專利名稱：保護(hù)細(xì)胞和/或組織的物質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及適于保護(hù)細(xì)胞和/或組織的物質(zhì)。
背景技術(shù)：
哺乳動(dòng)物的器官及組織或者其它的真核細(xì)胞可能會(huì)受到不同的有害影B向。如果從有機(jī)體內(nèi)分離出細(xì)胞或組織，例如在培養(yǎng)細(xì)胞或移植過(guò)程中分離出細(xì)胞或組織，那么，高等生物的細(xì)胞特別存在危險(xiǎn)，特別容易出現(xiàn)大量的損傷。此外，如果細(xì)胞或器官的原始環(huán)境發(fā)生變化，例如外科手術(shù)干預(yù)或患病導(dǎo)致的變化，那么也會(huì)出現(xiàn)損傷。 在局部缺血的情況下，特別容易造成哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織的嚴(yán)重?fù)p傷。局部缺血是指由于缺少動(dòng)脈供血，導(dǎo)致組織出現(xiàn)病理性的血液流通受阻或停止，從而對(duì)細(xì)胞或組織的氧氣供給降低。盡管氧氣供給受阻，但是，經(jīng)常出現(xiàn)細(xì)胞或組織的反常氧化損傷現(xiàn)象。在外科手術(shù)過(guò)程中，局部缺血經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞或組織受損，細(xì)胞或組織受損會(huì)導(dǎo)致疑難病癥的出險(xiǎn)率上升。本發(fā)明的任務(wù)在于避免上述風(fēng)險(xiǎn)。 特別重要的是，在移植外科的范疇內(nèi)，對(duì)細(xì)胞及組織進(jìn)行保護(hù)。從取出器官至將其移植進(jìn)接收方的過(guò)程中，重要的在于，盡可能保護(hù)器官的功能。 只有在個(gè)別的情況下，才能將細(xì)胞或組織立即移植進(jìn)相應(yīng)的部位或位置，因此，必須對(duì)細(xì)胞或組織進(jìn)行貯藏。取出組織后，通常在低溫條件下存放，從而降低新陳代謝。在低溫作用下，在細(xì)胞組織上，可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的損傷。在低溫存放器官時(shí)，特別容易出現(xiàn)上述情況。例如各種腎臟，低溫會(huì)損傷內(nèi)皮細(xì)胞，從而導(dǎo)致障礙功能消失，最終，免疫綜合癥或功能性障礙的風(fēng)險(xiǎn)大幅度上升。至今為止，針對(duì)預(yù)防低溫?fù)p傷，在學(xué)術(shù)范圍內(nèi)，在實(shí)驗(yàn)中采用了一些物質(zhì)，如多巴胺或多巴酚丁胺，盡管這些物質(zhì)具有一定的保護(hù)作用，但是，要求的濃度非常高。將其應(yīng)用于動(dòng)物或人類短時(shí)間后，會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)烈的血?jiǎng)討B(tài)反應(yīng)，因此，細(xì)胞不再具有本身的功能，不能應(yīng)用于移植。 貯藏細(xì)胞或組織的其它方式還有，使用含有貯藏材料的溶劑封存細(xì)胞及組織，特別是針對(duì)移植，采用該方法。使用溶劑延長(zhǎng)移植細(xì)胞組織的壽命，溶劑內(nèi)含有PHB及PHB葉酸拮抗劑。在DE 295 04 589U1內(nèi)，針對(duì)該目的，進(jìn)行了進(jìn)一步的闡述，使用苯甲酸及其衍生物，必要時(shí)，結(jié)合其它材料，達(dá)到保護(hù)效果。在其它方面，采用腎上腺素或卡維地洛。
至今為止，還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)一種理想的物質(zhì)，一方面能夠避免細(xì)胞及組織的局部性缺血損傷，另一方面，在溶劑濃度較小的條件下，達(dá)到需要的保護(hù)效果，從而可以避免血?jiǎng)討B(tài)反應(yīng)，此外，保護(hù)物質(zhì)既不會(huì)損害健康，也不會(huì)損害環(huán)境。 本發(fā)明的任務(wù)在于，發(fā)明一種物質(zhì)，在體內(nèi)以及體外過(guò)程中，即存放過(guò)程以及運(yùn)輸過(guò)程中，保護(hù)細(xì)胞及組織，特別是保護(hù)應(yīng)用于移植的細(xì)胞組織或取出的細(xì)胞，避免其受到局部缺血損傷或低溫?fù)p傷，或者，降低損傷風(fēng)險(xiǎn)。此外，可以在濃度較低的情況下，應(yīng)用該物質(zhì)，避免出現(xiàn)血?jiǎng)討B(tài)反應(yīng)及其它不良效果。 通過(guò)具有權(quán)利要求1所述特征的物質(zhì)，解決上述任務(wù)。在從屬權(quán)利要求中，闡述了本發(fā)明的其它優(yōu)勢(shì)。
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本發(fā)明的具體闡述 出乎意料地發(fā)現(xiàn)，一種芳香系統(tǒng)可以保護(hù)細(xì)胞及組織，這個(gè)系統(tǒng)至少具有一個(gè)芳
香環(huán)，這個(gè)環(huán)具有兩個(gè)可還原的可取代分子R2和一個(gè)其它可取代分子&，分子的log P
至少達(dá)到2. 5。通過(guò)以下通式(1)，闡述本發(fā)明所述的物質(zhì)
在式內(nèi)，雙圓環(huán)展示了一種芳香系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有6-18個(gè)C原子，至少具有可取代分子!^、R2、R3，在由0H、SH、NH2構(gòu)成的組內(nèi)選擇&及R2，可取代分子也可以以被保護(hù)的形式出現(xiàn)，R3是疏水基團(tuán)，物質(zhì)的log P至少為2. 5。 芳香系統(tǒng)可以由芳香環(huán)構(gòu)成，這些圓環(huán)帶有作為環(huán)狀原子的碳，也可以有雜原子，條件為具有生物相容性。例如咔唑及衍生物較為適宜，可以作為芳香系統(tǒng)內(nèi)具有雜原子的芳香環(huán)，優(yōu)選的芳香物質(zhì)只含有碳。
芳香系統(tǒng)具有一個(gè)或多個(gè)芳香環(huán)，這些環(huán)可以相互稠合。例如優(yōu)選苯基、萘、蒽。
芳香系統(tǒng)可以在帶有可取代分子&、 R2、 R3的同時(shí)，帶有其它的可取代分子，針對(duì)需要的特
性，其它的可取代分子具有惰性，必要時(shí)，可以穩(wěn)定或激活該系統(tǒng)。優(yōu)選方式為，除了
1 3，不連接其它的可取代分子。 該芳香系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于，至少具有可取代分子Rp R2、 &，這樣，可以具有5-、6-或7-元結(jié)構(gòu)環(huán)。這些環(huán)由5至7個(gè)原子構(gòu)成，具有高度的環(huán)穩(wěn)定性，因此，即使芳香環(huán)的取代程度很高，內(nèi)部壓力也可以降低?？梢砸院?jiǎn)易的方式，獲取、研發(fā)這種類型的芳香系統(tǒng)，這種芳香系統(tǒng)不會(huì)危害健康和環(huán)境。 其它優(yōu)選的芳香系統(tǒng)具有1至3個(gè)環(huán)。按照原理，可以采用連接的結(jié)構(gòu)形式，這種結(jié)構(gòu)形式的芳香環(huán)可以具有更多的環(huán)，但是，必須強(qiáng)調(diào)如果較小的芳香系統(tǒng)只具有1至3個(gè)環(huán)，那么，環(huán)的尺寸會(huì)很小，因此，有利于系統(tǒng)穿過(guò)細(xì)胞壁滲透。 從由0H、 SH、 NH2構(gòu)成的組中選擇可取代分子&和R2，必要時(shí)，以受保護(hù)的形式出現(xiàn)，可以由殘基構(gòu)成各個(gè)組合。優(yōu)選方式為，Ri、R2為0H。可以通過(guò)保護(hù)基，保護(hù)各個(gè)基團(tuán)，這樣，在存放期間，可以避免有害反應(yīng)。 在芳香系統(tǒng)內(nèi)，殘基I^和R2與一個(gè)芳香環(huán)連接，就是說(shuō)，相互保持鄰位或?qū)ξ??？梢灶A(yù)計(jì)，通過(guò)選擇兩個(gè)可取代分子&和R2的相對(duì)位置，能夠降低對(duì)兩個(gè)基團(tuán)的影響，從而強(qiáng)化對(duì)細(xì)胞組織的保護(hù)，避免其受到氧化損害?？梢宰C實(shí)，由于在鄰位及對(duì)位上，芳香環(huán)具有一致性，兩個(gè)官能團(tuán)即&和1 2，位于相同的方向上，這樣，可以在協(xié)同作用方面，強(qiáng)化基團(tuán)的功能。特別具有優(yōu)勢(shì)的芳香系統(tǒng)為2，5-二羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、2，5-二羥基苯乙胺或3，4-二羥基苯乙胺。 如果本發(fā)明所述的物質(zhì)形式為log P在2.5以上，那么，該物質(zhì)才能保護(hù)細(xì)胞及組織，不受到傷害性影響。log P是一個(gè)實(shí)際計(jì)算出的參數(shù)，可以通過(guò)一種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，數(shù)學(xué)計(jì)算該參數(shù)，P可以在正辛醇和水之間，描述被觀察物質(zhì)的分布系數(shù)，就是說(shuō)，可以描述該物質(zhì)的疏水程度。如果P的數(shù)值較小，那么，說(shuō)明分子親水程度上升，同時(shí)，較高的數(shù)值說(shuō)明親脂程度上升。 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，如果分子的log P數(shù)值最低為2. 5，那么，能夠達(dá)到良好的親脂程度和 疏水程度，與傳統(tǒng)的、具有較低log P數(shù)值的物質(zhì)相比較，分子可以更為良好地通過(guò)細(xì)胞壁， 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)。親水程度較高的分子的log P低于2.5，不能穿過(guò)具有半滲透性的細(xì)胞 壁，因此，不能達(dá)到保護(hù)效果。如果log P數(shù)值為2. 5，那么，可以達(dá)到一個(gè)過(guò)度數(shù)值，這個(gè)數(shù) 值表示，材料恰當(dāng)，可以滲透進(jìn)組織細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)降低或避免氧化作用，防止組織受到局部 缺血損傷。 針對(duì)log P數(shù)值的調(diào)整，需要按照本發(fā)明進(jìn)行設(shè)置，對(duì)兩個(gè)還原作用的可取代分子 &和R2進(jìn)行設(shè)置的同時(shí)，還有對(duì)另一個(gè)可取代分子!^，進(jìn)行設(shè)置。其作用在于，有目的地設(shè) 置物質(zhì)的藥物特性，針對(duì)logP的匹配程度，進(jìn)行相應(yīng)的變化。如果R3具有生理相容性，有 利于疏水性，那么，可以不限制其結(jié)構(gòu)。這樣，&既可以是同質(zhì)烷基，也可以是異質(zhì)烷基，可 以是直鏈形，也可以是分支狀。R3的定義包括取代的、未取代的、同質(zhì)的或異質(zhì)的化學(xué)"殘 基"。在一個(gè)優(yōu)選的設(shè)計(jì)方案內(nèi)，可取代分子R3是烷基分子，該分子由C6至C26構(gòu)成，優(yōu)選方 式為由C8至C18構(gòu)成。就是說(shuō)，R3優(yōu)選為飽和的烷基殘基，由碳原子構(gòu)成，可以直線排列， 也可以分支排列，包括6至26個(gè)碳原子，優(yōu)選方式為，由8至18個(gè)碳原子構(gòu)成。針對(duì)烷基 殘基，優(yōu)選線形的、相互對(duì)立分支的烷基鏈?？梢钥紤]這種具有碳鏈的烷基可取代分子，該 碳鏈由6至26個(gè)碳原子組成，在所屬的芳香環(huán)上，可以明顯提高芳香環(huán)的疏水性，芳香環(huán)承 載疏水可取代分子Ri和&，這樣，可以再次簡(jiǎn)化向細(xì)胞內(nèi)的滲透，因此，本發(fā)明所述的物質(zhì) 可以完好保護(hù)細(xì)胞、組織及器官。這樣，疏水的、劇烈還原的可取代分子&和R2被"屏蔽"， 可取代分子被分配進(jìn)細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)揮其功能。當(dāng)烴殘基由6個(gè)以上碳原子構(gòu)成時(shí)，才 能提高親脂性，如果烴殘基由8至18個(gè)碳原子構(gòu)成，那么這種作用最強(qiáng)。如果碳原子的數(shù) 量超過(guò)26個(gè)，那么可取代分子R3的屏蔽程度過(guò)高，物質(zhì)不能在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮保護(hù)作用，原因 在于活性的、劇烈還原的官能團(tuán)&和R2受阻。 可取代分子1 3可以直接與芳香系統(tǒng)連接。在優(yōu)選的設(shè)計(jì)方案內(nèi)，通過(guò)橋接方式， 進(jìn)行連接，橋接部分可以是Y-NHC0化學(xué)類別，Y形成芳香系統(tǒng)和NHC0官能團(tuán)的直接鍵，或 者形成烷基官能團(tuán)，該烷基官能團(tuán)具有Q至C8組成的碳鏈，優(yōu)選方式為Q至C3組成的碳 鏈。這樣，R3與羰基碳鏈連接。這樣，與R3共同構(gòu)成酰胺。 作為物質(zhì)，酰胺具有肽鍵，在自然界，很容易獲得酰胺。酰胺是多肽、蛋白的組成部 分。因此，可以預(yù)計(jì)，具有酰胺官能團(tuán)的物質(zhì)可以非常良好地通過(guò)細(xì)胞壁，進(jìn)入細(xì)胞。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，適合本發(fā)明的酰胺為在氮原子上，具有烷基殘基，該殘基由l至8 個(gè)碳原子構(gòu)成，優(yōu)選方式為由l至3個(gè)碳原子構(gòu)成，在羰碳上，具有烷基鏈，這個(gè)烷基鏈由 2個(gè)碳原子構(gòu)成，優(yōu)選方式為由6至26個(gè)碳原子構(gòu)成，這樣，可以提高本發(fā)明所述物質(zhì)通 過(guò)細(xì)胞壁進(jìn)入細(xì)胞的滲透性，降低進(jìn)入細(xì)胞的難度，從而，可以在相應(yīng)的位置上，良好地發(fā) 揮保護(hù)細(xì)胞及組織的作用。如果通過(guò)橋接的方式進(jìn)行連接，那么，&的烷基鏈可以更短，因 為，通過(guò)橋接可以延長(zhǎng)鏈條。碳原子上較長(zhǎng)的烷基鏈也可以采用，但是，結(jié)果顯示，短的烷基 鏈尤為合適，就是說(shuō)，最多包括3個(gè)碳原子?？梢灶A(yù)計(jì)，這可能與芳香環(huán)上的阻礙排列存在 關(guān)聯(lián)性，就是說(shuō)，與碳原子上自由電子對(duì)的電子云存在關(guān)聯(lián)性，電子對(duì)產(chǎn)生了屏蔽效應(yīng)。對(duì) 于與羥碳連接的烷基殘基，上述原理也成立。但是，阻塞的屏蔽效應(yīng)不是很大，因?yàn)?，通過(guò)氮 已經(jīng)影響了屏蔽，這樣，從原理上講，也可以形成較長(zhǎng)的、26個(gè)C原子以內(nèi)的碳鏈。
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在其它優(yōu)選的設(shè)計(jì)方案中，R3通過(guò)一個(gè)官能團(tuán)與Y-C00結(jié)構(gòu)連接，這時(shí)，Y形成芳 香系統(tǒng)與COO官能團(tuán)之間的直接連接，可以是Q至C8烷基殘基，優(yōu)選方式為Q至C3的烷基
官能團(tuán)。&，就是說(shuō)，(:2至(:26長(zhǎng)度的烷基鏈，連接在氧原子上，在該實(shí)施方式內(nèi)，形成聚酯。 針對(duì)這種類型的聚酯，類似于上述的受阻隔離觀點(diǎn)也成立，就是說(shuō)，針對(duì)酰胺闡述
的受阻隔離。聚酯及酰胺具有類似的極性，因此，可以選用或結(jié)合使用這兩種物質(zhì)。與聚酯 相對(duì)，肽鍵有利于在細(xì)胞及組織內(nèi)，產(chǎn)生較高程度的相容性。此外，從化學(xué)的角度分析，聚酯
比肽的穩(wěn)定性低，同時(shí)，酸堿的pH值出現(xiàn)很小的變化時(shí)，會(huì)出現(xiàn)分裂情況，這樣，會(huì)導(dǎo)致本
發(fā)明所述的物質(zhì)喪失部分功能。 在其它的優(yōu)選實(shí)施方式中，R3通過(guò)官能團(tuán)與Y-CH20結(jié)構(gòu)連接，Y形成芳香系統(tǒng)與 CH20官能團(tuán)之間的直接連接，可以是Q至C8的烷基官能團(tuán)，優(yōu)選方式為Q至C3的烷基官能 團(tuán)。R3，即一種烷基鏈，優(yōu)選長(zhǎng)度為，(:2至C26構(gòu)成的長(zhǎng)度，該烷基鏈與氧連接，在該實(shí)施方式 內(nèi)，形成醚官能團(tuán)。 作為可取代分子1 3，具有上述分子式的醚可以被納入視線。針對(duì)醚官能團(tuán)，分子需 要一定程度的親水性，而聚酯和酰胺對(duì)親水性的要求明顯較低。但是，在哺乳動(dòng)物體內(nèi)，很 少有游離狀態(tài)下的醚，與烷基和聚酯相比較，對(duì)該物質(zhì)的接受程度較低。但是，該物質(zhì)可以 明顯提高親脂性，所以，能夠部分地均衡上述的不良效果，因此，在上述的結(jié)構(gòu)中，醚也可以 視為可取代分子R3的可選方案。 在其它的優(yōu)選實(shí)施方案中，兩個(gè)可取代分子I^和R2中的至少一個(gè)可取代分子具 有保護(hù)基。如果需要保護(hù)某個(gè)特定的官能團(tuán)不會(huì)出現(xiàn)早期反應(yīng)，那么，在化學(xué)的意義內(nèi)，采 用官能團(tuán)的保護(hù)基。保護(hù)基脫去后，反應(yīng)性官能團(tuán)被再次釋放，同時(shí)，可以按照需要，進(jìn)行反 應(yīng)。在有機(jī)化學(xué)范疇內(nèi)， 一般來(lái)講，將OH基、SH基、朋2基的保護(hù)基應(yīng)用為上述的保護(hù)基，對(duì) 專業(yè)人員而言，這些保護(hù)基只是基礎(chǔ)物質(zhì)。與基礎(chǔ)專業(yè)知識(shí)相同，這些保護(hù)基必須與官能團(tuán) &和R2充分連接，這樣，在存放過(guò)程中，起到保護(hù)作用，連接的形式必須是在生理化學(xué)環(huán)境 內(nèi)，能夠再次釋放保護(hù)基。 恰當(dāng)?shù)?H保護(hù)基為烷基，優(yōu)選乙?；蜱牾；蛄姿狨セ鶊F(tuán)。針對(duì)殘基&或 R2中一種殘基所需的保護(hù)，通過(guò)恰當(dāng)?shù)乃幔绱姿峄蛄姿?，轉(zhuǎn)換本發(fā)明內(nèi)所述的物質(zhì)?；?者，能夠產(chǎn)生酯，或者，能夠產(chǎn)生酰胺，或者，產(chǎn)生硫酯，按照還原作用的可取代分子，生成物 質(zhì)。這種類型的保護(hù)基很容易再次脫去，一般來(lái)講，在細(xì)胞內(nèi)部條件變化時(shí)，即可脫去，例如 pH值出現(xiàn)變化。通過(guò)保護(hù)基的脫去，再次生成強(qiáng)烈還原的官能團(tuán)即0H、SH或叫，在細(xì)胞內(nèi) 部，這些基團(tuán)保護(hù)細(xì)胞，避免氧化損傷。乙酰保護(hù)基最為適宜。這種保護(hù)基易于生成，在保 護(hù)基脫離時(shí)，進(jìn)行脫去，不產(chǎn)生有害健康的物質(zhì)，費(fèi)用較低。 也可以選用琥珀酰保護(hù)基或磷酸酯保護(hù)基。通過(guò)可取代分子&和/或R2與琥珀 酸或磷酸之間的反應(yīng)，得到上述的保護(hù)基。在一定條件下，如出現(xiàn)在細(xì)胞內(nèi)部時(shí)，琥珀酰保 護(hù)基或磷酸鹽保護(hù)基可以再次脫去，這樣，0H、SH或NH2基團(tuán)會(huì)再次出現(xiàn)還原作用。保護(hù)基 脫去后，可以再次生成琥珀酸或磷酸，琥珀酸或磷酸都無(wú)損于身體，這些物質(zhì)便于沖洗。
無(wú)需聯(lián)系相關(guān)理論，即可確定，這種在環(huán)上具有兩個(gè)可取代分子&和R2的芳香系 統(tǒng)，具有很強(qiáng)的還原作用，可以在0H、SH、NH2中選擇可取代分子，因此，可以避免局部缺血造 成的細(xì)胞或組織上的氧化損傷。 針對(duì)防止損傷，只需要較小的溶劑濃度，就是說(shuō)，物質(zhì)的濃度大約為0. 5至200 ii M，優(yōu)選濃度為1至100 ii M。 為能夠發(fā)揮需要的保護(hù)功能，可以以多種方式，使用本發(fā)明內(nèi)所述的物質(zhì)?？刹捎?所有的使用方式，如腸胃外使用或口服，優(yōu)選方式為腸胃外使用。具有實(shí)質(zhì)性意義的在于， 將該物質(zhì)引導(dǎo)進(jìn)需要保護(hù)的組織或細(xì)胞內(nèi)，這樣，有效物質(zhì)可以充分聚積，達(dá)到保護(hù)所需的 數(shù)量。至少可以通過(guò)將物質(zhì)注射、輸入進(jìn)捐獻(xiàn)者的血管系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)上述目的。
本發(fā)明內(nèi)所述的物質(zhì)特別適用于藥劑注射的形式，將藥劑注入捐獻(xiàn)者體內(nèi)。該藥 劑至少由本發(fā)明所述的物質(zhì)和醫(yī)藥學(xué)認(rèn)可的載體構(gòu)成。該載體的最簡(jiǎn)單類型為水。使用 恰當(dāng)?shù)?、醫(yī)藥學(xué)認(rèn)可的溶劑，如PEG衍生物或類似的物質(zhì)，預(yù)先溶解該物質(zhì)，處理后，將其加 工為溶劑或離散物，或者，將其加工為脂質(zhì)物或膠質(zhì)物。針對(duì)改良加工工作，可以使用生物 學(xué)、生理學(xué)認(rèn)可的表面活性劑。應(yīng)用于醫(yī)藥產(chǎn)品的表面活性劑也較為適宜，例如使用以 "Pluronic"品牌銷售的物質(zhì)。 藥劑適用于向捐獻(xiàn)者體內(nèi)進(jìn)行注射，優(yōu)選方式為，將其應(yīng)用為沖洗溶劑，對(duì)需要移 植的器官進(jìn)行徹底沖洗，這樣，本發(fā)明所述的物質(zhì)可以進(jìn)入器官的所有細(xì)胞。沖洗30分鐘 至2個(gè)小時(shí)，基本可以達(dá)到徹底沖洗的效果。優(yōu)選濃度為，藥劑內(nèi)含有0. 5至20 ii M的物質(zhì)， 這樣本發(fā)明所述的物質(zhì)可以達(dá)到充足的、有效的、可以保護(hù)器官的濃度。
以上闡述了本發(fā)明涉及的物質(zhì)，使用該物質(zhì)可以保護(hù)細(xì)胞、組織和器官。該保護(hù)作 用特別是指，供氧中斷(局部缺血條件下)造成的細(xì)胞/組織的損傷，特別是需要移植的組 織或取出的細(xì)胞的損傷?？梢栽跐舛群艿偷臈l件下，使用本發(fā)明所述的物質(zhì)，該物質(zhì)不會(huì)造 成血?jiǎng)討B(tài)反應(yīng)。該物質(zhì)特性溫和，可以延長(zhǎng)需移植的細(xì)胞或組織的壽命，降低移植出現(xiàn)的組 織損傷，或者，完全避免該損傷，因此，可以大幅度提高移植的成功幾率。
以下進(jìn)一步闡述本發(fā)明的實(shí)施例 按照以下的闡述，合成上述物質(zhì)。在一個(gè)模式系統(tǒng)內(nèi)，量化分析該物質(zhì)對(duì)細(xì)胞低溫 感應(yīng)損傷的作用。對(duì)此，在溫室內(nèi)，培植內(nèi)皮細(xì)胞，例如人的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。使用不同濃 度的測(cè)試物質(zhì)，按照可變的時(shí)間段，溫育上述細(xì)胞，同時(shí)，使用不含測(cè)試物質(zhì)的新鮮介質(zhì)，替 代上述介質(zhì)。然后，溫育細(xì)胞，例如在0攝氏度的條件下，溫育24小時(shí)。溫育時(shí)間結(jié)束后， 按照公認(rèn)的方法，通過(guò)養(yǎng)殖瓶?jī)?nèi)的存活情況，確定游離存在的乳酸，乳酸的濃度是細(xì)胞損傷 的標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)濃度，確定單一連接的效應(yīng)，如果乳酸的游離度達(dá)到50% ，那么，視為出現(xiàn)抑制 作用(EC50)。
實(shí)施例1
N-辛酰多巴胺 在10ml的四氫呋喃內(nèi)，溶解1克N-辛酸，添加O.gO克N-乙基二異丙基胺，攪拌 時(shí)，緩慢添加0. 75克(0. 658ml)氯甲酸乙酯。3小時(shí)后，使用15ml的醋酸乙酯和10ml的 水，進(jìn)行攪拌。分別進(jìn)行有機(jī)反應(yīng)過(guò)程，使用硫酸鎂進(jìn)行干燥。 在氮?dú)獾沫h(huán)境下，將1. 24克鹽酸多巴胺溶解進(jìn)10ml 二甲基甲酰胺。按照化學(xué)計(jì) 量，將乙氧羰基辛酸溶解進(jìn)醋酸乙酯，在靜止的狀態(tài)下，添加溶劑。按照化學(xué)計(jì)量法，計(jì)算 N-乙基二異丙基胺劑量，乙基二異丙基胺添加進(jìn)溶劑后，出現(xiàn)的渾濁消失。靜止后，關(guān)閉燈 光過(guò)夜，向20ml的水性溶劑內(nèi)，添加5%的碳酸氫鈉/1 %的硫酸鈉，分離有機(jī)物。使用10ml 醋酸乙酯萃取溶劑。先后使用10ml的氯化鈉溶液，10ml 0. 5M的硫酸和10ml的氯化鈉溶 液，清洗混合的有機(jī)溶劑。使用硫酸鎂，干燥有機(jī)有機(jī)物，在真空條件下(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器)，分
7離溶劑。獲取1. 74克(96% )非常粘稠的、近于無(wú)色的油狀物。 實(shí)施例2 0-琥珀酰-N-辛酰多巴胺 在氮?dú)獾沫h(huán)境下，將0. 66克N-辛酰多巴胺溶解進(jìn)3ml的四氫呋喃，將236mg的琥 珀酸溶解進(jìn)4ml的四氫呋喃。靜止后過(guò)夜，然后，真空分離溶劑，使用5ml 5%的碳酸氫鈉 和5ml的醋酸乙酯，接收固體殘留物。閑置有機(jī)物，使用10ml的醋酸乙酯處理水狀物，使用 10ml 0. 5M的硫酸，酸化水狀物。使用氯化鈉溶液清洗有機(jī)物，使用硫酸鈉進(jìn)行干燥，真空分 離溶劑。獲取0-琥珀酰-N-辛酰多巴胺原料，通過(guò)結(jié)晶，對(duì)其進(jìn)行凈化處理。
實(shí)施例3
N-癸酰多巴胺 將1. 72克正癸酸溶解進(jìn)10ml的四氫呋喃內(nèi)，添加1. 2克亞硫酰氯。滴入一滴二
甲基甲酰胺，靜止后，加熱回流。5h后，蒸餾溶劑。將0.95克鹽酸多巴胺溶解進(jìn)6ml的二甲
基甲酰胺，按照化學(xué)計(jì)量法，提取癸酰氯，在氮?dú)獾臈l件下，將其緩慢滴入冰池。3小時(shí)后，按
照實(shí)施例1內(nèi)列舉的方式，進(jìn)行處理。 實(shí)施例4 N-硬脂酰多巴胺 將1. 42克琥珀酸溶解進(jìn)10ml的四氫呋喃，添加O. 57克N-羥基丁二酰亞胺和1. 03
克二環(huán)己基碳二亞胺。靜止后過(guò)夜，然后，使用過(guò)濾器，分離藥劑，使用四氫呋喃進(jìn)行清洗，
真空脫離過(guò)濾剩余混合物中的溶劑。按照化學(xué)計(jì)量法，提取鹽酸多巴胺和三乙胺(在二甲
基甲酰胺中溶解)，在氮?dú)獾沫h(huán)境下，硬脂酰多巴胺與鹽酸多巴胺和三乙胺進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)。
靜止后，在無(wú)光的條件下過(guò)夜，加工后，獲取N-硬脂酰多巴胺。 實(shí)施例5 2 ， 5- 二羥基苯甲酰胺辛烷 按照基本方式，使用三氯化磷，在2. 38克的2， 5- 二羥基苯甲酸中，獲取氯化物。針
對(duì)該操作，在20ml的四氫呋喃中，進(jìn)行溶解，然后，在氮?dú)獾沫h(huán)境下，在冰池內(nèi)，在非常靜止
的狀態(tài)下，緩慢添加已計(jì)量的N-辛胺。添加結(jié)束后，清除冰池，在無(wú)燈光的條件下過(guò)夜。真
空分離溶劑，先后使用碳酸氫鈉/硫酸鈉溶劑、水、稀釋的磷酸和氯化鈉溶液，清洗有機(jī)物，
然后使用分子篩進(jìn)行干燥。分離溶劑后，獲取2，5-二羥基苯甲酰胺辛烷，該物質(zhì)為接近白
色的固體。 實(shí)施例6 3， 4- 二羥基苯甲酰胺辛烷 將1. 19克3，4-二羥基苯甲酸溶解進(jìn)10ml的四氫呋喃，在氮?dú)獾沫h(huán)境下，添加 0. 57克N-羥基丁二酰胺、1. 03克二環(huán)己基碳二亞胺和0. 65克辛胺。靜止后，在無(wú)燈光的 環(huán)境下過(guò)夜，然后，過(guò)濾藥劑，使用15ml的醋酸乙酯，稀釋有機(jī)物，使用10ml 5%的碳酸氫 鈉/1%的硫酸鈉，清洗有機(jī)物。有機(jī)物先后與氯化鈉溶液、0. 5M硫酸、氯化鈉溶液混合，晃 動(dòng)后，使用硫酸鈉進(jìn)行干燥，然后，分離溶劑?？色@得1.44克(83%)固體物質(zhì)。
實(shí)施例7 2，5-二乙酸基苯甲酰胺己烷 按照基本方式，使用醋酸鈉，在2，5-二羥基苯甲酸中，獲取2，5-二乙酸基苯甲酸。
8將1. 19克混合物溶解進(jìn)10ml乙醚中，添加0. 68克N-羥基苯并三唑及0. 96克N_ (3- 二甲 基氨基丙基)-N'-乙基碳二亞胺，合成活性酯。靜止過(guò)夜后，分離溶劑，使用10ml乙酸乙酯 和10ml水，接收殘留物。干燥有機(jī)物，添加0.5克己胺。靜止后過(guò)夜，然后，先后使用碳酸 氫鈉溶液、氯化鈉溶液和稀釋的磷酸，進(jìn)行清洗，最后，干燥有機(jī)物。分離溶劑后，獲取1. 3 克(81%)2，5-二乙酸基苯甲酰胺己烷原料。 通過(guò)各自的EC50值，可以顯示本發(fā)明部分物質(zhì)的保護(hù)效果(只對(duì)多巴胺、腎上腺
素、去甲腎上腺素及多巴酚丁胺進(jìn)行比較)
物質(zhì)EC50ii M
多巴胺75
腎上腺素600
去甲腎上腺素700
多巴酚丁胺5
N-辛酰多巴胺2. 1 土 0. 2
N-癸酰多巴胺0. 9 土 0. 2
N-十二酰多巴胺1. 2 土 0. 2
N-十四酰多巴胺1. 3 土 0. 2
N-(4-甲基苯磺酰)多巴胺12 土 1
N-(3-苯丙酰)多巴胺9 土 1
2，3-二羥基苯甲酰胺辛烷1. 2 土 0. 1
3，4-二羥基苯甲酰胺辛烷2. 4 土 0. 2
2，5-二羥基苯甲酰胺辛烷6 土 1 實(shí)施例8 將0. 5克的N-辛酰多巴胺與9. 5克的60% (v/v) 1. 2_丙二醇及40% (v/v)水溶 合并攪拌。然后，產(chǎn)生透明的、穩(wěn)定的溶劑，按照公認(rèn)的醫(yī)藥規(guī)范消毒后，適用于哺乳動(dòng)物的 腸胃外使用。
權(quán)利要求
細(xì)胞及組織的保護(hù)物質(zhì)，其特征在于，該物質(zhì)至少具有一個(gè)式(1)所示的芳香環(huán)，該環(huán)具有兩個(gè)可選自O(shè)H、SH、NH2構(gòu)成的組中的可取代分子R1、R2，R1和R2相互呈鄰位或?qū)ξ?，該環(huán)還具有一個(gè)其它的可取代分子R3，該分子的log P至少達(dá)到2.5，式(1)。FPA00001010737700011.tif
2. 按照權(quán)利要求1所述的物質(zhì)，其特征在于，芳香系統(tǒng)具有1至3個(gè)環(huán)，這些環(huán)可以稠合。
3. 按照權(quán)利要求1所述的物質(zhì)，其特征在于，芳香系統(tǒng)具有芳香環(huán)，芳香環(huán)具有5、6或7個(gè)碳原子。
4. 按照權(quán)利要求1至3所述的物質(zhì)，其特征在于，R3是取代或未取代的烷基殘基，烷基殘基的鏈長(zhǎng)為C6至C26，優(yōu)選長(zhǎng)度為C8至C18。
5. 按照權(quán)利要求1至4所述的物質(zhì)，其特征在于，通過(guò)Y-CH20-、Y-C00-或Y-NHC (0)連接R3， Y是一個(gè)直接鍵或一個(gè)Q至C8基團(tuán)，優(yōu)選方式為Q至C3烷基基團(tuán)。
6. 按照上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的物質(zhì)，其特征在于，至少兩個(gè)可取代分子中的一個(gè)可取代分子&或R2帶有保護(hù)基。
7. 按照權(quán)利要求6所述的物質(zhì)，其特征在于，所示保護(hù)基是烷基基團(tuán)，優(yōu)選乙?；鶊F(tuán)、磷酸酯基團(tuán)或琥珀?；鶊F(tuán)。
8. 含有按照權(quán)利要求1至7所述的物質(zhì)的藥劑，該物質(zhì)的含量滿足對(duì)效果的要求，其使用生理相容的載體溶解該藥劑，該載體是指基于水或有機(jī)溶劑的載體，必要時(shí)，采用表面活性劑。
9. 按照權(quán)利要求8所述的藥劑，其特征在于，所述載體可以是水，必要時(shí)，使用溶劑預(yù)先溶解所述物質(zhì)。
10. 按照權(quán)利要求8或9所述的藥劑，其特征在于，所述藥劑內(nèi)所述物質(zhì)的含量為0. 5至200iiM。
11. 按照權(quán)利要求8至10所述的藥劑，其特征在于，所述藥劑屬于可注射類型的藥劑。
12. 按照權(quán)利要求8至11所述的藥劑，其特征在于，所述藥劑屬于可輸入類型的藥劑，在生成時(shí)，所述物質(zhì)為膠狀或脂狀。
13. 按照權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的材料在制造保護(hù)器官的注射劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及適于保護(hù)細(xì)胞和/或組織的物質(zhì)。
文檔編號(hào)A01N1/02GK101765367SQ200880101022
公開日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2008年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月30日
發(fā)明者B·亞德, G·貝克, R·洛塞 申請(qǐng)人:R·洛塞;B·亞德;G·貝克