-406(1988))。海馬和空間學習和記憶相關(guān)(McNamara，R.K.，and Skelton，R.W.，大腦研究綜述。1833-49(1993))。加入N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑或去除腎上腺可以影響先祖細胞的增殖(Cameron，H.A.，and Gould，E.，神經(jīng)科學61203-209(1994)；Cameron，H.A.，Tanapat，P.，andGould，E.，神經(jīng)科學。823490-354(1998))。隨著年齡增加彈性下降，而最近的研究表明隨著年齡的增加先祖細胞的增殖下降了但并沒有徹底消失(Kuhn，H.，Dicknson-Anson，H.，and Gage，F(xiàn).H.，神經(jīng)科學。162027-2033(1996))。最近已經(jīng)將費時費力從組織培養(yǎng)物中或從成年嚙齒類大腦中分離得到的干細胞移植到了成年動物的大腦中，其中干細胞分化成了有神經(jīng)元特征的細胞(Suhonen，J.O.，Peterson，D.A.，Ray，J.，and Gage，F(xiàn).H.，自然。383624-627(1996))?，F(xiàn)在還沒有已知的干細胞標記可以用于從成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)中快速分離干細胞。該事實限制了干細胞在人類中的治療用途。到現(xiàn)在為止，還依賴于間接的方法檢測干細胞，如在分裂細胞的細胞周期的S期摻入到基因組中的修飾的核苷酸。因此，可以用免疫化學的方法檢測后代的表型。這種鑒定先祖細胞的后代的方法的限制是這些細胞不在具有先祖或干細胞的特征，意味著這些細胞缺少自我更新和發(fā)育成神經(jīng)元，星行膠質(zhì)細胞或少突膠質(zhì)細胞的能力。最近公開的其他的從嚙齒類中分離干細胞的策略 可以基于非選擇性的染料染色，用抗圍繞腦室(ventricle)的所有細胞都表達的網(wǎng)蛋白(nestin)的抗體進行免疫分選，或用帶有選擇性標記的基因的病毒進行非選擇性感染(Johansson，C.B.，Momma，S.，Clarke，D.L.，Risling，M.，Lendahl，U.，F(xiàn)risen，J.，細胞。9625-34(1999))。所有的這些方法都不是很有效，因此不適合于從小的人組織樣品中快速分離干細胞。因此，很重要的一點是要鑒定有用的標記或特征以便能快速的分離干細胞或先祖細胞用于治療目的如自體神經(jīng)移植。
本發(fā)明基于以不同的目的在先祖細胞和干細胞中使用該核酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明，就可能不借助于如病毒載體轉(zhuǎn)運DNA。本發(fā)明提供了在體外和體內(nèi)分離先祖細胞和干細胞的新的方法。該分離以含有cDNA的質(zhì)粒的表達和免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，其中所述cDNA的表達使選擇性標記成為可能；或者以能使選擇性鑒定成為可能的蛋白的DNA的表達或以熒光蛋白的表達，包括FACS分選，為基礎(chǔ)。本發(fā)明還提供了新的將不同的物質(zhì)如藥物轉(zhuǎn)運到先祖細胞和/或干細胞中的方法。
因此，本發(fā)明的目的在于提供一種將包含核酸的物質(zhì)導(dǎo)入到哺乳動物神經(jīng)干細胞或先祖細胞中的方法，其特征在于所述核酸在體外直接和所述細胞的細胞膜或細胞膜內(nèi)成分相互作用，從而使包含核酸的物質(zhì)通過細胞內(nèi)在的轉(zhuǎn)運機制被細胞吸收。所述方法可以在體內(nèi)或體外施行。
該方法特別適于從成體大腦中分離先祖細胞或干細胞，用于基因治療，細胞分選和診斷。
通過下面的說明書和權(quán)利要求書，本發(fā)明的特征將更明顯。
與其他已知的基于DNA和可溶性載體的結(jié)合，受體結(jié)構(gòu)或綴合物(如DNA結(jié)合蛋白，聚L-賴氨酸和整合蛋白受體配體)介導(dǎo)的與跨膜轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的相互作用的方法相比，本發(fā)明有幾個優(yōu)點。一個重要的優(yōu)點是本發(fā)明不依賴于DNA和任何可溶性的受體或載體的結(jié)合。另一個重要的優(yōu)點是可以進行細胞的選擇性標記，原因在于只有具有上述的內(nèi)在的轉(zhuǎn)運機制的細胞被轉(zhuǎn)染。發(fā)明詳述本發(fā)明所基于的和從哺乳動物大腦包括人大腦干細胞和先祖細胞中發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)運機制，可被用于將單鏈或雙鏈DNA或RNA轉(zhuǎn)運到細胞中并隨后可以使DNA或RNA在細胞內(nèi)保持完整和不被降解。發(fā)現(xiàn)具有該機制的細胞是來自成體的神經(jīng)干細胞和先祖細胞。
利用該轉(zhuǎn)運機制，可以將核酸插入到細胞中。
這些核酸能夠用于鑒定從而將先祖細胞和干細胞和其他細胞分離開來，或用于藥物目的。
如上所述，本發(fā)明涉及將包含核酸的物質(zhì)導(dǎo)入到哺乳動物神經(jīng)干細胞或先祖細胞中的方法，其特征在于所述的核酸直接和細胞膜或細胞膜內(nèi)的成分相互作用，從而使包含核酸的物質(zhì)通過細胞內(nèi)在的轉(zhuǎn)運機制被細胞吸收。該方法可以在體內(nèi)或體外使用。本發(fā)明的方法中所使用的細胞優(yōu)選來自成體。
本發(fā)明的方法中將要導(dǎo)入到細胞中的物質(zhì)是或包括例如，單鏈或雙鏈的，線性或環(huán)狀的DNA，或單鏈或雙鏈的RNA。該物質(zhì)可以是融合分子，包括核酸部分和蛋白部分，或含有特定cDNA的表達載體。術(shù)語“表達載體”在本文中指所有的由含有特定肽或蛋白質(zhì)的cDNA的雙鏈DNA結(jié)構(gòu)的載體或質(zhì)粒。一旦干細胞或先祖細胞吸收了該表達載體，就將導(dǎo)致所述肽或蛋白的合成。
當該物質(zhì)是表達載體時，根據(jù)本發(fā)明的實施方案，優(yōu)選該cDNA產(chǎn)生的蛋白或肽能活化所述細胞的增殖和/或分化和/或譜系確定。
如上所述，本發(fā)明的方法可以在體外如組織或細胞培養(yǎng)物中使用或在體內(nèi)使用。當在體內(nèi)使用該方法時，優(yōu)選將要被轉(zhuǎn)入物質(zhì)的細胞是中樞神經(jīng)細胞。
本發(fā)明的方法可以用于幾個不同的目的，如診斷和治療。
當在體外使用該方法時，它特別適于鑒定先祖細胞或干細胞。當將本發(fā)明的方法用于鑒定目的時，優(yōu)選該將要導(dǎo)入細胞中的物質(zhì)能產(chǎn)生可以探測的信號或產(chǎn)生能用于選擇性鑒定干細胞和先祖細胞的肽或蛋白質(zhì)。所述的肽或蛋白接著又產(chǎn)生可以探測的信號例如熒光蛋白或標記蛋白。干細胞或先祖細胞的合適的標記蛋白的實例是轉(zhuǎn)運系統(tǒng)中的蛋白成分如受體和載體。也可通過使用標簽化的物質(zhì)如放射性的標簽化的核酸得到可檢測的信號。
一直以來非常希望可以從樣品中鑒定和分離先祖細胞和干細胞，該樣品由例如從病人中取出的不同結(jié)構(gòu)或來自病人的細胞培養(yǎng)物組成。
一旦鑒定了干細胞或先祖細胞，這些細胞就可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的任何技術(shù)將其從其他類型的細胞中分離出來。然后將這些細胞用于各種目的，如診斷目的或傳代和移植給病人。
也可以與體外方法類似的方法使用體內(nèi)方法鑒定和隨后分離細胞。當在體內(nèi)使用該方法時，可以從大腦的不同結(jié)構(gòu)中鑒定和分離干細胞和先祖細胞。
還可以根據(jù)本發(fā)明的方法對干細胞和先祖細胞進行傳代。該傳代可以在體內(nèi)和體外進行。該細胞，首先可以任選地根據(jù)本發(fā)明的方法進行鑒定和分離，然后將這些細胞和包括或含有肽或蛋白的物質(zhì)接觸，這些肽或蛋白一旦被細胞吸收就可以活化所述細胞的增殖和/分化和/或譜系確定。
還可以將本發(fā)明的體內(nèi)和體外方法用于基因治療。先將該物質(zhì)與細胞接觸，然后轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi)，然后稱為藥物活性物質(zhì)。一旦被該細胞吸收，它也可能產(chǎn)生藥物活性物質(zhì)。該活性物質(zhì)還可以是例如包含編碼藥物活性物質(zhì)的cDNA的表達載體。一旦該表達載體被細胞吸收，其中的cDNA所產(chǎn)生的藥物活性物質(zhì)可能是肽或蛋白，其中肽或蛋白可以轉(zhuǎn)運出先祖細胞或干細胞從而影響周圍的組織或細胞。此類肽或蛋白的例子是趨向性因子或其他能夠?qū)χ車募毎蚪M織產(chǎn)生期望的作用的蛋白。由所述的cDNA所產(chǎn)生的肽或蛋白是一種活化或鈍化先祖細胞或干細胞的物質(zhì)，目的是為了更容易地分離先祖細胞或干細胞或為了從大腦中的先祖細胞或干細胞或在組織培養(yǎng)物的先祖細胞或干細胞中誘導(dǎo)新的神經(jīng)元或星型膠質(zhì)細胞或少突膠質(zhì)細胞的發(fā)生，其中來自大腦的先祖細胞或干細胞或在組織培養(yǎng)物中的干細胞或先祖細胞是用于共同移植給病人。還可以使用有核酸和藥物活性蛋白組成的融合分子的物質(zhì)，其中核酸能使該物質(zhì)轉(zhuǎn)運進入細胞。
當在體內(nèi)進行基因治療時，該方法可以被用于治療神經(jīng)損傷，神經(jīng)疾病，神經(jīng)缺陷或紊亂。本文中所用的術(shù)語“治療”指治愈或減輕疾病或紊亂的治療或為了防止疾病發(fā)展的治療。治療可以是馬上治療或長期治療。本文中所用的術(shù)語“病人”指根據(jù)本發(fā)明需要治療的人或非人的哺乳動物。
還可以通過將藥物活性化合物和核酸相連接而產(chǎn)生可用于治療由于正常干細胞或先祖細胞的紊亂的治療的醫(yī)藥產(chǎn)品。當將該核酸和干細胞或先祖細胞接觸時，它將被細胞通過細胞內(nèi)在的轉(zhuǎn)運機制吸收到細胞內(nèi)，而且由于藥物活性化合物是和核酸相連接的，該藥物活性化合物也將被轉(zhuǎn)運到細胞中。此類藥物產(chǎn)品還可以包括其他的物質(zhì)，例如惰性載體，或藥學上可以接受的佐劑，載體，防腐劑等，這些都是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。優(yōu)選，通過外科插入導(dǎo)管輸注到腦室中或通過插入到腰錐的注射器輸注到脊椎液中。
本發(fā)明的方法還可被用于檢測或篩選蛋白或可檢測的信號。在篩選或檢測應(yīng)用中，本發(fā)明使用了吸收包括編碼將被應(yīng)用到篩選或檢測中的DNA的干細胞。蛋白質(zhì)的例子有用于篩選新的受體拮抗劑的受體。本發(fā)明的轉(zhuǎn)運和吸收以及質(zhì)粒在細胞中的表達可以被用在檢測裝置和篩選裝置中，其中特定蛋白如受體或酶的表達是所期望的。本發(fā)明相比于傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法(其中需要有藥物或化合物幫助DNA吸收和表達)的優(yōu)點在于高效和不必要有藥物，化合物或化學物質(zhì)幫助吸收和隨后的蛋白表達。
本發(fā)明將通過下面的實施例進一步進行描述。該實施例僅僅是為了說明本發(fā)明而不應(yīng)該理解為限制本發(fā)明的范圍。


圖1A是一幅熒光顯微照片，示在50μg/ml的含GFP cDNA質(zhì)粒的培養(yǎng)基中培養(yǎng)先祖細胞的結(jié)果；圖1B是光學顯微照片圖，示和圖1A相同的結(jié)果；圖1C是一幅熒光顯微照片，示在50μg/ml的不含GFP cDNA的另一質(zhì)粒的培養(yǎng)基中培養(yǎng)先祖細胞的結(jié)果；圖1D是光學顯微照片圖，示和圖1C相同的結(jié)果。
此后，用帶有熒光顯微鏡的倒置的Leica DMIRB顯微鏡檢測熒光蛋白的表達。使用氬離子激光器(Spectra Physics model 2025-05，Sunnyvale，CA)在488nm激發(fā)GFP的熒光從而觀察細胞。激光通過一個488nm的線性干涉濾片，再通過一個旋光片，從而破壞光的相干使激光散射。用一個透鏡收集激光并使其通過一個熒光濾錐(LeicaI-3)進入物鏡以激發(fā)熒光團。得到的熒光用同一物鏡收集并用一個3-芯(3-chip)的彩色CCD照相機(Panasonic)檢測和用SuperVHS(Panasonic SVHS AG-5700)以25Hz幅收集率進行錄像。將像帶上的CCD圖象進行數(shù)字化加工和成象。
將先祖細胞用含有50μg/ml的帶有GFPc DNA的質(zhì)粒的培養(yǎng)基培養(yǎng)10分鐘，而不加入有助于DNA吸收或轉(zhuǎn)運的化學物質(zhì)，然后在檢測前再培養(yǎng)48小時，結(jié)果是這些細胞的熒光很強。圖1A是該結(jié)果的熒光照相圖，而圖1B是相應(yīng)的光學顯微圖片。
相反地，當用其他不含GFP基因的質(zhì)粒培養(yǎng)來自成年大鼠的先祖細胞時，沒有看到熒光。圖1C和1D示使用不含GFP的質(zhì)粒時的結(jié)果。
另外，用50μg/ml的含有表達β-半乳糖苷酶的基因的質(zhì)粒培養(yǎng)先祖細胞時，而且沒有加入有助于DNA吸收或轉(zhuǎn)運的化學物質(zhì)，培養(yǎng)48小時后檢測，結(jié)果是細胞表達β-半乳糖苷酶活性。
另外還發(fā)現(xiàn)將腎臟來源的Cos-7細胞用含有50μg/ml的帶有GFPcDNA的質(zhì)粒的培養(yǎng)基培養(yǎng)10分鐘，而不加入有助于DNA吸收或轉(zhuǎn)運的化學物質(zhì)，然后在檢測前再培養(yǎng)48小時，結(jié)果是這些細胞的不表達綠色熒光蛋白。該實驗的檢測和實驗方法和先祖細胞的相同。
而且，當用含有表達β-半乳糖苷酶的基因的質(zhì)粒培養(yǎng)cos-7細胞時，而沒有加入有助于DNA吸收和轉(zhuǎn)運的化學物質(zhì)，培養(yǎng)48小時后進行檢測，這些細胞不表達β-半乳糖苷酶活性。
從上面的實驗可以清楚的看出來，來自成年大鼠大腦的先祖細胞能夠在體外將雙鏈DNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)運到其內(nèi)部，并可以合成該DNA序列的所編碼的蛋白質(zhì)。
權(quán)利要求
1.一種將包含核酸的物質(zhì)導(dǎo)入到哺乳動物神經(jīng)干細胞或先祖細胞中的方法，其特征在于所述核酸在體外直接和所述細胞的細胞膜或細胞膜內(nèi)成分相互作用，從而使包含核酸的物質(zhì)通過細胞內(nèi)在的轉(zhuǎn)運機制被細胞吸收。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述的細胞來自成體。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述的方法是在潮濕空氣中在37℃下施行的。
4.權(quán)利要求1-3任一項的方法，其中所述的物質(zhì)是或包括單鏈或雙鏈，線性或環(huán)狀DNA。
5.權(quán)利要求1-3任一項的方法，其中所述的物質(zhì)是或包括單鏈或雙鏈RNA。
6.權(quán)利要求1-3任一項的方法，其中所述的物質(zhì)是包括有核酸部分和蛋白質(zhì)部分的融合分子。
7.權(quán)利要求1-3任一項的方法，其中所述的物質(zhì)是含有特定cDNA的表達載體。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述的cDNA產(chǎn)生了活化所述細胞的增殖和/或分化和/或譜系確定的肽或蛋白質(zhì)。
9.權(quán)利要求1-6任一項的方法，其中所述的物質(zhì)產(chǎn)生了可檢測的信號。
10.權(quán)利要求7的方法，其中所述的cDNA產(chǎn)生了能夠選擇性鑒定干細胞和/或先祖細胞的肽或蛋白質(zhì)。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述的肽或蛋白質(zhì)產(chǎn)生了可以檢測的信號。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述的蛋白質(zhì)是熒光蛋白。
13.權(quán)利要求11或12的方法，其中所述的可以檢測的信號是基于放射性標記的核酸。
14.權(quán)利要求1-13任一項的方法，其中所述的細胞是組織細胞或細胞培養(yǎng)物細胞。
15.權(quán)利要求1-14任一項的方法在鑒定先祖細胞和/或干細胞中的應(yīng)用。
16.權(quán)利要求15的應(yīng)用，其中所述的細胞在鑒定后被從周圍的其他細胞中分離出來。
17.權(quán)利要求1-14任一項的方法在基因治療中的應(yīng)用。
18.權(quán)利要求16和17的應(yīng)用，其中所述的蛋白部分由藥物活性蛋白組成。
19.權(quán)利要求8的方法在神經(jīng)細胞傳代中的應(yīng)用。
20.權(quán)利要求18的方法，其中所述的傳代后的神經(jīng)適于移植到患者體內(nèi)。
21.權(quán)利要求1-14任一項的方法的應(yīng)用，用于檢測包含含有表達質(zhì)粒的cDNA的醫(yī)藥產(chǎn)品。
22.權(quán)利要求1-14任一項的方法用于診斷目的。
23.權(quán)利要求8-13任一項的方法的應(yīng)用，其中所述的蛋白質(zhì)或可檢測信號允許對上述的蛋白或信號進行檢測或篩選。
24.一種將包含核酸的物質(zhì)導(dǎo)入到哺乳動物神經(jīng)干細胞或先祖細胞中的方法，其特征在于所述的核酸在體內(nèi)與所述細胞的細胞膜或細胞膜內(nèi)的成分進行直接相互作用，從而使該物質(zhì)通過細胞的內(nèi)在轉(zhuǎn)運機制被細胞吸收。
25.權(quán)利要求24的方法，其中所述的細胞來自成體。
26.權(quán)利要求24的方法，其中所述的物質(zhì)是或包括單鏈或雙鏈，線性或環(huán)狀DNA。
27.權(quán)利要求24的方法，其中所述的物質(zhì)是或包括單鏈或雙鏈RNA。
28.權(quán)利要求24的方法，其中所述的物質(zhì)是包括核酸部分和蛋白質(zhì)部分的融合分子。
29.權(quán)利要求24的方法，其中所述的物質(zhì)是含有特定cDNA的表達載體。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述的cDNA產(chǎn)生了活化所述細胞的增殖和/或分化和/或譜系確定的肽或蛋白質(zhì)。
31.權(quán)利要求24的方法，其中所述的物質(zhì)產(chǎn)生了可檢測的信號。
32.權(quán)利要求29的方法，其中所述的cDNA產(chǎn)生了能夠選擇性鑒定干細胞和/或先祖細胞的肽或蛋白質(zhì)。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述的肽或蛋白質(zhì)產(chǎn)生了可以檢測的信號。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述的蛋白質(zhì)是熒光蛋白。
35.權(quán)利要求33的方法，其中所述的可以檢測的信號是基于放射性標記的核酸。
36.權(quán)利要求1-13任一項的方法，其中所述的細胞是患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的細胞。
37.權(quán)利要求的方法在鑒定先祖細胞和/或干細胞中的應(yīng)用。
38.權(quán)利要求37的應(yīng)用，其中所述的細胞在鑒定后被從周圍的其他細胞中分離出來。
39.權(quán)利要求24-38的方法在基因治療中的應(yīng)用。
40.權(quán)利要求28的應(yīng)用，其中所述的蛋白部分由藥物活性蛋白組成。
41.權(quán)利要求30的方法在神經(jīng)細胞傳代中的應(yīng)用。
42.權(quán)利要求24-36任一項的方法的應(yīng)用，用于檢測包含含有表達質(zhì)粒的cDNA的醫(yī)藥產(chǎn)品。
43.權(quán)利要求24-36任一項的方法用于診斷目的。
44.權(quán)利要求30-35任一項的方法的應(yīng)用，其中所述的蛋白質(zhì)或可檢測信號允許對上述的蛋白或信號進行檢測或篩選。
45.權(quán)利要求24的應(yīng)用，用于治療神經(jīng)損傷，疾病，缺損或紊亂。
全文摘要
本發(fā)明公開了將包含核酸的物質(zhì)導(dǎo)入到哺乳動物神經(jīng)干細胞或先祖細胞中的方法,其特征在于所述的核酸直接和細胞膜或細胞膜內(nèi)的成分相互作用,從而使包含核酸的物質(zhì)通過細胞內(nèi)在的轉(zhuǎn)運機制被細胞吸收。本發(fā)明還公開了所述方法的各種應(yīng)用。
文檔編號G01N33/15GK1336959SQ00802698
公開日2002年2月20日 申請日期2000年1月14日 優(yōu)先權(quán)日1999年1月15日
發(fā)明者P·艾利松, O·奧爾瓦 申請人:A+科學投資有限公司