專利名稱：一種用于診斷早期卵巢癌的四粘蛋白酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的制作方法
本本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)檢測領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種用于診斷早期卵巢癌的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，即本發(fā)明提供了一種卵巢癌蛋白標(biāo)志物四粘蛋白(即Tetranectin，簡稱TN)檢測試劑盒，可用于卵巢腫瘤的良、惡性診斷，特別是早期卵巢癌的檢測，以及粘液性卵巢上皮癌的檢測；也可用于卵巢癌術(shù)后化療效果的監(jiān)測及預(yù)后評估。
卵巢癌在全世界范圍一直是婦科腫瘤中治愈率最低、死亡率最高的惡性腫瘤。目前卵巢癌在我國婦科癌癥中的發(fā)病率已由八十年代占第三位而上升為第一位。約有80％以上的卵巢癌初診患者到晚期(III期或IV期)，即使立刻手術(shù)，術(shù)后五年生存率也僅僅不到15％，卵巢癌手術(shù)預(yù)后的不良結(jié)局近五十年以來幾乎沒有改善。由于卵巢癌的發(fā)病機理至今仍不請楚，因此很難采取有效的預(yù)防措施。為了降低卵巢癌的危害，關(guān)鍵仍在早期發(fā)現(xiàn)、早期治療。雖然基礎(chǔ)和臨床研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些卵巢癌的腫瘤標(biāo)志物，如糖鏈抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)、組織多肽抗原(TPA)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSA)和抑制素等，但真正提供給臨床使用的并不多。近年來即使在有條件的醫(yī)院里仍然多以CA125單項指標(biāo)作為卵巢癌診斷、術(shù)后化療監(jiān)測及預(yù)后評估的參考依據(jù)。由于CA125也用于其他惡性腫瘤的檢測，因此對卵巢癌并不是特異性指標(biāo)。而且CA125只在漿液性卵巢癌患者血清中有升高，對非漿液性卵巢癌、尤其是粘液性卵巢癌則沒有反應(yīng)。CA125對早期卵巢癌也不敏感。CA125作為檢測卵巢癌的唯一指標(biāo)顯然是不能滿足臨床需要的。本發(fā)明的目的正是為了解決目前臨床上使用單項CA125作為卵巢癌診斷指標(biāo)的不足，將TN作為一種新的蛋白標(biāo)志物用于卵巢癌的早期診斷和粘液性卵巢上皮癌的診斷，并且提供了操作簡便、準(zhǔn)確靈敏的檢測試劑盒和測定方法，從而可以提高卵巢癌的撿出率，以便臨床上能盡早采取有效的綜合治療方案，達(dá)到提高存活率、降低死亡率的目的。
因此，本發(fā)明的目的是提供了一種用于診斷早期卵巢癌的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。
本發(fā)明的上述目的是通過下列技術(shù)方案實施的一種卵巢癌蛋白標(biāo)志物四粘蛋白(即Tetranectin，簡稱TN)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于它由TN標(biāo)準(zhǔn)品、多克隆抗體包被板、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記多克隆抗體、質(zhì)控品和輔助試劑組成。
本發(fā)明試劑盒的制作方法包括標(biāo)準(zhǔn)品的制備、多克隆抗體包被板的制作、酶標(biāo)多克隆抗體的制備、質(zhì)控品的制備以及輔助試劑的配制。
本發(fā)明試劑盒中的TN標(biāo)準(zhǔn)品是從人血漿中提取制備的。一種制備步驟包括收集正常血漿(經(jīng)HIV、肝炎病毒、梅毒、AIDS等測定均為陰性者)，低溫貯存?zhèn)溆?；上述血漿經(jīng)飽和硫酸銨沉淀、離子交換層析和親和層析三個步驟進(jìn)行TN的分離純化，后兩步層析的順序可以變換，本發(fā)明試劑盒使用的一種TN純化順序依次為飽和硫酸銨沉淀、離子交換層析和親和層析；將獲得的TN純品按試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點濃度進(jìn)行稀釋，然后進(jìn)行分裝、冷凍干燥，即獲得TN標(biāo)準(zhǔn)品。
本發(fā)明試劑盒中的多克隆抗體包被板可用TN純品對兔或鼠免疫而獲得的多克隆抗體包被酶標(biāo)板而制作。本發(fā)明試劑盒中的多克隆抗體包被板是用TN純品對小鼠免疫而獲得的鼠抗人多克隆抗體包被酶標(biāo)板而制作的。酶標(biāo)板可選用國產(chǎn)板或進(jìn)口板；規(guī)格可以是96孔平板或12×8、6×8可拆條板。本發(fā)明試劑盒采用一種進(jìn)口酶標(biāo)板(Costar公司產(chǎn)品)。一種多克隆抗體包被酶標(biāo)板的制作步驟如下a)制備多克隆抗體用TN純品按常規(guī)對Balb/c小鼠進(jìn)行免疫后，再在腹腔內(nèi)注射小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0；收集腹水經(jīng)重組Protein G預(yù)裝層析柱純化后即獲得TN多克隆抗體；b)包被將上述多克隆抗體用0.05M碳酸鹽緩沖液稀釋后加入酶標(biāo)板各孔，每孔100ul，吸附過夜，用吐溫磷酸鹽緩沖液洗板，再用吐溫磷酸鹽緩沖液封閉過夜，甩干后晾干，即獲得多克隆抗體包被酶標(biāo)板。
本發(fā)明試劑盒中的酶標(biāo)多克隆抗體是用辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記TN多克隆抗體而制備的。一種酶標(biāo)多克隆抗體的制備步驟如下a)在純化好的TN抗體溶液中加入SATA溶液，在室溫反應(yīng)0.5小時；b)加入去乙酰化溶液，室溫孵育2小時；c)用脫鹽柱分離出去乙?；疭ATA衍生物(即多抗)和副產(chǎn)品(鹽酸羥胺)；d)將上述多抗溶液與用馬來酰胺(Maleimide)活化的HRP在室溫反應(yīng)1小時，即獲得HRP酶標(biāo)多克隆抗體。
本發(fā)明試劑盒中的質(zhì)控品是用混合人血清，按照本試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍要求進(jìn)行稀釋而調(diào)配制備的。本發(fā)明試劑盒采用的一種質(zhì)控品制備方法包括如下步驟a)收集正常人血清(經(jīng)HIV、肝類病毒、AIDS、梅毒等測定均為陰性者)，于-20℃保存；
b)將積累的各個血清混合，用ELISA方法測定TN濃度，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線要求，將兩份混合血清的濃度分別調(diào)至10±2ng/ml、50±10ng/ml范圍；c)將步驟b)所獲得的兩份血清按每個試劑盒的需要量分裝，冷凍干燥，即制備成低、高值質(zhì)控品。
本發(fā)明試劑盒中的輔助試劑包括酶聯(lián)反應(yīng)底物溶液，顯色液，反應(yīng)終止液和清洗緩沖液。一種配制輔助試劑的方法如下a)底物溶液磷酸-檸檬酸緩沖液(pH5.0)配制的3％過氧化氫溶液；b)顯色液四甲基聯(lián)苯胺(TMB)甲醇溶液，濃度為0.1mg/ml；c)反應(yīng)終止液2M硫酸d)清洗緩沖液(20倍濃縮液，20X)PBS(pH7.4)配制的0.05％吐溫20溶液。
本發(fā)明試劑盒的測定方法，其特征在于它依次按下述步驟進(jìn)行a)抗原-抗體反應(yīng)在試劑盒提供的抗體包被板的微孔中分別加入100μl已稀釋好的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品，或待測血清樣品，37℃水浴保溫60分鐘；然后用清洗緩沖液(1X)重復(fù)洗板4次。
b)酶聯(lián)反應(yīng)將HRP-多克隆抗體溶液加入各孔，每孔100μl，37℃水浴保溫60分鐘。重復(fù)洗板操作4次。
c)顯色反應(yīng)每孔依次加入底物溶液、顯色液各50μl，37℃水浴保溫10分鐘，每孔再加入50μl反應(yīng)終止液結(jié)束反應(yīng)。
d)比色以空白對照孔的吸光值調(diào)零，用酶標(biāo)儀在450nm測定OD值并記錄。
e)結(jié)果計算A.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品測定的OD值為縱坐標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線；計算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸系數(shù)R2，當(dāng)R2＞0.98時本次測定有效；B.評判質(zhì)控品濃度根據(jù)質(zhì)控品的OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取相應(yīng)的濃度值；當(dāng)?shù)椭蒂|(zhì)控品、高值質(zhì)控品的濃度均在給定范圍內(nèi)時，本次測定判為有效；C.計算待測血清樣品濃度當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控品均被判定有效時，根據(jù)待測樣本的OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測血清樣品的TN濃度。
與已有的卵巢癌檢測指標(biāo)CA125相比較，本發(fā)明試劑盒具有以下優(yōu)點a)本發(fā)明試劑盒以TN作為早期卵巢癌的診斷指標(biāo)，克服了CA125對早期卵巢癌的不敏感性，在I期卵巢癌患者中僅有50％患者的血清CA125水平異常升高；而TN在I期～I(xiàn)V期卵巢癌患者中都呈現(xiàn)異常下降。
b)CA125對漿液性卵巢上皮癌的陽性撿出率可達(dá)80％以上，然而對粘液性卵巢上皮癌沒有反應(yīng)；本發(fā)明試劑盒克服了單項CA125檢測卵巢癌存在較高假陰性的不足，TN不但可以撿出漿液性卵巢上皮癌，而且對粘液性卵巢上皮癌同樣有效。TN單獨使用或與CA125聯(lián)合使用，能夠有效地提高早期卵巢癌的撿出率，尤其可提高粘液性卵巢上皮癌的撿出率。
下面用實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)對本發(fā)明進(jìn)行的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。除非另有說明，本發(fā)明中的百分?jǐn)?shù)是重量百分?jǐn)?shù)。
實施例一TN定量酶免檢測試劑盒制作方法的應(yīng)用實例一種卵巢癌蛋白標(biāo)志物四粘蛋白定量酶免檢測試劑盒(48人份)，其組成包括TN凍干標(biāo)準(zhǔn)品1瓶；TN多克隆抗體包被板(48孔)1塊；辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的TN多克隆抗體1瓶，6ml/瓶；凍干低值質(zhì)控品1瓶；凍干高值質(zhì)控品1瓶；底物溶液1瓶，3ml/瓶；顯色液(TMB)1瓶，3ml/瓶；反應(yīng)終止液1瓶，3ml/瓶；清洗緩沖液(20X濃縮)1瓶，15ml/瓶。
具體操作如下1.制備TN標(biāo)準(zhǔn)品1)收集血漿從醫(yī)院或血站獲得健康正常人血漿，于-70℃保存?zhèn)溆茫?)分離純化使用AKTA蛋白純化儀(Pharmacia公司產(chǎn)品，型號Purifier 100)從上述血漿中分離純化TN。選用的操作步驟依次為a)飽和硫酸銨沉淀在血漿中加等量PBS溶液后先按比例加入固體硫酸銨至50％飽和度，再將pH調(diào)至5.8，離心收集此時的蛋白沉淀；b)DEAE離子交換層析，緩沖液為0.02M Tris-HCl，pH7.2，1M NaCl，流速3ml/min；c)Lysine親和層析，緩沖液為0.02M Tris-HCl，pH7.2，1M NaCl，流速1.0ml/min。層析過程中用UNICRN V400軟件控制緩沖液的濃度梯度及蛋白峰的紫外吸收監(jiān)測。每一步層析所獲蛋白峰的活性檢測采用ELISA法。最后將NaCl濃度為20％時的活性蛋白洗脫峰合并，裝透析袋透析除鹽后濃縮，分裝后貯存于-70℃待鑒定。
3)TN純品按試劑盒說明書中標(biāo)準(zhǔn)曲線第一點所需要濃度分裝(75ng/ml)、冷凍干燥、貯存于4℃。
2.制作TN多克隆抗體包被板1)TN多克隆抗體制備a)小鼠免疫選用體重為20-22g的Balb/c雄性小鼠10只(購自北京實驗動物中心)，每只用含50μg TN純品的生理鹽水與2倍體積的弗氏完全佐劑制成0.5ml乳劑，注射于小鼠腹腔內(nèi)。兩周后用含50μg TN純品的生理鹽水與2倍體積的弗氏不完全佐劑制成0.5ml乳劑作加強注射；再過2周重復(fù)加強注射一次。重復(fù)加強注射后的次日，每只小鼠腹腔內(nèi)注射小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0 2×106/0.5ml。一周后小鼠產(chǎn)生腹水；b)腹水收集用9號針頭從小鼠腹腔腹水收集。數(shù)日內(nèi)連續(xù)收集腹水2-3次，直至小鼠死亡。將所有收集的腹水合并后，分裝成15ml/支存于-20℃?zhèn)溆谩?br> c)腹水純化小鼠腹水經(jīng)重組Protein G親和層析柱(Parmacia公司)純化后獲得鼠抗人多克隆抗體。親和層析時緩沖液為0.02M磷酸緩沖液，pH7.0；洗脫液為0.1M甘氨酸-鹽酸緩沖液，pH 2.7。
2)包被酶標(biāo)板采用Costar公司生產(chǎn)的6×8可拆條板。將步驟1)所獲多克隆抗體用0.05M碳酸鹽緩沖液稀釋為20μg/ml后加入酶標(biāo)板各孔，每孔100ul，吸附過夜，用清洗緩沖液洗板，再用該緩沖液封閉過夜，甩干后晾干，即獲得多克隆抗體包被酶標(biāo)板。按48孔/塊用錫箔紙包裝、真空封閉。
3.制備辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的TN多克隆抗體1)在一支5mg/ml純化好的TN多抗隆抗體溶液中加入稀釋好的SATA(N-羥基琥珀酰亞胺-S-乙酰硫代乙酯)溶液20μl，室溫孵育30分鐘；2)加入100μl去乙?；芤?即用馬來酰胺醋酸緩沖液溶解的鹽酸羥胺溶液)，室溫孵育2小時；3)用脫鹽柱分離去乙?；疭ATA衍生物(即多抗)和鹽酸羥胺；4)將上述多抗溶液2ml與5mg用馬來酰胺活化的HRP在室溫反應(yīng)1小時，即獲得HRP酶標(biāo)記多克隆抗體。
5)純化HRP酶標(biāo)多克隆抗體用聚丙烯酰胺預(yù)裝柱去除游離的HRP，獲得克分子比接近1∶8的酶標(biāo)TN多克隆抗體。
6)組裝用含10％胎牛血清的緩沖液稀釋由步驟5)獲得的酶標(biāo)TN多克隆抗體至合適的工作濃度，按6ml/瓶分裝，貯存于4℃。
4.制備質(zhì)控品收集健康正常人血清(經(jīng)HIV、肝類病毒、AIDS、梅毒等測定均為陰性者)，于-20℃保存。將積累的各個血清混合，用ELISA方法測定TN濃度，并用含3％BSA的PBS緩沖液將兩份混合血清的濃度調(diào)至10±2ng/ml、50±10ng/Lml范圍，制備成低、高質(zhì)控品。按每個試劑盒的需要量分裝，冷凍干燥后貯存于4℃。每個試劑盒中含低濃度質(zhì)控品和高濃度質(zhì)控品各一瓶。
5.配制底物溶液磷酸-檸檬酸緩沖液(pH5.0)配制的3％過氧化氫溶液，按3ml/瓶分裝。
6.配制顯色液TMB(0.1mg/ml)甲醇溶液，按3ml/瓶分裝。
7.配制反應(yīng)終止液2M H2SO4，按3ml/瓶分裝。
8.配制清洗緩沖液(20倍濃縮液)PBS(pH7.4)配制的1％吐溫20溶液，按15ml/瓶分裝。
應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)制備TN定量酶免檢測試劑盒的質(zhì)量檢測1)準(zhǔn)確性取三份待測樣品混合后分為三份混合血清標(biāo)本，每份1ml。分別加入0、20、100ng的TN純品，制成回收試驗血清標(biāo)本#1、#2、#3。按說明書操作步驟進(jìn)行測定并計算結(jié)果。然后按回收率計算公式計算回收率。標(biāo)本#2、#3的回收率分別為96.4％和98.7％，平均回收率為97.5％，即試劑盒的比例偏差為2.5％，準(zhǔn)確性為97.5％。
2)精密度隨機抽取20盒不同批次試劑盒，用同一份待測樣本按說明書操作步驟進(jìn)行重復(fù)測定。計算每次測定結(jié)果，求出均值、SD和變異系數(shù)CV。精密度試驗結(jié)果顯示批間CV≤15％3)線性范圍用TN純品稀釋成一系列不同濃度的純品溶液300ng、150ng、75ng、37.5ng、18.8ng、9.5ng、4.8ng、2.4ng、1.2ng。按照說明書操作步驟進(jìn)行測定。以濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制曲線。線性范圍內(nèi)最高檢測上限值為150ng/ml，最低檢測下限值為2.4ng/ml。試劑盒的線性范圍為2.4～75ng/ml。
4)檢測靈敏度根據(jù)上述線性范圍測定結(jié)果，本試劑盒的檢測靈敏度為2.4ng/ml。
5)特異性取四份待測樣品混合后分為四份混合血清標(biāo)本，每份1ml。分別加入50ng劑量的組織型纖溶酶原激活劑(tPA)、血纖維蛋白溶酶(Plasmin)、或纖粘連蛋白(FN)后制成干擾試驗血清標(biāo)本#1、#2、#3，未加任何干擾物的#4混合血清標(biāo)本作為基礎(chǔ)樣品。按說明書操作步驟進(jìn)行測定并計算結(jié)果。然后按干擾試驗計算公式計算干擾率。標(biāo)本#1、#2、#3的干擾誤差均小于1.5％。
實施例二TN定量酶免檢測試劑盒的使用實例1.清洗緩沖液配制將試劑盒提供的濃縮清洗緩沖液加蒸餾水20倍稀釋。
2.將試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品第一點凍干粉(濃度75ng/ml)用500μl清洗緩沖液溶解，然后進(jìn)行倍比稀釋5次。試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)曲線由6個不同濃度的TN標(biāo)準(zhǔn)品組成，標(biāo)準(zhǔn)曲線各點濃度分別為75ng/ml、37.5ng/ml、18.8ng/ml、9.5ng/ml、4.8ng/ml、2.4ng/ml。
3.質(zhì)控品的稀釋將試劑盒提供的低、高質(zhì)控品凍干粉分別用110μl清洗緩沖液溶解。
4.抗原-抗體反應(yīng)在試劑盒提供的抗體包被板的微孔中分別加入100μl已稀釋好的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品，或待測血清樣品，37℃水浴保溫60分鐘。然后用清洗緩沖液重復(fù)洗板4次，每次3min。
5.酶聯(lián)反應(yīng)將HRP-多克隆抗體溶液加入各孔，每孔100μl，37℃水浴保溫60分鐘。重復(fù)洗板操作4次，每次3min。
6.顯色反應(yīng)每孔依次加入底物溶液、TMB顯色液各50μl，37℃水浴保溫10分鐘，每孔再加入50μl反應(yīng)終止液結(jié)束反應(yīng)。
7.比色以空白對照孔的吸光值調(diào)零，用酶標(biāo)儀在450nm測定OD平均值；記錄各孔吸光值；計算雙孔標(biāo)準(zhǔn)品OD值的平均值。
8.結(jié)果計算1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)品測定的平均OD值為縱坐標(biāo)，繪制本次測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線；計算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸系數(shù)R2，當(dāng)R2＞0.98時本次實驗有效。
2)質(zhì)控品濃度的評判根據(jù)質(zhì)控品的OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取相應(yīng)的質(zhì)控品濃度值。當(dāng)?shù)椭蒂|(zhì)控品濃度在10±2ng/ml、高值質(zhì)控品濃度在50±10ng/ml范圍內(nèi)時，本次測定判為有效；3)計算待測血清樣品濃度當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控品均被判定有效時，根據(jù)待測樣本的OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測血清樣品中的TN濃度。
權(quán)利要求
1.一種用于診斷早期卵巢癌的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于它由一種卵巢癌蛋白標(biāo)志物四粘蛋白標(biāo)準(zhǔn)品、多克隆抗體包被板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的四粘蛋白多克隆抗體、質(zhì)控品和輔助試劑組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其中所述四粘蛋白標(biāo)準(zhǔn)品是用人血漿經(jīng)飽和硫酸銨沉淀、離子交換層析、賴氨酸親和層析分離純化而獲得的四粘蛋白純品制備的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的試劑盒，其中所述多克隆抗體包被板是用四粘蛋白純品免疫動物而獲得的四粘蛋白多克隆抗體包被酶標(biāo)板而制作的。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的試劑盒，其中所述四粘蛋白多克隆抗體是從四粘蛋白純品免疫小鼠而獲得的腹水中純化而得到的。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的試劑盒，其中所述多克隆抗體包被板的制作是將四粘蛋白多克隆抗體用碳酸鹽緩沖液稀釋后滴入酶標(biāo)板各孔內(nèi)，經(jīng)吸附、洗板、封閉、吹干等步驟處理后而制作的。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的試劑盒，其中所述辣根過氧化物酶標(biāo)記的四粘蛋白多克隆抗體是用TN多克隆抗體，經(jīng)辣根過氧化物酶標(biāo)記而制備的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6之一的試劑盒，其中所述質(zhì)控品是用混合人血清經(jīng)稀釋調(diào)配而獲得的。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的試劑盒，其中所述輔助試劑包括酶聯(lián)反應(yīng)底物溶液、顯色液、反應(yīng)終止液及清洗緩沖液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8之一的試劑盒用于檢測和/或診斷早期卵巢癌的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于診斷早期卵巢癌的四粘蛋白酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，該試劑盒使用了卵巢癌蛋白標(biāo)志物四粘蛋白，本發(fā)明試劑盒由標(biāo)準(zhǔn)品、多克隆抗體包被板、酶標(biāo)單克隆抗體、質(zhì)控品和輔助試劑組成，本發(fā)明還涉及試劑盒的制作及檢測方法。本發(fā)明試劑盒可用于卵巢腫瘤的良、惡性的診斷，特別是早期卵巢癌的檢測以及粘液性卵巢癌的檢測，也可用于卵巢癌術(shù)后化療的監(jiān)測及預(yù)后評估。
文檔編號G01N33/573GK1553190SQ03136488
公開日2004年12月8日 申請日期2003年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月5日
發(fā)明者馬旭, 吳爾若, 馬 旭 申請人:馬旭, 馬 旭