專利名稱：常規(guī)農(nóng)藥快速殘留檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種常規(guī)農(nóng)藥快速殘留檢測技術(shù)。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種常規(guī)農(nóng)藥快速殘留檢測方法，其特征在于以小白鼠肝臟乙酰膽堿脂本酶作為酶源，以乙酰代膽堿為底物，底物在乙酰代膽堿脂酶的作用下，水解生成硫代膽堿與二硫雙對硝基苯甲酸(DTNB)，起顯色反應在412nm處有最大吸收峰，通過固定酶作用濃度比較不同濃度殺蟲劑作用的OD412值，制定標準曲線，將待測樣品經(jīng)過浸漬萃取后測得OD412值，根據(jù)待測樣品的OD412值，判定待測物中農(nóng)藥殘留濃度及抑制率。
本發(fā)明與臺灣農(nóng)試所的鄭允等方法的區(qū)別在于本發(fā)明的酶取之小白鼠的肝臟，所含有的酶與人體農(nóng)藥靶標酶的構(gòu)成相似，而鄭允等方法用酶為采用家蠅頭部的乙酰膽堿酯酶；本發(fā)明用丙酮液浸漬萃取后，通過活性炭濾去色素干擾，同時，丙酮液對藥劑的抽提效果好，藥劑的回收率高；本發(fā)明采用加氧化劑和不加氧化劑雙重處理，而鄭允等方法僅采用加溴水氧化的處理，這種方法對硫逐磷酸脂殺蟲劑的降解有促進作用，同時，本發(fā)明的顯色劑在底物反應結(jié)束后加入，不用考慮顯色劑對反應過程的影響，無需使用反應終止劑。本發(fā)明與快速測磷法的比較
各農(nóng)藥(未氧化)對乙酰膽堿脂酶的抑制率及檢測下限
各農(nóng)藥(1％溴水氧化)對乙酰膽堿脂酶的抑制率及檢測下限
各農(nóng)藥未氧化和1％溴水氧化分別對乙酰膽堿脂酶的抑制中濃度
本發(fā)明的優(yōu)點在于可以快速測定有機磷及氨基甲酸脂類農(nóng)藥在樣品中的殘留量，本發(fā)明中使用的有機溶劑對測試結(jié)果的影響小于5％。
圖2是三唑磷抑制率——濃度標準曲線。
3、溫浴后每孔加入50ulDTNB顯色劑。
4、在酶標儀上測定412nm下的吸光值(OD值)。
5、以抑制率公式計算系列濃度(25.02％、49.45％、74.21％、91.83％)下的各農(nóng)藥抑制率標準曲線。
實施例2三唑磷抑制率——濃度標準曲線的制法。
1、取96孔微孔板2、孔中用加液器加50ul酶稀釋液(30倍)和50ul三唑磷系列稀釋液(對照組加PB液)及50ul底物于37℃-38℃下溫浴15分鐘左右，空白列僅加50ul PB液和50ul底物。
3、溫浴后每孔加入50ulDTNB顯色劑。
4、在酶標儀上測定412nm下的吸光值(OD值)。
5、以抑制率公式計算系列濃度(11.15％、31.43％、55.22％、79.72％)下的各農(nóng)藥抑制率標準曲線。
實施例3葉類樣品的快速檢測方法。
1、取樣從葉菜10-15片樣品中取2克為測定樣品。
2、以3ml丙酮及50ml溴水(1％)進行萃取3分鐘，在20ml注射器中過2cm高的活性碳柱，并靜置2分鐘。
3、于96孔微孔板中加入50ul乙酰膽堿脂酶和50ul底物ATCI(設空白對照)，37℃-38℃下溫浴15分鐘。
4、溫浴后每孔加入50ul萃取液及50ul顯色劑DTNB，于酶標儀上測定412nm下的吸光值(OD值)。
5、計算其抑制率，并與標準曲線比較判定葉類樣品中農(nóng)藥殘留濃度及抑制率。
實施例4根莖和瓜果類樣品的快速檢測方法。
1、取樣根莖和瓜果類以1.5cm厚左右外層20-25克樣中，取2克為測定樣品。
2、以3ml丙酮及50ml溴水(1％)進行萃取3分鐘，在20ml注射器中過2cm高的活性碳柱，并靜置2分鐘。
3、于96孔微孔板中加入50ul萃取液及50ul乙酰膽堿脂酶和50ul底物ATCI(設空白對照)，37℃-38℃下溫浴15分鐘。
4、溫浴后每孔加入50ul顯色劑DTNB，于酶標儀上測定412nm下的吸光值(OD值)。
5、計算其抑制率，并與標準曲線比較判定根莖和瓜果類樣品中農(nóng)藥殘留濃度及抑制率。
在實際檢測中，通常硫逐磷酸酯有機磷農(nóng)藥需加氧化劑氧化，則效果明顯，其他有機磷農(nóng)藥，也可以不加氧化劑氧化處理。
權(quán)利要求
1.一種常規(guī)農(nóng)藥快速殘留檢測方法，其特征在于以小白鼠肝臟乙酰膽堿酯酶作為酶源，以乙酰代膽堿為底物，底物在乙酰代膽堿酯酶的作用下，水解生成硫代膽堿與二硫雙對硝基苯甲酸(DTNB)，起顯色反應在412nm處有最大吸收峰，通過固定酶作用濃度比較不同濃度殺蟲劑作用的OD412值，制定標準曲線，將待測樣品經(jīng)過浸漬萃取后測得OD412值，根據(jù)待測樣品的OD412值，判定待測物中農(nóng)藥殘留濃度及抑制率。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種常規(guī)農(nóng)藥快速殘留檢測方法，其特征在于萃取后的樣品提取液采用加氧化劑處理和不加氧化劑的雙重處理。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種常規(guī)農(nóng)藥快速殘留檢測方法，其特征在于以小白鼠肝臟乙酰膽堿酯酶作為酶源，以乙酰代膽堿為底物，底物在乙酰代膽堿酯酶的作用下，水解生成硫代膽堿與二硫雙對硝基苯甲酸(DTNB)，起顯色反應在412nm處有最大吸收峰，通過固定酶作用濃度比較不同濃度殺蟲劑作用的OD
文檔編號G01N21/25GK1414371SQ0214853
公開日2003年4月30日 申請日期2002年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月13日
發(fā)明者劉賢金, 廖海豐, 張存政, 王冬蘭 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所