專利名稱：電泳用緩沖液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可以迅速地、并以高分離能力對高分子化合物進(jìn)行分離的電泳用緩沖液和電泳法。
背景技術(shù)：
已有的電泳用緩沖液，在對限定尺寸的分離能力方面具有優(yōu)異性能，但由于使用了粘度高的聚合物(甲基纖維素、羥基纖維素、聚丙烯酰胺等)，所以存在有1)向微通道中注入緩沖液時(shí)耗費(fèi)時(shí)間，2)隨著通道寬度變窄，注入變得困難，3)需要按照DNA尺寸不同，變化聚合物的濃度，對寬范圍DNA尺寸進(jìn)行分離時(shí)，分離度有限制，4)緩沖液的粘度對溫度敏感等缺點(diǎn)。因此希望有一種不存在上述1)～4)的問題，還能夠迅速地、并且以高分離能力對高分子化合物進(jìn)行分離的電泳用緩沖液。同時(shí)還希望有一種能夠迅速地、并以高分離能力對高分子化合物進(jìn)行分離的電泳法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明以提供能夠迅速地、并以高分離能力對高分子化合物進(jìn)行分離的電泳用緩沖液和電泳法作為目的。
也就是本發(fā)明的要點(diǎn)是涉及[1]電泳用緩沖液，含有把通式(1)HPLS-HPBS-PLZA (1)(式中，HPLS表示親水性聚合物鏈段，HPBS表示疏水性聚合物鏈段，PLZA表示具有烯屬不飽和雙鍵的聚合性基團(tuán))，所示的嵌段共聚物分散在水性介質(zhì)中，接著使其聚合形成的聚合高分子膠束，[2]電泳法，其特征是在前述[1]中所述的電泳用緩沖液的存在下，使含有高分子化合物的試樣泳移，[3]毛細(xì)管電泳法，它包括(a)用1～30kV、1～60秒的電注入或0.2～5kPa、2～60秒的加壓注入，把含有高分子化合物的試樣注入到毛細(xì)管中，在可以對高分子化合物進(jìn)行分離的泳移電場下，使該試樣移動(dòng)的工序，和
(b)用0.2～10kPa、2～60秒進(jìn)行加壓后，通過泳移電場使該高分子化合物泳移的工序，[4]微型片型電泳法，它包括，在具備加料通道(channel)和與該加料通道交叉的分離用通道，并且在該加料通道的一端配置試樣儲(chǔ)存器，在該加料通道的另一端配置出口的微型片中(a)把含有高分子化合物的試樣供給該試樣儲(chǔ)存器的工序，(b)用5.5～7kPa對該加料通道加壓0.1～5秒，使試樣儲(chǔ)存器中的該高分子化合物向加料通道和分離用通道的交叉部位泳移的工序，和(c)用1～10kPa對分離用通道加壓0.1～5秒，接著通過泳移電場使該高分子化合物在分離用通道內(nèi)泳移的工序。
附圖的簡單說明附圖中所用符號的意義如下所示。
1 100bp的DNA峰2 200bp的DNA峰3 300bp的DNA峰4 400bp的DNA峰5 500bp的DNA峰6 600bp的DNA峰7 700bp的DNA峰8 800bp的DNA峰9 900bp的DNA峰10 1kbp的DNA峰11 1.1kbp的DNA峰12 1.2kbp的DNA峰13 1.3kbp的DNA峰14 1.4kbp的DNA峰15 1.5kbp的DNA峰

圖1是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖2是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖3是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖4是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖5是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖6是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖7是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖8是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖9是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖10是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖11是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖12是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖13是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖14是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖15是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖16是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖17是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖18是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖19是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖20是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖21是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖22是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖23是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示圖24是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖25是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
圖26是表示微型片型電泳中，對泳移條件進(jìn)行研究的結(jié)果的圖示。
實(shí)施發(fā)明的最佳方案本發(fā)明電泳用緩沖液的一大特征是含有把通式(1)HPLS-HPBS-PLZA(1)(式中，HPLS表示親水性聚合物鏈段，HPBS表示疏水性聚合物鏈段，PLZA表示具有烯屬不飽和雙鍵的聚合性基團(tuán))，所示的嵌段共聚物分散在水性介質(zhì)中，接著使其聚合形成的聚合高分子膠束。
本發(fā)明的電泳用緩沖液，與以往毛細(xì)管電泳或微型片型電泳中通常使用的緩沖液相比，具有粘度低的特征。因此具有可以順利地向微通道或毛細(xì)管中注入緩沖液，并可以縮短緩沖液注入時(shí)間的優(yōu)點(diǎn)。另外即使通道寬度變窄，也很容易注入緩沖液。本發(fā)明緩沖液對于過去只能用高粘度緩沖液進(jìn)行分析的低堿基尺寸(例如2～200bp等)的核酸，也可以進(jìn)行再現(xiàn)性好的分析。以往的緩沖液，必須按照各種核酸尺寸來變化緩沖液的粘度，但是本發(fā)明緩沖液可以用于核酸的寬范圍尺寸中，因此可以同時(shí)對不同尺寸的核酸進(jìn)行分析。而且本發(fā)明緩沖液不受由溫度引起粘度變化問題的影響，所以具有不容易因氣溫或室溫而引起日間誤差的優(yōu)點(diǎn)。
本說明書中，作為高分子化合物，可以列舉蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、糖類、多糖類、核酸(例如DNA、RNA等)等。前述核酸可以是單鏈的，也可以是雙鏈的。
前述通式(1)中HPLS-HPBS(親水性聚合物鏈段-疏水性聚合物鏈段)組成的部分，只要是其本身在水性介質(zhì)中形成高分子膠束的，則不管構(gòu)成各鏈段的聚合物種類(例如聚合度、原料單體等)如何。因此本說明書中“聚合物”一詞的概念包括低聚物在內(nèi)。
前述通式(1)中的HPLS-HPBS部分中，在疏水性聚合物鏈段末端(與HPLS結(jié)合的相反側(cè))通過共價(jià)鍵結(jié)合PLZA基團(tuán)、也就是具有烯屬不飽和雙鍵的聚合性基團(tuán)。這種官能團(tuán)，只要是不對HPLS-HPBS部分的膠束形成能力產(chǎn)生不良影響，則可以是任意的官能團(tuán)。
并沒有特別限定，但是作為構(gòu)成HPLS的聚合物，可以列舉聚乙二醇、聚乙烯醇、聚(甲基)丙烯酸、聚乙烯基吡啶、聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺和聚甲基乙烯基醚等，作為構(gòu)成HPBS的聚合物，可以列舉聚丙交酯(polylactide)、聚乙醇酸交酯、聚(丁內(nèi)酯)、聚(戊內(nèi)酯)、聚丙二醇、聚(α-氨基酸)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚苯乙烯、聚(α-甲基苯乙烯)、聚異戊二烯、聚丁二烯、聚乙烯、聚丙烯以及聚醋酸乙烯酯。
其中作為HPLS，從膠束形成能力的角度考慮，特別優(yōu)選聚乙二醇。另外作為HPBS，從膠束形成能力的角度考慮特別優(yōu)選聚丙交酯。
作為前述PLZA，只要是在水性介質(zhì)中可以進(jìn)行聚合的即可，可以列舉如(甲基)丙烯?；?、丁烯基、乙烯基羰基氨基(CH2＝CHCONH-；丙烯酰胺基)、異丙烯基羰基氨基[CH2＝C(CH3)CONH-；甲基丙烯酰胺基]、乙烯基氧羰基(CH2＝CHOCO-)、p-乙烯基芐基(CH2＝CH-C6H4-CH2-)、p-異丙烯基芐基(CH2＝C(CH3)-C6H4-CH2-)、p-異丙烯基苯基(CH2＝CH-CH2-)和乙烯基(CH2＝CH-)等。
這些之中，作為PLZA，從形成穩(wěn)定聚合的角度考慮，特別優(yōu)選(甲基)丙烯?；?。
作為通式(1)所示的嵌段共聚物的具體例子，可以列舉甲氧基-聚乙二醇/聚丙交酯-甲基丙烯?；?、甲氧基-聚乙烯醇/聚糖苷-丁烯基、甲氧基-聚(甲基)丙烯酸/聚丁基內(nèi)酯-乙烯氧基羰基甲氧基-聚丙烯酰胺/聚苯乙烯-p-乙烯基芐基。在上述具體例子中從形成穩(wěn)定膠束的觀點(diǎn)考慮，特別優(yōu)選甲氧基-聚乙二醇/聚丙交酯-甲基丙烯?；?br> 這些通式(1)所示的嵌段共聚物，可以通過其本身已知的任意方法制造，但優(yōu)選使用各對應(yīng)的單體，通過所謂的活性陰離子聚合首先形成HPLS，然后直接在反應(yīng)體系中使對應(yīng)于HPBS的單體進(jìn)行聚合，再加入含有烯屬不飽和雙鍵的鹵化物、酸酐，引入PLZA基團(tuán)而可制造。這種聚合方法適合用于制造各鏈段具有所需分子量的嵌段共聚物。具體的嵌段共聚物的分子量，HPLS為500～50,000，優(yōu)選3,000～8,000；HPBS為500～80,000，優(yōu)選3,000～8,000。各鏈段的分子量可以通過凝膠滲透色譜進(jìn)行測定。
這樣制造的通式(1)所示的嵌段共聚物，通過以一定濃度分散在水性介質(zhì)(例如水或者是經(jīng)適當(dāng)緩沖劑緩沖的水溶液)中，可以形成高分子膠束。
在形成這種膠束方面，各鏈段的最佳分子量隨親水性聚合物鏈和疏水性聚合物鏈的種類以及這些鏈的組合情況不同而變化，所以不能對其加以限定。但是如果是本領(lǐng)域技術(shù)人員，則可以不必通過過多的實(shí)驗(yàn)，通過實(shí)際調(diào)制嵌段共聚物，對這些的膠束形成能力進(jìn)行評定，就可以決定各鏈段的最佳分子量。如果以作為特別優(yōu)選方案的具有以聚乙二醇(或者是聚環(huán)氧乙烷)作為親水性聚合物鏈段，以聚丙交酯作為疏水性聚合物鏈段的嵌段共聚物為例，前者的分子量一般為500～50,000，優(yōu)選3,000～8,000，特別優(yōu)選5,500～6,500；后者的分子量一般為500～80,000，優(yōu)選3,000～8,000，特別優(yōu)選4,000～4,500。
如果按照本發(fā)明，用以上方法得到的高分子膠束，以反應(yīng)混合液的狀態(tài)或從反應(yīng)混合液中分離后再度使其懸浮在水性介質(zhì)中的狀態(tài)，在適當(dāng)聚合引發(fā)劑存在下，利用以共價(jià)鍵與疏水性聚合物鏈段末端結(jié)合的具有烯屬不飽和雙鍵的聚合性基團(tuán)，使其聚合即可以制造聚合高分子膠束。作為聚合引發(fā)劑，只要是可以使前述聚合性基團(tuán)在水性介質(zhì)中進(jìn)行聚合的引發(fā)劑，則不管其種類如何均可使用，但一般可以使用自由基聚合引發(fā)劑。作為這類引發(fā)劑，可以列舉過氧化物、偶氮化合物和氧化還原引發(fā)劑。而且前述聚合，還可以采用光或射線進(jìn)行引發(fā)。
本發(fā)明電泳用緩沖液中還可以優(yōu)選使用通過在以通式(1)所示的嵌段共聚物中再加入低分子聚合性單體使其聚合而形成的聚合高分子膠束。在該方案中，通過在通式(1)所示的嵌段共聚物中添加低分子聚合性單體(例如苯乙烯、(甲基)丙烯酸甲酯、醋酸乙烯酯、α-c甲基苯乙烯、二烷基(甲基)丙烯酰胺、亞甲基雙丙烯酰胺、乙二醇雙(甲基)丙烯酸酯等)進(jìn)行聚合，還具有可以高效制造聚合高分子膠束的優(yōu)點(diǎn)。
這樣得到的聚合高分子膠束，可以大致原樣保持前體高分子膠束的形狀，并且在水性介質(zhì)中的所有濃度下都能穩(wěn)定地保持膠束的形狀，適合作為電泳緩沖液使用。
本發(fā)明電泳用緩沖液中本發(fā)明聚合高分子膠束的含量，從獲得對測定物質(zhì)的高分離能力角度考慮，優(yōu)選為1～20mg/ml，更優(yōu)選5～10mg/ml。
作為對前述膠束進(jìn)行稀釋的稀釋液，可以列舉水、tris-甘氨酸緩沖液、tris-甘氨酸緩沖液、tris-硼酸緩沖液、tris-鹽酸緩沖液、tris-麥黃酮緩沖液、tris-磷酸一氫鈉緩沖液、tris-硼酸-EDTA緩沖液等，一般作為高分子化合物的電泳用緩沖液中所用的緩沖液。稀釋用水或?yàn)榱苏{(diào)制緩沖液的水使用超純水、去離子水、MilliQ水等一般電泳中所用的水，特別優(yōu)選使用MilliQ水。
當(dāng)被檢測的高分子化合物是蛋白質(zhì)或肽時(shí)，在前述通式(1)的嵌段共聚物的基礎(chǔ)上可以添加十二烷基硫酸鈉(SDS)，如果是肽，可以添加TritonX-100、ε-氨基己酸、3-(C3-膽酰氨(コラミド)丙基)-二甲基氨基)-1-丙烷、CHAPS、6～8M尿素、四甲基乙二胺(TEMED)、己基三甲基溴化銨(HTAB)等。
本發(fā)明電泳用緩沖液的pH，從適宜的電泳和正常的峰分離角度考慮，當(dāng)被檢測高分子化合物為蛋白質(zhì)時(shí)，優(yōu)選2～9，更優(yōu)選6.8～8.6。當(dāng)被檢測高分子化合物為肽時(shí)，優(yōu)選為2～11，更優(yōu)選為2.5～3.1。當(dāng)被檢物為核酸時(shí)，從適宜的電泳和正常的峰分離角度考慮，優(yōu)選6.8～9.2，更優(yōu)選7.5～8.5。
本發(fā)明電泳用緩沖液，用前述的稀釋用緩沖液對本發(fā)明聚合高分子膠束進(jìn)行適當(dāng)稀釋，再用氫氧化鈉或前述的緩沖液調(diào)節(jié)其pH，進(jìn)行調(diào)制。
作為本發(fā)明電泳法，可以列舉在前述電泳用緩沖液的存在下，使含有高分子化合物的試樣泳移為特征的方法。這里作為電泳的形式，沒有特別的限定，可以適用于各種形式，其中特別優(yōu)選使用毛細(xì)管電泳、微型片型電泳、納米通道型電泳。
本發(fā)明電泳法更具體的是在毛細(xì)管電泳中，包括(a)把含有高分子化合物的試樣注入到毛細(xì)管中，在可以使高分子化合物分離的泳移電場下使該試樣移動(dòng)的工序，和(b)對毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行加壓，接著通過泳移電場，使高分子化合物泳移的工序。
把試樣注入到毛細(xì)管中，在可以使高分子化合物分離的泳移電場下使高分子化合物移動(dòng)的工序，更具體的是通過電壓法、加壓法、落差法進(jìn)行的，根據(jù)裝置的種類，毛細(xì)管的粗細(xì)(內(nèi)徑)、長度等適宜地確定電壓和施加壓力的大小與它們的施與時(shí)間，但是從獲得高速分離和高分離能力，并進(jìn)一步達(dá)到高靈敏度進(jìn)行檢測的角度考慮，特別理想的是采用1～30kV、1～60秒的電注入或加壓注入，優(yōu)選采用0.2～5kPa、更優(yōu)選采用1kPa進(jìn)行加壓注入，把含有高分子化合物的試樣注入到毛細(xì)管中，然后使該試樣在可以對高分子化合物進(jìn)行分離的泳移電場下移動(dòng)。這里前述加壓，優(yōu)選進(jìn)行2～60秒、更優(yōu)選進(jìn)行5～10秒、特別優(yōu)選進(jìn)行7～8秒。然后從在保持高分離能力的狀態(tài)下達(dá)到高速分離的角度考慮，在通過泳移電場使高分子化合物泳移的工序之前，最好進(jìn)行加壓，優(yōu)選用0.2～10kPa、更優(yōu)選1kPa進(jìn)行加壓。這里前述加壓，優(yōu)選進(jìn)行2～60秒、更優(yōu)選進(jìn)行5～10秒、特別優(yōu)選進(jìn)行7～8秒。
本說明書中，毛細(xì)管電泳中的壓力單位(kPa)是指在試樣注入口加壓的力。
用于毛細(xì)管電泳中的毛細(xì)管，對其內(nèi)徑、外徑、全長、有效長度、并沒有特別限定，可以使用一般常用尺寸的毛細(xì)管。對于有效長度，從能進(jìn)行高速分析的角度考慮，可以使用有效長度短的毛細(xì)管。這里所說的毛細(xì)管有效長度是指從試樣注入口到檢測部分的距離。
毛細(xì)管電泳的泳移電場，從獲得良好的分離能力和縮短移動(dòng)時(shí)間的角度考慮，優(yōu)選20V/cm～10kV/cm，更優(yōu)選50V/cm～5kV/cm，特別優(yōu)選100V/cm～1kV/cm。
微型片型電泳中，使用具備加料通道和與該加料通道交叉的分離用通道，并且在該加料通道的一端配置試樣儲(chǔ)存器，在該加料通道的另一端配置出口的微型片。
本發(fā)明的電泳法，在微型片型電泳中，具體包括(a)向試樣儲(chǔ)存器中提供含有高分子化合物的試樣的工序，(b)通過加壓使該試樣儲(chǔ)存器中的高分子化合物向加料通道和分離用通道的交叉部位泳移的工序，和(c)對該分離用通道加壓，接著使高分子化合物在該分離用通道內(nèi)泳移的工序。
向試樣儲(chǔ)存器中供給試樣的工序，更具體的是通過向試樣儲(chǔ)存器中加入試樣，優(yōu)選加入1～10μl，更優(yōu)選加入2～5μl而實(shí)現(xiàn)的。
使試樣儲(chǔ)存器中的試樣向加料通道和分離用通道的交差部位泳移的工序，更具體的是，從得到足夠檢測靈敏度的角度考慮，優(yōu)選在出口處不設(shè)置電泳用緩沖液的條件下從試樣儲(chǔ)存器對試樣進(jìn)行加壓，優(yōu)選加壓3～7kPa，更優(yōu)選5～7kPa，特別優(yōu)選5.5～7kPa，使得試樣向加料通道和分離用通道的交叉部位泳移。這里前述加壓優(yōu)選進(jìn)行0.1～5秒，更優(yōu)選進(jìn)行0.5～2秒，特別優(yōu)選進(jìn)行1秒。
本說明書中，微型片型電泳中的壓力單位(kPa)是指在分離用通道的壓力加載口加壓的力。
使試樣在分離用通道內(nèi)泳移的工序，更具體的是，從以更高速得到高分離能力的角度考慮，希望對分離用通道進(jìn)行加壓，優(yōu)選加壓1～10kPa、更優(yōu)選3.5～10kPa、特別優(yōu)選5～7kPa，接著通過泳移電壓使試樣泳移。這里前述加壓，優(yōu)選進(jìn)行0.1～5秒，更優(yōu)選進(jìn)行0.5～2秒，特別優(yōu)選進(jìn)行1秒。
作為微型片的材質(zhì)，可以列舉如石英玻璃、硼硅玻璃、鈉玻璃、聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、二甲基硅氧烷等。其中從試樣的吸附少、片容易加工的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選使用玻璃或聚甲基丙烯酸甲酯。另外還可以與毛細(xì)管一樣，使用對內(nèi)壁進(jìn)行過加工處理的材料。
在微型片型電泳中，微型片的尺寸，例如長為10～120mm，寬為10～120mm，厚為500～5000μm。
對微型片中加料通道和分離用通道各自的形狀沒有特別限定?？梢允褂迷谝粔K片上設(shè)置3～96條前述通道，能同時(shí)對多通道進(jìn)行分析的片。多通道的排列方法，有平行排列、放射狀排列、圓形排列等，但是對其形狀沒有特別限定。
前述通道的寬度，可以根據(jù)微型片的尺寸，使用目的等進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。具體是從獲得足夠分析靈敏度的角度考慮，通道的寬度在0.1μm或以上，優(yōu)選在10μm或以上；從獲得足夠分析精度角度考慮，通道寬度在100μm或以下，優(yōu)選在50μm或以下。同時(shí)，前述通道的深度可以根據(jù)微型片的尺寸，使用目的等進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。具體是從獲得足夠分析靈敏度的角度考慮，通道的深度在0.1μm或以上，優(yōu)選在10μm或以上；從獲得足夠分析精度的角度考慮，通道深度在100μm或以下，優(yōu)選在50μm或以下。而且前述分離用通道的長度，可以根據(jù)微型片的尺寸、分析的對象化合物，進(jìn)行適當(dāng)選擇，但最好把有效長度設(shè)定得更長。有效長度是指從通道交叉部位至高分子化合物檢測點(diǎn)(配置在分離用通道上)的距離。從獲得足夠分離能力的角度考慮，該有效長度在0.1mm或以上，優(yōu)選10mm或以上，從進(jìn)行高速分離的角度考慮，該有效長度在100mm或以下，優(yōu)選在50mm或以下。
前述儲(chǔ)存器的尺寸，可以根據(jù)試樣容量進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。具體是從引入試樣的操作和電極的厚度考慮，儲(chǔ)存器直徑在0.05mm或以上，優(yōu)選3mm或以下。
微型片型電泳中的泳移電場，從獲得良好的分離能力和縮短移動(dòng)時(shí)間的角度考慮，優(yōu)選20V/cm～50kV/cm，更優(yōu)選50V/cm～5kV/cm，特別優(yōu)選100V/cm～1kV/cm。
在微型片型電泳中，注入時(shí)的試樣量(濃度)，從獲得良好分離能力的角度考慮，當(dāng)試樣是肽或者蛋白質(zhì)時(shí)，為0.1ng/ml～1g/ml，優(yōu)選10ng/ml～100mg/ml，更優(yōu)選0.1μg/ml～10mg/ml。當(dāng)前述試樣為糖或多糖時(shí)，注入時(shí)的試樣量(濃度)，從獲得良好分離能力的角度考慮，當(dāng)試樣是肽或者蛋白質(zhì)時(shí)，為0.1μg/ml～10g/ml，優(yōu)選1mg/ml～5g/ml，更優(yōu)選100mg/ml～1g/ml。當(dāng)前述試樣為核酸時(shí)，注入時(shí)的試樣量(濃度)，從獲得良好分離能力的角度考慮，如果試樣是肽或者蛋白質(zhì)時(shí)，為0.1ng/ml～500μg/ml，優(yōu)選10ng/ml～100μg/ml，更優(yōu)選100ng/ml～50μg/ml。
所謂納米通道型電泳是指使用形成了納米尺寸，即寬度為1nm～1μm、優(yōu)選10～500nm、更優(yōu)選50～100nm通道構(gòu)成的流路的片而進(jìn)行的電泳。其中包括上述納米尺寸結(jié)構(gòu)體在微米尺寸通道中形成的。對納米尺寸結(jié)構(gòu)體的形狀，沒有特別限定，例如可以使用方形、圓形、三角形等形狀，對結(jié)構(gòu)體的設(shè)置間隔也沒有特別限定。可以使用形成有這些結(jié)構(gòu)體的納米通道片。與毛細(xì)管電泳的情況一樣，也包括能同時(shí)進(jìn)行多通道分析的片。
納米通道型電泳中的通道可以設(shè)計(jì)成各種各樣的，尺寸具有納米特征的通道形狀彎曲成曲率的、蛇行形狀、鋸齒形狀或者這些形狀的組合等。通過如此，可以在微小尺度內(nèi)形成多條通道。同時(shí)，通過如此，還可以一次處理多個(gè)樣品，有可能實(shí)現(xiàn)高流通量。另外當(dāng)在微米尺寸通道中形成納米尺寸結(jié)構(gòu)體時(shí)，具有可以自由變化其形狀，也可以自由變化其設(shè)置間隔的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)可以進(jìn)行多通道測定。
納米通道型電泳中，與微型片型電泳一樣，包括有加料通道、與該加料通道交叉的分離用通道，在該加料通道一端配置試樣儲(chǔ)存器、在該加料通道另一端配置出口，但對其形狀沒有特別限定。
用于納米通道型電泳的納米通道片的材質(zhì)可以使用與微型片相同的材質(zhì)。例如可以使用石英玻璃、硼硅玻璃、鈉玻璃、聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、二甲基硅氧烷等。
納米通道型電泳中納米通道片的尺寸，可以適用與微型片相同的尺寸。例如，長為10～120mm、寬為10～120mm、厚為500～5000μm。納米通道片的通道深度，通道長度、儲(chǔ)存器尺寸等也都以微型片為準(zhǔn)。
本發(fā)明還涉及毛細(xì)管電泳法，它包括(a)通過1～30kV、1～60秒的電注入或0.2～5kPa、更優(yōu)選1kPa的加壓注入，把含有高分子化合物的試樣注入到毛細(xì)管中，在可以對高分子化合物進(jìn)行分離的泳移電場下使該試樣移動(dòng)的工序，和(b)以0.2～10kPa、更優(yōu)選1kPa加壓后，通過泳移電場使高分子化合物泳移的工序。這里前述加壓，希望進(jìn)行2～60秒、優(yōu)選進(jìn)行5～10秒、更優(yōu)選進(jìn)行7～8秒。
通過前述毛細(xì)管電泳法，針對試樣注入時(shí)間為更短的時(shí)間即可、并可能進(jìn)行高靈敏度檢測的寬廣范圍的尺寸(2bp～15kbp)的核酸，可以同時(shí)進(jìn)行分析，并且可以進(jìn)行高速分析。
除加壓條件以外，其它條件均以前述毛細(xì)管電泳的條件為準(zhǔn)。
在前述毛細(xì)管電泳法中，可以使用各種電泳用緩沖液，也可以組合使用本發(fā)明的電泳用緩沖液。
本發(fā)明還涉及微型片型電泳法，包括，在具備加料通道、與該加料通道交叉的分離用通道，并且在該加料通道一端配置試樣儲(chǔ)存器，在該加料通道的另一端配置出口的微型片中(a)把含有高分子化合物的試樣供應(yīng)到該試樣儲(chǔ)存器中的工序，(b)通過3～7kPa、優(yōu)選5～7kPa、更優(yōu)選5.5～7kPa對該加料通道進(jìn)行加壓，把該試樣儲(chǔ)存器中的該試樣引入到分離通道中的工序，和(c)通過1～10kPa、優(yōu)選3.5～10kPa、更優(yōu)選5～7kPa對分離用通道進(jìn)行加壓，接著使該試樣泳移的工序。這里前述加壓，希望進(jìn)行0.1～5秒、優(yōu)選進(jìn)行0.5～2秒、更優(yōu)選進(jìn)行1秒。
通過前述微型片型電泳法，針對試驗(yàn)注入時(shí)間為更短的時(shí)間即可，并可能進(jìn)行高靈敏度檢測的寬廣范圍的尺寸(2bp～15kbp)的核酸，可以同時(shí)進(jìn)行分析，并且可以進(jìn)行高速分析。
除加壓條件以外，其它條件以前述微型片型電泳的條件為準(zhǔn)。
前述微型片型電泳法中，可以使用各種電泳用緩沖液，也可以組合使用本發(fā)明的電泳用緩沖液。
為檢測核酸的熒光試劑，有溴化乙錠[510/595(激發(fā)波長/熒光波長，以下同)]、エチジウム同型二聚體-1[528/617]、吖啶橙[502/526]、噻唑橙(TO)[509/525]、YO-PRO-1[491/509]、YO-PRO-3[612/631]、TO-PRO-1[515/531]、TO-PRO-3[642/661]、YO-YO-1[491/509]、TO-TO-1[514/533]、YO-YO-3[612/631]、TO-TO-3[642/660]、サイバ-綠I(SYBR綠I)[494/521]、SYBRサイバ-綠[254/520]、SYBR金[300，495/537]、オリ綠(Oli綠)(ssDNA用)[500/520]、リボ綠(Ribo綠)(RNA用)[500/525]、FITC[494/519]、6-FAM[488/535]、HEX[515/559]、cy5[649/670]、cy3[550/570]等。這些熒光試劑，可以采用毛細(xì)管電泳裝置BeckmanP/ACE[488/520(激發(fā)波長/檢測波長，以下同)]、微型片型電泳裝置Bioanalyzer(Agilent Technologies公司制造)[635/670～700]、cosmo-i SV1100(日立電子公司制造)[472/585]、cosmo-i SV2100(日立電子公司制造)[635/660]等裝置進(jìn)行檢測。
作為供電泳的蛋白質(zhì)的檢測法，可以列舉如通過UV波長光的吸收、UV線性成象檢測，利用熒光、激光、燈、LED等進(jìn)行的檢測，電化學(xué)檢測，化學(xué)發(fā)光檢測等檢測方法。具體講，在蛋白質(zhì)或肽的情況下，測定在200nm時(shí)的吸收；例如使SYPRO橙和蛋白質(zhì)或肽發(fā)生反應(yīng)，用460～550nm進(jìn)行激發(fā)，用550～650nm測定熒光，或是使蛋白質(zhì)與熒光標(biāo)記(Agilent Technologies No.5065-4430)反應(yīng)，用630～650nm進(jìn)行激發(fā)，用670～700nm測定熒光，以及通過電化學(xué)測定、化學(xué)發(fā)光測定等方法可以檢測蛋白質(zhì)或肽。
在毛細(xì)管電泳中，例如可以在毛細(xì)管的出口處設(shè)置可以發(fā)射UV波長光的裝置和檢測該UV波長光的檢測器，或者可以是設(shè)置可以發(fā)射熒光波長的裝置和可以檢測該熒光波長的檢測器。
在微型片型電泳中，例如可以在配置于分離用通道上的檢測點(diǎn)處設(shè)置UV波長光的檢測器，或者可以設(shè)置可以發(fā)熒光波長的裝置和可以檢測該熒光波長的檢測器。還可以同時(shí)進(jìn)行多通道檢測。
在納米通道型電泳中，可以適用與微型片型電泳的情況相同的檢測器、檢測方法。另外在納米通道型電泳中，當(dāng)同時(shí)進(jìn)行多通道檢測時(shí)，可以同時(shí)檢測比微型片型電泳的情況更多的試樣。
在檢測過程中，當(dāng)對蛋白質(zhì)、肽、氨基酸等進(jìn)行鑒定時(shí)，可以通過UV吸收、分子量標(biāo)記、與標(biāo)樣的移動(dòng)時(shí)間比較、質(zhì)譜分析等進(jìn)行。
如果按照本發(fā)明的電泳法，可以迅速獲得高分離能力，所以可預(yù)期應(yīng)用于基因分析PCR分析、癌的基因診斷分析、通過SSCP進(jìn)行的SNPs分析、VNTR分析、PCR-RFLP分析、微衛(wèi)星分析，除此之外，癡呆癥、肌肉萎縮癥、心臟病、心肌梗塞、道氏綜合征、感染癥、糖尿病、苯丙酮酸尿癥等各種疾病的分析，還有用于在蛋白體分析或酵解酶體分析中對蛋白質(zhì)或糖鏈進(jìn)行高流通量的篩選分析，應(yīng)用于醫(yī)療診斷設(shè)備，以及應(yīng)用于判明生物功能、疾病發(fā)病機(jī)理等。
實(shí)施例調(diào)制聚合高分子膠束使乙二醇130mmol、6.5ml與干燥THF 30ml、2-甲氧基乙醇0.16ml、萘鉀(ナフタレンカリウム)1mmol一起在25℃下聚合兩天，再與3，6-二甲基1，4-二噁烷-2，5-二酮32mmol、31ml一起在25℃下聚合2小時(shí)后，再用甲基丙烯酸酐20mmol、3.6mL終止反應(yīng)。在冷異丙醇600mL中進(jìn)行再沉淀精制，通過離心分離進(jìn)行沉淀，回收生成物。把該生成物溶解在苯100mL中，冷凍干燥后回收得到2.5g共聚物。把所得的共聚物2.5g溶解在1000mL水中，在油浴中保持80℃，一面攪拌，一面加熱6小時(shí)，加熱后保持原樣放置一晚，回收膠束溶液。在30分鐘后，一面把所得的膠束溶液10000mL保持在60℃，一面進(jìn)行20小時(shí)的熱聚合?；厥赵撊芤?，采用超過濾膜將其濃縮到規(guī)定濃度，得到用式(2)表示的聚合高分子膠束。
(通過凝膠滲透色譜求出的分子量為PEO/PLA＝6100/4000)調(diào)制電泳用緩沖液用0.1N氫氧化鈉把100mg/ml的式(2)所示的聚合高分子膠束(用超純水調(diào)制，pH 2.94)的pH調(diào)節(jié)到8.8，備用。
本實(shí)施例的電泳采用日立微型片型電泳裝置{cosmo-i(SV1100)}進(jìn)行。作為電泳用緩沖液，采用10mg/ml的式(2)所示聚合高分子膠束(pH 8.8)(以下稱為高分子膠束)。作為對照例的電泳用緩沖液，采用0.7％羥丙基甲基纖維素(以下稱為現(xiàn)有聚合物)。
作為電泳法，通過以下3種方法進(jìn)行電泳普通法在加料通道和分離用通道中填充電泳用緩沖液后，在試樣儲(chǔ)存器中裝滿10μl試樣，在剩余的儲(chǔ)存器中充滿電泳用緩沖液，對加料通道施加電壓，10μl、300V、60秒，把試樣儲(chǔ)存器中的試樣加到加料通道中。接著一面對分離用通道施加擠壓電壓130V，一面施加890V的分離電壓180秒；PP法在加料通道和分離用通道中填充電泳用緩沖液后，在試樣儲(chǔ)存器中裝入2μl試樣，對檢測側(cè)出口以外的儲(chǔ)存器，在沒有充滿電泳用緩沖液的狀態(tài)下，對試樣儲(chǔ)存器施加1～5.5kPa壓力、1秒鐘時(shí)間，把試樣引入至加料通道，更具體地是引入至加料通道和分離用通道的交叉部位，接著從分離用通道出口的相反一側(cè)，對分離用通道施加1～7kPa、1秒鐘的壓力，使試樣向分離用通道的下游移動(dòng)；改良PP法在上述PP法中，把試樣引入到加料通道時(shí)的壓力為5.5～7kPa、1秒，對分離用通道施加的壓力為1～10kPa、1秒鐘。或者是把試樣引入到加料通道時(shí)的壓力為1～5.5kPa、1秒鐘，對分離用通道施加的壓力為7～10kPa、1秒。這里，在PP法中把適量的試樣引入到加料通道和分離用通道的交叉部位，具體講是引入0.2μl，而在改良PP法中則引入過量的，具體講是引入0.5μl試樣。
以下把向加料通道(具體講是加料通道和分離用通道的交叉部位)注入試樣時(shí)的壓力稱為前者壓力，把對分離用通道加壓，使交叉部位的試樣向分離用通道下游部位(檢測部位側(cè))移動(dòng)的壓力稱為后者壓力。
本實(shí)施例中所用的PP法和改良PP法中的前者和后者的壓力強(qiáng)度為L0.1cm3空氣注入1～2kPa，LM0.2～0.4cm3空氣注入2～3kPa，M0.5cm3空氣注入3～3.5kPa，MH0.6～0.9cm3空氣注入3.5～5.5kPa，H1cm3空氣注入5.5～7kPa，HH1～1.5cm3空氣注入7～10kPa。
例1(高分子膠束+普通法)使用高分子膠束作為電泳用緩沖液，按照普通法進(jìn)行電泳，對100bp、800bp的2條DNA標(biāo)記物進(jìn)行分離。其結(jié)果在180s的泳移時(shí)間以內(nèi)沒有出現(xiàn)峰。(圖1)例2(高分子膠束+PP法)按照PP法，進(jìn)行例1中的操作。把前者的P強(qiáng)度定為M、后者的P強(qiáng)度為L。其結(jié)果在180s的泳移時(shí)間以內(nèi)可以看到2個(gè)峰。(圖2)例3(高分子膠束+PP法)把例2中的前者P強(qiáng)度定為M、后者的P強(qiáng)度定為M。其結(jié)果加速了100bp的移動(dòng)時(shí)間。(圖3)例4(高分子膠束+PP法)把例2中的前者P強(qiáng)度定為M、后者的P強(qiáng)度定為H。其結(jié)果縮短了泳移時(shí)間。(圖4)例5(高分子膠束+普通法)使用高分子膠束作為電泳用緩沖液，按照普通法對100bp、500bp、800bp的3條DNA進(jìn)行分離。其結(jié)果在180s的泳移時(shí)間以內(nèi)沒有出現(xiàn)峰。(圖5)例6(高分子膠束+PP法)按照PP法，進(jìn)行例5中的操作。把前者的P強(qiáng)度定為L，后者的P強(qiáng)度定為LM。其結(jié)果在120s的泳移時(shí)間以內(nèi)可以看到3個(gè)峰。(圖6)例7(高分子膠束+PP法)按照PP法，進(jìn)行例5中的操作。把前者的P強(qiáng)度定為L、后者的P強(qiáng)度定為M。其結(jié)果加速了100bp、500bp的移動(dòng)時(shí)間。(圖7)例8(高分子膠束+PP法)使用高分子膠束作為電泳用緩沖液，按照PP法對100bp～1000bp的10條DNA進(jìn)行分離。把前者的P強(qiáng)度定為M、后者的P強(qiáng)度定為L。其結(jié)果在180s的泳移時(shí)間以內(nèi)可以看到10個(gè)峰。(圖8)例9(高分子膠束+PP法)按照PP法，進(jìn)行例8中的操作。把前者的P強(qiáng)度定為M、后者的P強(qiáng)度定為LM。其結(jié)果在90s的泳移時(shí)間以內(nèi)可以看到10個(gè)峰。(圖9)例10(高分子膠束+PP法)按照PP法，進(jìn)行例8中的操作。把前者的P強(qiáng)度定為M、后者的P強(qiáng)度定為H。其結(jié)果在大約60s的泳移時(shí)間以內(nèi)可以看到10個(gè)峰。(圖10)例11(高分子膠束+改良PP法)
按照PP法，進(jìn)行例8中的操作。把前者的P強(qiáng)度定為M，后者的P強(qiáng)度定為HH。其結(jié)果同樣地在60s的泳移時(shí)間以內(nèi)可以看到10個(gè)峰，被加速了。(圖11)例12(高分子膠束+PP法)使用高分子膠束作為電泳用緩沖液，按照PP法對100～800bp的8條DNA進(jìn)行分離。把前者的P強(qiáng)度定為M、后者的P強(qiáng)度定為MH。(圖12)在60s以內(nèi)可以看到～8個(gè)峰。
例13(高分子膠束+PP法)使用高分子膠束作為電泳用緩沖液，按照PP法對1～15bp的15條(5kbp高)DNA進(jìn)行分離。把前者的P定為M、后者定為L。(圖13)其結(jié)果在180s以內(nèi)可以看到5個(gè)峰。
例14(高分子膠束+PP法)對于例13，按照PP法，把前者定為M、后者定為M。其結(jié)果縮短了泳移時(shí)間。(圖14)例15(高分子膠束+PP法)對于例13，按照PP法，把前者定為M、后者定為H進(jìn)行。其結(jié)果縮短了泳移間隔。(圖15)例16(高分子膠束+改良PP法)對于例13，按照PP法，把前者定為M、后者定為HH。其結(jié)果可以檢測進(jìn)一步至7kbp。(圖16)例17(高分子膠束+改良PP法)對于例13，按照PP法，把前者定為H、后者定為L。其結(jié)果在180s以內(nèi)可以確認(rèn)有8個(gè)峰。(圖17)例18(高分子膠束+改良PP法)
對于例13，按照PP法，把前者定為H、后者定為M。其結(jié)果在180s以內(nèi)可以檢測出15個(gè)峰。(圖18)例19(高分子膠束+改良PP法)對于例13，按照PP法，把前者定為H、后者定為H。其結(jié)果在100s以內(nèi)可以確認(rèn)有15個(gè)峰。(圖19)例20(背景)本電泳中，對沒有DNA，只有高分子膠束緩沖液和熒光試劑的背景進(jìn)行分析。其結(jié)果，由于檢測不出由高分膠束產(chǎn)生的峰，所以可以認(rèn)為檢測出的一系列的峰是使用本高分子膠束作為電泳緩沖液時(shí)各DNA的峰。(圖20)把對現(xiàn)有電泳用緩沖液實(shí)施PP法的結(jié)果和對使用高分子膠束的電泳用緩沖液實(shí)施PP法的結(jié)果進(jìn)行比較，研究本高分子膠束的有效性。與以現(xiàn)有聚合物(0.7％HPMC(羥丙基甲基纖維素))作為電泳用緩沖液的情況進(jìn)行了比較。
例21(現(xiàn)有聚合物+普通法)以現(xiàn)有聚合物溶液(0.7％HPMC(羥丙基甲基纖維素))作為電泳用緩沖液，按照普通方法對100bp、800bp的2條DNA標(biāo)記進(jìn)行分離。(圖21)例22(現(xiàn)有聚合物+PP法)用早前申請的電泳法進(jìn)行例21的操作。把前者定為M、后者的P定為LM。其結(jié)果顯示出縮短了泳移時(shí)間。(圖22)例23(現(xiàn)有聚合物+PP法)在例22中，把前者定為M、后者P定為MH。其結(jié)果峰變寬。(圖23)例24(現(xiàn)有聚合物+普通法)以現(xiàn)有聚合物溶液(0.7％HPMC(羥丙基甲基纖維素))作為電泳用緩沖液，按照普通方法對100bp-800bp的8條DNA標(biāo)記進(jìn)行分離。(圖24)例25(現(xiàn)有聚合物+PP法)利用PP法進(jìn)行例24的操作，把前者定為M，后者的P定為LM。其結(jié)果加速了前者峰，峰的間隔變寬。(圖25)例26(現(xiàn)有聚合物+PP法)在例25中，把前者定為M，后者P定為MH。其結(jié)果峰變寬。(圖26)根據(jù)以上可知，在以現(xiàn)有聚合物溶液作為電泳用緩沖液時(shí)，如果采用PP法，雖然可以提高DNA的移動(dòng)時(shí)間，但是當(dāng)分離DNA時(shí)，其高速分離有限制。另一方面，使用高分子膠束時(shí)，可以施加更高壓力(例1～20)，這樣就顯示出本高分子膠束的有用性。
本高分子膠束，如果是單獨(dú)使用，則在毛細(xì)管、微型片型電泳中體現(xiàn)不出對DNA的分離效果，但是如果通過與PP法配合使用，則可以發(fā)揮對DNA的尺寸分離效果。而且，通過使用對PP法進(jìn)行改良的電泳法，可以實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步超過用現(xiàn)有高分子聚合物溶液(使用例如纖維素衍生物或聚丙烯酰胺溶液、已有的電泳法)得到的最高檢測速度(10kbp，約80s)的泳移時(shí)間(10kbp，約60s，15kbp，約100s)。
產(chǎn)業(yè)上的實(shí)用性如果按照本發(fā)明的電泳法，可以迅速獲得高分離能力，所以可預(yù)期應(yīng)用于基因分析PCR分析、癌的基因診斷分析、通過SSCP進(jìn)行的SNPs分析、VNTR分析、PCR-RFLP分析、微衛(wèi)星分析，除此之外，癡呆癥、肌肉萎縮癥、心臟病、心肌梗塞、道氏綜合征、感染癥、糖尿病、苯丙酮酸尿癥等各種疾病的分析，還有用于在蛋白體分析或酵解酶體分析中對蛋白質(zhì)或糖鏈進(jìn)行高流通量的篩選分析，應(yīng)用于醫(yī)療診斷設(shè)備，以及應(yīng)用于判明生物功能、疾病發(fā)病機(jī)理等。
權(quán)利要求
1.電泳用緩沖液，含有把通式(1)HPLS-HPBS-PLZA (1)式中，HPLS表示親水性聚合物鏈段，HPBS表示疏水性聚合物鏈段，PLZA表示具有烯屬不飽和雙鍵的聚合性基團(tuán)，所示的嵌段共聚物分散在水性介質(zhì)中，接著使其聚合而形成的聚合高分子膠束。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的電泳用緩沖液，其中，含有通過在該嵌段共聚物中進(jìn)一步加入低分子聚合性單體使其聚合而形成的聚合高分子膠束。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的電泳用緩沖液，其中，組成HPLS的聚合物是從聚乙二醇、聚乙烯醇、聚(甲基)丙烯酸、聚乙烯基吡啶、聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺和聚甲基乙烯基醚中選擇的，HPBS是從聚丙交酯、聚乙醇酸交酯、聚(丁內(nèi)酯)、聚(戊內(nèi)酯)、聚丙二醇、聚(α-氨基酸)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚苯乙烯、聚(α-甲基苯乙烯)、聚異戊二烯、聚丁二烯、聚乙烯、聚丙烯以及聚醋酸乙烯酯中選擇的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)中所述的電泳用緩沖液，其中，HPLS是聚乙二醇，HPBS是從聚丙交酯、聚乙醇酸交酯、聚(丁內(nèi)酯)、聚(戊內(nèi)酯)、聚丙二醇和聚(α-氨基酸)中選擇的。
5.電泳法，其特征是在權(quán)利要求1～4任意一項(xiàng)中所述的電泳用緩沖液存在下，使含有高分子化合物的試樣泳移。
6.根據(jù)權(quán)利要求5中所述的電泳法，其中，電泳的形式是毛細(xì)管電泳、微型片型電泳或納米片型電泳。
7.根據(jù)權(quán)利要求5中所述的電泳法，其中，電泳的形式是毛細(xì)管電泳，它包括(a)通過1～30kV、1～60秒的電注入或加壓注入，把含有高分子化合物的試樣注入到毛細(xì)管中，在可以對高分子化合物進(jìn)行分離的泳移電場下，使該高分子化合物移動(dòng)的工序，和(b)對毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行加壓后，通過泳移電場使高分子化合物泳移的工序。
8.根據(jù)權(quán)利要求5中所述的電泳法，其中，電泳的形式是微型片型電泳，它包括，在具備加料通道和與該加料通道交叉的分離用通道，并且在該加料通道的一端配置試樣儲(chǔ)存器，在該加料通道的另一端配置出口的微型片中(a)把含有高分子化合物的試樣供給該試樣儲(chǔ)存器的工序，(b)通過對該加料通道加壓，使該試樣儲(chǔ)存器中的該高分子化合物向加料通道和分離用通道的交叉部分泳移的工序，和(c)對分離用通道加壓，接著通過泳移電場使該高分子化合物在分離用通道內(nèi)泳移的工序。
9.毛細(xì)管電泳法，它包括(a)通過1～30kV、1～60秒的電注入或0.2～5kPa、2～60秒的加壓注入，把含有高分子化合物的試樣注入到毛細(xì)管中，在可以對高分子化合物進(jìn)行分離的泳移電場下，使該試樣移動(dòng)的工序，和(b)0.2～10kPa、2～60秒加壓后，通過泳移電場使該高分子化合物泳移的工序。
10.微型片型電泳法，它包括，在具備加料通道和與該加料通道交叉的分離用通道，并且在該加料通道的一端配置試樣儲(chǔ)存器，在該加料通道的另一端配置出口的微型片中(a)把含有高分子化合物的試樣供給該試樣儲(chǔ)存器的工序，(b)通過以5.5～7kPa對該加料通道加壓0.1～5秒，使該試樣儲(chǔ)存器中的該高分子化合物向加料通道和分離用通道的交叉部分泳移的工序，和(c)以1～10kPa對分離用通道加壓0.1～5秒，接著通過泳移電場使該高分子化合物在分離用通道內(nèi)泳移的工序。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10中所述的方法，其中，在權(quán)利要求1～4任意一項(xiàng)中所述的電泳用緩沖液存在下進(jìn)行電泳。
12.根據(jù)權(quán)利要求5～11任意一項(xiàng)中所述的電泳法，其中，還包括對泳移的高分子化合物進(jìn)行檢測的工序。
全文摘要
以含有把通式HPLS－HPBS－PLZA(HPLS表示親水性聚合物鏈段，HPBS表示疏水性聚合物鏈段，PLZA表示具有烯屬不飽和雙鍵的聚合性基團(tuán))所示的嵌段共聚物分散在水性介質(zhì)中，接著使其聚合而形成的聚合高分子膠束的作為毛細(xì)管電泳、微型片型電泳的緩沖液使用，引入試樣后，用規(guī)定的壓力進(jìn)行規(guī)定時(shí)間的加壓后，在泳移電場下進(jìn)行電泳，由此可以迅速地、并且以高分離能力對DNA等高分子化合物進(jìn)行分離。
文檔編號G01N27/447GK1643374SQ03806148
公開日2005年7月20日 申請日期2003年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月15日
發(fā)明者馬場嘉信, 片岡一則, 田渕真理, 長崎幸夫, 田中靖子, 桑原智枝 申請人:獨(dú)立行政法人科學(xué)技術(shù)振興機(jī)構(gòu)