專利名稱：具有診斷治療價值的brcaa1蛋白與一個乳腺癌抗原表位肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有臨床診斷治療價值的BRCAA1蛋白與一個新的乳腺癌抗原表位的識別。
乳腺癌是一種常見的婦科腫瘤，可分為遺傳性乳腺癌與散發(fā)性乳腺癌兩種。遺傳性乳腺癌只占15％左右，散發(fā)性乳腺癌占85％左右。尋找乳腺癌的抗原表位與制備相應(yīng)抗體是發(fā)展特異性免疫診斷與免疫治療的一個中心目標(biāo)。乳腺癌相關(guān)抗原能夠起始主動的、特異的抗體反應(yīng)與細(xì)胞免疫反應(yīng)。因此，這些特異性的乳腺癌抗體能夠被用作探針，識別乳腺癌相關(guān)抗原與基因，有利于乳腺癌的診斷、治療與預(yù)防。
我們利用基因篩選技術(shù)從乳腺癌患者的組織中篩選出一個新的乳腺癌相關(guān)抗原基因，即brcaa1基因(breast cancer associated antigen 1 gene，AF208045，1q42.1-q43.全長93.857kb，包含18個外顯子與17個內(nèi)含子)。此基因已被證實(shí)在乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌等中呈上調(diào)表達(dá)，在正常組織中呈下調(diào)表達(dá)。我們利用RTS技術(shù)大量表達(dá)了有活性的BRCAA1蛋白。研究表明，BRCAA1蛋白，是Rb binding protein家族中的一個成員，具有調(diào)節(jié)Rb蛋白的功能，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化的功能。我們用GCG分析軟件(Genetics ComputerGroup，USA)分析了BRCAA1蛋白的hydrophilicity，surface probability，flexibility，antigen index，secondary structure and glycosyl.根據(jù)預(yù)測結(jié)果，定位于乳腺癌細(xì)胞漿，它的氨基酸序列位于第610-619位點(diǎn)之間，存在一個新的抗原表位，它的肽序列為SSKKQKRSHK。
我們用此抗原表位肽從患者血清中篩選出了陽性血清。我們也制備了相應(yīng)抗體，用ELISA方法檢測了此抗原表位肽相應(yīng)抗體在乳腺癌患者的血清與健康者血清之間的滴度水平，結(jié)果表明乳腺癌患者的血清滴度水平顯著高于健康患者，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.01)。免疫沉淀試驗(yàn)與競爭性抑制試驗(yàn)表明SSKKQKRSHK是最短的有效抗原表位肽。免疫組織化學(xué)染色表明此抗原表位定位于乳腺癌細(xì)胞漿。60例樣本篩查表明，此抗原表位肽的表達(dá)與雌激素受體、孕激素受體的表達(dá)狀態(tài)密切相關(guān)，與乳腺癌患者的轉(zhuǎn)移預(yù)后高度密切相關(guān)。因此，此抗原表位肽及其相應(yīng)抗體對乳腺癌患者具有初步篩查、輔助診斷、預(yù)測患者預(yù)后的功能。
研究表明，BRCAA1蛋白可能是Rb binding protein家族中的一個成員，具有調(diào)節(jié)Bb蛋白的功能。Bb蛋白是一個重要的抗癌基因蛋白，具有調(diào)控細(xì)胞周期與細(xì)胞生長分化的功能。因此，BRCAA1蛋白可能也具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長與分化的功能。因此，此蛋白具有潛在的治療價值。
結(jié)合一些診斷技術(shù)，如PCR技術(shù)，ELISA技術(shù)，基因芯片與蛋白芯片技術(shù)，利用此蛋白及所篩選出的抗原表位肽，可開發(fā)出系列診斷試劑盒，或作為診斷芯片的靶基因或靶蛋白，具有臨床應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1.一個具有診斷和治療乳腺癌作用的BRCAA1蛋白和抗原表位肽，其特征是一個新的乳腺癌相關(guān)抗原蛋白BRCAA1，即brcaal基因，被表示為AF208045，1q42.1-q43.全長93.857kb，包含18個外顯子與17個內(nèi)含子；一個抗原表位肽，它的肽序列為SSKKQKRSHK，定位于乳腺癌細(xì)胞漿，它的氨基酸序列被識別為NO.610--619sitesin BRCAA1 protein.
2.如權(quán)利要求1的一個具有診斷和治療乳腺癌作用的BRCAA1蛋白和抗原表位肽，其特征是所述的一個新的乳腺癌相關(guān)抗原蛋白BRCAA1是Rb結(jié)合蛋白家族的成員之一，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化的功能.
3.如權(quán)利要求1的一個具有診斷和治療乳腺癌作用的BRCAA1蛋白和抗原表位肽，其特征是一個乳腺癌抗原表位肽SSKKQKRSHK，被識別為NO.610--619sites in BRCAA1 protein，對乳腺癌患者具有早期血清學(xué)診斷，初步篩查，輔助診斷治療，預(yù)測患者預(yù)后的功能.
4.如權(quán)利要求1和權(quán)利要求2、3的一個具有診斷和治療乳腺癌作用的BRCAA1蛋白和抗原表位肽，其特征是所述的BRCAA1蛋白和抗原表位SSKKQKRSHK肽與其相對應(yīng)的基因片段可作為ELiSA、免疫-PCR技術(shù)、基因芯片與蛋白芯片上的靶基因或靶蛋白.
全文摘要
本發(fā)明是利用基因差異篩選技術(shù)，從乳腺癌患者組織標(biāo)本中篩選出一個乳腺癌相關(guān)抗原基因brcaal基因(brcaal，No.AF208045，1q42.1－q43)此基因的相應(yīng)蛋白BRCAAI蛋白被表達(dá)，它的功能與Rb結(jié)合蛋白密切相關(guān)，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化的功能；運(yùn)用計(jì)算機(jī)軟件預(yù)測技術(shù)結(jié)合臨床試驗(yàn)從乳腺癌相關(guān)抗原基因brcaal對應(yīng)的蛋白中識別出一個新的乳腺癌抗原表位，定位于乳腺癌細(xì)胞漿，它的氨基酸序列位于第610－619位點(diǎn)，它的肽序列為SSKKQKRSHK，它的血清抗體滴度在乳腺癌患者的血清中顯著高于健康人群；此抗原與乳腺癌患者的血液轉(zhuǎn)移與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，適用于臨床乳腺癌患者的早期血清學(xué)診斷與預(yù)后的判斷，此序列也可用作治療靶點(diǎn)。
文檔編號G01N33/96GK1657940SQ200410025128
公開日2005年8月24日 申請日期2004年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月11日
發(fā)明者崔大祥, 高天文, 金桂秋, 伍愛群 申請人:崔大祥, 高天文, 金桂秋