專利名稱：天門冬氨酸氨基轉移酶活力的快速測試方法
技術領域：
本發(fā)明涉及電化學檢測技術領域，是一種檢測天門冬氨酸氨基轉移酶(Aspartate Aminotransferase，AST)，又稱谷草轉氨酶(Glutamine-Oxalacetate Transferase，GOT)活力的快速測試方法，其特征在于被測物在電極表面發(fā)生氧化還原反應。本文著重介紹了生物傳感器對天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的測試方法及其敏感試劑制備方法，使用該方法可以快速檢測出天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力。
背景技術：
在剛剛結束的雅典奧運會上，我國健兒奮力拼搏，取得了令世界矚目的好成績，這之中除了運動員的辛勤汗水外，科學的訓練方法也是其中重要的組成部分。進行運動員的身體機能狀況評定是其中最關鍵的一環(huán)，運動時人體內的一系列生理生化變化是機體對所承受運動負荷的客觀反映，反映機體對運動訓練的應激能力。訓練負荷太小，運動能力提高不明顯；訓練負荷過大，不僅不能提高運動能力，反而損害身體健康。因此，在運動訓練中，合理運用基礎理論、醫(yī)務監(jiān)督、控制訓練負荷、判斷運動性疲勞、防止過度疲勞和運動損傷的發(fā)生，以及有效的挖掘人體的運動潛力、提高競技能力，均有十分重要的意義，并已經成為科學訓練的重要內容。天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)即為需重點監(jiān)測的參數之一，該酶廣泛分布在人體各組織器官內。分布次序心≥肝＞肌肉＞腎，以心臟含量最高，是血清的7800倍。在心臟等臟器受損時，細胞內酶釋入血液，使血清內酶的活性提高。因此，在訓練中常用此酶作為判定心臟組織是否受損的重要指標。由此可知，血清中天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的測定，對運動員訓練疲勞程度的監(jiān)控，進而調整改進訓練計劃有重大的意義，而且該方法可以為運動員選材提供簡便、快速和廉價的手段，使之更具有實用價值。
同時它還可用作心臟功能評定的指標，作為一種定性篩查標準，對于多種心臟疾病的早期預警有著不可替代的作用。隨著社會的發(fā)展，患有心腦血管疾病的人數急劇上升，因此定期的心臟功能檢查也變得越來越重要，可見天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)檢測的臨床意義也十分巨大。
目前市場上尚無使用電化學方法檢測天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的便攜式儀表成品，大部分的檢測設備都使用光學方法，對儀器設備的加工精度要求高，需要潔凈度高，便攜性能差。而且傳統(tǒng)的測量方法需用針管抽足量前臂血，用離心法分離血清，需血量大，所需步驟復雜，耗時長，受試者有一定的不適感。具體到傳感器試條的制作，目前制作試條以及檢測儀表大多數依托于絲網印刷的厚膜技術，采用厚膜技術的傳感器試條制作耗時、耗材，用絲網印刷方法得出的電極帶的表面非常不平，工藝較為復雜而且在響應時間、靈敏度、穩(wěn)定性等方面不如基于先進的微機電系統(tǒng)(MEMS)制造技術的薄膜電極?；贛EMS技術制備的生物傳感器器件，較之絲網厚膜印刷技術，具有體積小，靈敏度高，一致性好(CV％≤5％，甚至更低)，相關性佳(可達0.99)，工藝簡單等優(yōu)點，大批量生產成本低。
本發(fā)明與目前國內外產品比較，具有許多優(yōu)勢，獨創(chuàng)性地采用了電化學檢測方法，重復性好；一次性試條的生產工藝采用先進的微機電系統(tǒng)(MEMS)工藝，既保證了檢測的可靠性和一致性，又降低了試條的生產成本；所需血量少(3~5μl)。具有系統(tǒng)響應快，靈敏度高等優(yōu)點。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的是要提供一種檢測天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活力的生物傳感器。
本發(fā)明的另一個目的是要提供一種檢測天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活力的電化學方法。
本發(fā)明的另一個目的是要提供快速檢測天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活力的電流測試方法，該方法包含若干步生物化學反應。
本發(fā)明的另一個目的是要提供快速檢測天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活力的酶電極試劑制備方法，在絕緣材料上利用MEMS技術形成均勻表面的薄膜金電極。
為達到上述目的，本發(fā)明的技術解決方案是提供一種天門冬氨酸氨基轉移酶活力的快速測試方法，使用基于微機電系統(tǒng)技術制備的生物傳感器，包括a)將被側物液滴吸入電極的反應區(qū)內，電極表面發(fā)生氧化還原反應，氧化還原反應產生電子傳遞并形成電流；b)電流在輔助因子的協(xié)同作用下，將天冬氨酸轉化為谷氨酸和草酰乙酸，測定谷氨酸或草酰乙酸的量，可相應得出天門冬氨酸氨基轉移酶的活力。
所述的快速測試方法，其在b)步中，所述測定谷氨酸或草酰乙酸的量，按下列四種方法中任選一種進行方法一谷氨酸在有輔酶NAD存在的條件下，與谷氨酸脫氫酶反應，生成的NADH與天門冬氨酸氨基轉移酶的活力成正比關系，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測NADH的氧化電流，得到天門冬氨酸氨基轉移酶的活力；方法二谷氨酸直接與谷氨酸氧化酶反應，生成的過氧化氫與天門冬氨酸氨基轉移酶的活力成正比關系，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測過氧化氫的氧化電流，得到天門冬氨酸氨基轉移酶的活力；方法三草酰乙酸在有氫離子存在的條件下，與輔酶NADH反應生成NAD，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測NAD的氧化電流，得到天門冬氨酸氨基轉移酶的活力；方法四草酰乙酸在草酰乙酸脫羧酶的作用下生成丙酮酸，在有激活因子的條件下，丙酮酸氧化酶催化丙酮酸生成與天門冬氨酸氨基轉移酶活力成正比的過氧化氫，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測過氧化氫的氧化電流，得到天門冬氨酸氨基轉移酶的活力。
所述的快速測試方法，其所述使用的基于微機電系統(tǒng)技術制備的生物傳感器，其包括提供反應所用到的敏感試劑包括和被檢測物天門冬氨酸氨基轉移酶發(fā)生氧化還原反應的酶、底物和各種輔助因子；用于電子轉遞的電子轉遞體；用于溶解試劑的緩沖溶液；用于保持酶活性的穩(wěn)定劑和各種附加試劑；提供一種用于檢測的電極，用于連接反應試劑和檢測儀表裝置，對被測試物施加工作電壓，并通過電子傳遞體完成生物化學反應所產生的電子傳遞。
所述的快速測試方法，其所述反應敏感試劑中的酶，與被分析物起反應且能產生與被分析物天門冬氨酸氨基轉移酶的活力相對應的電流，包括輔酶NAD、谷氨酸脫氫酶、谷氨酸氧化酶、草酰乙酸脫羧酶、丙酮酸氧化酶、過氧化氫酶，其中，輔酶NAD+的量為0.1～0.4mM；谷氨酸脫氫酶的量為1～50U/ml。
所述的快速測試方法，其所述底物，為天冬氨酸、α-酮戊二酸，其中，天冬氨酸量為0.1～1M，α-酮戊二酸量為10～30mM。
所述的快速測試方法，其所述反應敏感試劑中的電子傳遞體，起氧化還原作用，為從過氧化物酶氧化還原聚合物、鐵氰酸鹽、亞甲基藍、二茂鐵及其衍生物、對苯醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物和β-萘醌-4-磺酸鉀組成的組中選擇出的一種，其量為10～50mM。
所述的快速測試方法，其所述酶促反應中的輔助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黃酶、檸檬酸三鈉、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲殼素、絲素蛋白、琥珀酸鈉中選擇出的一種，其量為1～20μM。
所述的快速測試方法，其所述反應敏感試劑中的緩沖溶液，為磷酸緩沖液、TRIS緩沖液、檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液組成的組中選擇出的一種。
所述的快速測試方法，其所述發(fā)生氧化還原反應時所用到的輔助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黃酶、檸檬酸三鈉、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲殼素、絲素蛋白、琥珀酸鈉中選擇出的一種，其量為0.01～10U/μl。
所述的快速測試方法，其所述反應敏感試劑中的穩(wěn)定劑，保持酶的活性，是從琥珀酸鈉、檸檬酸三鈉、牛血清白蛋白、海藻糖、甲殼素、絲素蛋白中任選一種制成，其量為1～50mM。
所述的快速測試方法，其所述電極，為兩電極或多電極形式的薄膜電極，制備于絕緣性基板上；
固定在電極上的反應試劑，包括電子接受體、與被分析物起反應且能產生與被分析物濃度相對應的電流的酶、緩沖液、表面活性劑；電極材料為鈀、鉑、碳、金、銥、銅、銀、氯化銀及其混合物中的一種。
所述的快速測試方法，其所述絕緣性基板，為從聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚乙烯對苯二甲酸酯、聚對苯二甲酸乙二醇酯和丙烯晴-丁二烯-苯乙烯等組成的組合中選擇出來的一種聚合物制成。
所述的快速測試方法，其可用于血清中或全血中天門冬氨酸氨基轉移酶活力的檢測。
本發(fā)明的電極采用毛細作用?？梢詫⒁旱螐碾姌O的側面吸入電極的反應區(qū)內，由于毛細原理，樣品更容易迅速鋪滿整個反應區(qū)，使反應進行的更迅速、更充分，檢測結果更準確。
本發(fā)明所配套使用的儀表裝置請參考已申請專利的200420006421.7號專利文件，對該儀表裝置作有限調整后，可用于天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的檢測。
本發(fā)明將反應試劑固定在電極上形成試劑層，該反應試劑包括起氧化還原作用的電子接受體，與被分析物天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)起反應的底物以及后續(xù)反應所需要的酶和其它試劑，還至少包括穩(wěn)定劑和緩沖液。當被分析物天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)通過毛細作用滴加到測試電極上后，用電化學生物傳感器檢測系統(tǒng)可以快速檢測所產生的與天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力相對應的電流輸出信號。
本發(fā)明通過電子介體將酶反應過程中產生的電子從酶反應中心轉移到電極表面，使得電流型酶傳感器的響應速度和檢測靈敏度得到了提高，同時降低了反應的電壓。
本發(fā)明緩沖液用于提供一個pH值穩(wěn)定的反應環(huán)境，最佳pH值為6~7。


圖1本發(fā)明設計的兩電極分層示意圖；圖2本發(fā)明的電極組合后的立體圖；
圖3本發(fā)明實施例的天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)實時響應圖。
具體實施例方式
以下說明和實施例詳細說明了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。本領域技術人員應當理解的是，在本發(fā)明的范圍內包括本發(fā)明的多種改變和改進。因此，對一種優(yōu)選實施方案的說明不應當被視為對本發(fā)明范圍的限定。
提供反應所用到的敏感試劑包括和被檢測物天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)發(fā)生氧化還原反應的酶、底物和各種輔助因子；用于電子轉遞的電子轉遞體；用于溶解試劑的緩沖溶液；以及保持酶活性的穩(wěn)定劑和各種附加試劑。
天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)在輔助因子的協(xié)同作用下，將天冬氨酸轉化為谷氨酸和草酰乙酸，測定谷氨酸和草酰乙酸的量都可以相應得出天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力。
方法一谷氨酸在有輔酶NAD存在的條件下，與谷氨酸脫氫酶反應，生成的NADH與天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力成正比關系，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測NADH的氧化電流，可以得到天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力。反應式如下 方法二谷氨酸還可直接與谷氨酸氧化酶反應，生成的過氧化氫與天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力成正比關系，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測過氧化氫的氧化電流，也可得到天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力。反應式如下
方法三草酰乙酸在有氫離子存在的條件下，與輔酶NADH反應生成NAD，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測該反應的氧化電流，也可得到天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力。反應式如下
方法四草酰乙酸還可以在草酰乙酸脫羧酶的作用下生成丙酮酸，在有激活因子的條件下，丙酮酸氧化酶催化丙酮酸生成與天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活力成正比的過氧化氫。借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測過氧化氫的氧化電流，也可得到天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力。反應式如下
對于有輔酶NADH參與的反應過程，通過檢測NADH吸光度的變化，也可以用光學檢測設備測定天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力。
對于有過氧化氫產生的反應過程，通過加入某種顏色指示劑，可能還包括若干其他試劑，利用過氧化氫對顏色指示劑的作用，通過檢測顏色指示劑吸光度的變化，也可以用光學檢測設備測定天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力。
本發(fā)明以方法一為優(yōu)選實施例，介紹了測定天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活力的試劑制備方法。
天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)在輔助因子的協(xié)同作用下，令天冬氨酸和α-酮戊二酸起反應，轉化為谷氨酸和草酰乙酸，谷氨酸在有輔酶NAD存在的條件下，與谷氨酸脫氫酶反應，生成的NADH與天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力成正比關系，在有另一種輔助因子作用的條件下，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測NADH的氧化電流，可以得到天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力。
作為底物的天冬氨酸量為0.1～1M，優(yōu)選為0.2～0.6M，實施例中優(yōu)選為0.5M。
作為底物的α-酮戊二酸量為10～30mM，優(yōu)選為15～25mM，實施例中優(yōu)選為20mM。
酶促反應中的輔助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黃酶、檸檬酸三鈉、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲殼素、絲素蛋白、琥珀酸鈉等中選擇出的一種，其量為1～20μM，優(yōu)選為5～10μM，實施例中優(yōu)選為5μM。
輔酶NAD+的量為0.1～0.4mM，優(yōu)選為0.2～0.3mM，實施例中優(yōu)選為0.26mM。
谷氨酸脫氫酶的量為1～50U/ml，優(yōu)選為1～10U/ml，實施例中優(yōu)選為2U/ml。
發(fā)生氧化還原反應時所用到的輔助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黃酶、檸檬酸三鈉、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲殼素、絲素蛋白、琥珀酸鈉等中選擇出的一種，其量為0.01～10U/μl，優(yōu)選為0.05～1U/μl，實施例中優(yōu)選為0.1U/μl。
電子媒介體是由亞甲基藍、甲苯鞍藍、甲酚固紫、鐵氰酸鹽、二茂鐵及其衍生物、對苯醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物和β-萘醌-4-磺酸鉀等中選擇出的一種，量為10～50mM，優(yōu)選20～40mM，實施例中優(yōu)選為25mM。
保持酶活性的穩(wěn)定劑，它是由從琥珀酸鈉、檸檬酸三鈉、牛血清白蛋白、海藻糖、甲殼素、絲素蛋白等中選擇出的一種，其量為1～50mM，優(yōu)選5～25mM，實施例中優(yōu)選為10mM。
溶解酶和電子媒介體的溶劑，它可以使用水、磷酸鹽緩沖液、檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液、Tris鹽酸緩沖液等各種緩沖液，目的是用來保持恒定的PH值，實施例中優(yōu)選PH值為7.4。
實施例中所用到的電極，如圖1、2所示。絕緣性基材5是由從聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚乙烯對苯二甲酸酯、聚對苯二甲酸乙二醇酯和丙烯晴-丁二烯-苯乙烯等中選擇出來的一種聚合物制成，其厚度在0.1～1mm之間，優(yōu)選0.2～0.6mm，第二絕緣層2和覆蓋層1與絕緣基材5是同種材料，厚度不同，其厚度在0.1～0.5mm之間，優(yōu)選0.2～0.4mm。
所述工作電極和對電極所用材料包括選自鈀、鉑、碳、金、銥、銅、銀及其混合物的材料。優(yōu)選應用金電極，因為它加工簡單，與塑料的粘接性好且導電率高，本發(fā)明制成的金電極薄至約100納米，很適合一次性使用。電極經過表面活化處理后，不僅可以去除電極表面的污染物，同時還能起到活化電極表面的作用，刻蝕的條件可根據電極表面的情況做適當的調整。用等離子體法快速活化電極表面的技術參照已公開專利CN1506678A號。
其工作電極4和對電極6的形狀參照已申請專利，專利申請?zhí)枮?2160271.9，它可以采用圓形、方形、條形等各種形狀的電極。電極系統(tǒng)可以是兩電極的，即工作電極、假參比電極(共用對電極和參比電極)，也可以是三電極的，即工作電極、對電極和參比電極。制作詳細說明可以參照已申請專利200410030214.X號專利文件，在此不再贅述。
實施例本實施例優(yōu)選鐵氰化物作為具有氧化還原作用的電子傳遞體，發(fā)生的反應如下
取如附圖1所示的電極備用。
準備試劑取谷氨酸脫氫酶母液0.1U/μl，將其稀釋到16U/ml，取50μl加入離心管中。再取4M天冬氨酸溶液、0.16Mα-酮戊二酸溶液、80mM海藻糖溶液、40μM維生素B6(磷酸吡哆醛)溶液、2mM NAD+溶液、0.8U/μl心肌黃酶溶液、0.2M鐵氰酸鹽溶液各50μl加入同一離心管中。輕震蕩至混合完全。將5μl上述溶液滴加在電極反應區(qū)3上，在37℃的干燥箱中干燥20分鐘。取出，加覆蓋層7，形成毛細作用溝道。
在制備好的電極上，通過毛細作用加入3~5μl標準溶液，在電極表面發(fā)生如下反應
反應式(3)產生電子傳遞，在電化學生物傳感器檢測系統(tǒng)(CHI)上可以快速檢測出與天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的活力相對應的電流(見圖3)。
同時利用NADH吸光度的變化，也可以使用光學檢測系統(tǒng)進行天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活力的檢測。
本發(fā)明用了優(yōu)選實施例進行說明，優(yōu)選實施例只是為了說明的目的，而不是對本發(fā)明的限制。在上述說明的基礎上可以對本發(fā)明作許多改進和改變。因此，在所附權利要求書的范圍內，本發(fā)明可以有不是上述的其他實現方式。例如其它組合的試劑配方、在電極表面作任何化學處理和表面修飾、指示劑的種類和反應位置、在試劑層上覆蓋過濾膜從而消除紅細胞的干擾而用于全血天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的檢測、納米顆粒修飾的試劑反應區(qū)、三電極或多電極形式、厚膜電極的制備形式等。同時也并不局限于電化學方法利用NADH或氧化還原反應生成的H2O2吸光度的變化，在添加若干輔助試劑的情況下，也可以使用光學檢測系統(tǒng)進行天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活力的檢測。
權利要求
1.一種天門冬氨酸氨基轉移酶活力的快速測試方法，使用基于微機電系統(tǒng)技術制備的生物傳感器，其特征在于，包括a)將被側物液滴吸入電極的反應區(qū)內，電極表面發(fā)生氧化還原反應，氧化還原反應產生電子傳遞并形成電流；b)電流在輔助因子的協(xié)同作用下，將天冬氨酸轉化為谷氨酸和草酰乙酸，測定谷氨酸或草酰乙酸的量，可相應得出天門冬氨酸氨基轉移酶的活力。
2.如權利要求1所述的快速測試方法，其特征在于，在b)步中，所述測定谷氨酸或草酰乙酸的量，按下列四種方法中任選一種進行方法一谷氨酸在有輔酶NAD存在的條件下，與谷氨酸脫氫酶反應，生成的NADH與天門冬氨酸氨基轉移酶的活力成正比關系，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測NADH的氧化電流，得到天門冬氨酸氨基轉移酶的活力；方法二谷氨酸直接與谷氨酸氧化酶反應，生成的過氧化氫與天門冬氨酸氨基轉移酶的活力成正比關系，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測過氧化氫的氧化電流，得到天門冬氨酸氨基轉移酶的活力；方法三草酰乙酸在有氫離子存在的條件下，與輔酶NADH反應生成NAD，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測NAD的氧化電流，得到天門冬氨酸氨基轉移酶的活力；方法四草酰乙酸在草酰乙酸脫羧酶的作用下生成丙酮酸，在有激活因子的條件下，丙酮酸氧化酶催化丙酮酸生成與天門冬氨酸氨基轉移酶活力成正比的過氧化氫，借助具有氧化還原作用的電子傳遞體檢測過氧化氫的氧化電流，得到天門冬氨酸氨基轉移酶的活力。
3.如權利要求1所述的快速測試方法，其特征在于，所述使用的基于微機電系統(tǒng)技術制備的生物傳感器，其包括提供反應所用到的敏感試劑包括和被檢測物天門冬氨酸氨基轉移酶發(fā)生氧化還原反應的酶、底物和各種輔助因子；用于電子轉遞的電子轉遞體；用于溶解試劑的緩沖溶液；用于保持酶活性的穩(wěn)定劑和各種附加試劑；提供一種用于檢測的電極，用于連接反應試劑和檢測儀表裝置，對被測試物施加工作電壓，并通過電子傳遞體完成生物化學反應所產生的電子傳遞。
4.如權利要求3所述的快速測試方法，其特征在于，所述反應敏感試劑中的酶，與被分析物起反應且能產生與被分析物天門冬氨酸氨基轉移酶的活力相對應的電流，包括輔酶NAD、谷氨酸脫氫酶、谷氨酸氧化酶、草酰乙酸脫羧酶、丙酮酸氧化酶、過氧化氫酶，其中，輔酶NAD+的量為0.1～0.4mM；谷氨酸脫氫酶的量為1～50U/ml。
5.如權利要求3所述的快速測試方法，其特征在于，所述底物，為天冬氨酸、α-酮戊二酸，其中，天冬氨酸量為0.1～1M，α-酮戊二酸量為10～30mM。
6.如權利要求3所述的快速測試方法，其特征在于，所述反應敏感試劑中的電子傳遞體，起氧化還原作用，為從過氧化物酶氧化還原聚合物、鐵氰酸鹽、亞甲基藍、二茂鐵及其衍生物、對苯醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物和β-萘醌-4-磺酸鉀組成的組中選擇出的一種，其量為10～50mM。
7.如權利要求3所述的快速測試方法，其特征在于，所述酶促反應中的輔助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黃酶、檸檬酸三鈉、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲殼素、絲素蛋白、琥珀酸鈉中選擇出的一種，其量為1～20μM。
8.如權利要求3所述的快速測試方法，其特征在于，所述反應敏感試劑中的緩沖溶液，為磷酸緩沖液、TRIS緩沖液、檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液組成的組中選擇出的一種。
9.如權利要求3所述的快速測試方法，其特征在于，所述發(fā)生氧化還原反應時所用到的輔助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黃酶、檸檬酸三鈉、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲殼素、絲素蛋白、琥珀酸鈉中選擇出的一種，其量為0.01～10U/μl。
10.如權利要求3所述的快速測試方法，其特征在于，所述反應敏感試劑中的穩(wěn)定劑，保持酶的活性，是從琥珀酸鈉、檸檬酸三鈉、牛血清白蛋白、海藻糖、甲殼素、絲素蛋白中任選一種制成，其量為1～50mM。
11.如權利要求3所述的快速測試方法，其特征在于，所述電極，為兩電極或多電極形式的薄膜電極，制備于絕緣性基板上；固定在電極上的反應試劑，包括電子接受體、與被分析物起反應且能產生與被分析物濃度相對應的電流的酶、緩沖液、表面活性劑；電極材料為鈀、鉑、碳、金、銥、銅、銀、氯化銀及其混合物中的一種。
12.如權利要求11所述的快速測試方法，其特征在于，所述絕緣性基板，為從聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚乙烯對苯二甲酸酯、聚對苯二甲酸乙二醇酯和丙烯晴-丁二烯-苯乙烯等組成的組合中選擇出來的一種聚合物制成。
13.如權利要求1、2或3所述的快速測試方法，其特征在于，可用于血清中或全血中天門冬氨酸氨基轉移酶活力的檢測。
全文摘要
本發(fā)明涉及電化學檢測技術領域，是一種檢測天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活力的快速測試方法，產生與被測物活力(濃度)相對應的電化學變化或光學變化。其包括a)將被側物液滴吸入電極的反應區(qū)內，電極表面發(fā)生氧化還原反應，氧化還原反應產生電子傳遞并形成電流；b)電流在輔助因子的協(xié)同作用下，將天冬氨酸轉化為谷氨酸和草酰乙酸，測定谷氨酸或草酰乙酸的量，可相應得出天門冬氨酸氨基轉移酶的活力。當被分析物滴加到電極反應區(qū)上后，用電化學生物傳感器檢測系統(tǒng)可以快速檢測出的活力。本發(fā)明使得電流型酶傳感器的響應速度和檢測靈敏度得到了提高，同時降低了反應的電壓。
文檔編號G01N27/327GK1782701SQ20041000993
公開日2006年6月7日 申請日期2004年12月2日 優(yōu)先權日2004年12月2日
發(fā)明者郭宗慧, 蔡新霞, 劉春秀, 姜利英, 李華清, 羅賢波, 王慧, 周愛玉 申請人:中國科學院電子學研究所