專利名稱：高滲三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色譜分析法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及氮酮的分析方法，具體地說，高滲三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色譜分析法。
背景技術(shù)：
三唑磷(triazophos；phentriazophos；Hostathion)，化學(xué)名稱為O，O-二乙基-O-(1-苯基-1，2，4-三唑-3-基)硫逐磷酸酯，是一種有機磷殺蟲劑，對糧、棉、果、蔬菜等主要農(nóng)作物上的許多重要害蟲，如螟蟲、稻飛虱、蚜蟲、紅蜘蛛、棉鈴蟲、菜育蟲、線蟲等，都有良好的防治效果。其殺卵作用明顯，對鱗翅目昆蟲卵的殺滅作用尤為突出。因為它的生產(chǎn)工藝比較簡單，得率較高，使用方便，在全國各地已大量推廣應(yīng)用[參見董競武，肖萍，鄭志清等.三唑磷殺蟲劑的亞慢性毒性研究[J].環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2003，20(2)126～128.]。
氮酮(月桂氮卓酮、十二烷氮卓酮、阿佐恩、laurocapram、Azone)，化學(xué)名稱1-正十二烷基氮雜環(huán)庚-2-酮，是70年代從一系列N-烴氮雜環(huán)酮中開發(fā)出來的新型高效透皮促進劑。氮酮作為高滲促進劑，對殺蟲劑、殺菌劑、除草劑，無論是乳劑還是可濕性粉劑，均有明顯的增效作用。其主要機理是影響生物角質(zhì)層中細(xì)胞壁的有序疊集結(jié)構(gòu)，并作用于皮下類脂質(zhì)，使其致密性改變，增加脂質(zhì)的流動性，促進有效藥物通過表皮層，進入害蟲、菌株和植物體內(nèi)。添加氮酮的農(nóng)藥制劑，能提高藥液的滲透和展著力，迅速均勻地浸潤植物葉面、害蟲、菌體表面，破壞其臘質(zhì)保護層，從而降低害蟲、菌體的抗性，明顯增加藥效。單位面積內(nèi)，加入氮酮后，有效成分用量降低50％，而藥效相當(dāng)于原劑量或高于原劑量。一般在農(nóng)藥中加入量為1％～1.5％，就可達到理想的藥效，從而可以降低藥害和環(huán)境污染，深得農(nóng)藥生產(chǎn)廠家和農(nóng)民的歡迎，同時產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟效益和社會效益。據(jù)國外文獻報道，氮酮對植物吸收N、P、K、Zn、Fe、Mo等營養(yǎng)元素和微量元素同樣具有極強的滲透活性，在微肥、葉面肥、植物生長調(diào)節(jié)劑方面，有著更為廣闊的潛在市場[參見甘霖，甘立謙.高含量氮酮在農(nóng)藥中的應(yīng)用研究[J].農(nóng)藥，2000，39(7)，14～15.]。
三唑磷(triazophos) 氮酮(Azone)目前對于氮酮的定量分析，氣相色譜法是常用的方法[參見中華人民共和國衛(wèi)生部藥典編寫委員會.中華人民共和國藥典[M].北京人民衛(wèi)生出版社，2000，66；焦鑄，周磊.氣相色譜法測定氮酮的條件探索[J].四川化工與腐蝕控制，2000，3(4)12；孫心齊，劉小強，魏敏等.毛細(xì)管氣相色譜法定量測定氮酮[J].化學(xué)研究，2003，14(4)60～62；張慧.氣相色譜測定月桂氮卓酮[J].化學(xué)工業(yè)于工程技術(shù)，2001，12(3)47～48.]，薄層層析法也有報道[參見孫心齊，王金中，康桂亭等.薄層色譜法定量測定氮酮[J].理化檢驗—化學(xué)分冊，2003，39(12)709～710，712.]，但這些方法都只是用于測定氮酮原藥純品的含量，而測定農(nóng)藥、藥物及其它制劑中作為滲透劑的微量的氮酮尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種測定高滲三唑磷乳油中微量的氮酮的高效液相色譜分析法(HPLC)。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種高滲三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色譜分析法，其高效液相色譜的條件是色譜柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流動相甲醇—水，體積比甲醇∶水＝92∶8；或乙腈—水，體積比乙腈∶水＝90∶10；流速1.0mL/min；柱溫30℃；檢測波長210nm；進樣量10μL。
本發(fā)明的高效液相色譜法能方便、快捷、準(zhǔn)確地測出高滲三唑磷乳油中的氮酮的含量，當(dāng)信噪比S/N＝3時，測得氮酮的最低檢出限，流動相為甲醇—水是2.5×10-4mg/mL，流動相為乙腈—水是1.25×10-5mg/mL。


圖1為流動相甲醇或乙腈的濃度對氮酮保留值的影響，1.甲醇—水；2.乙腈—水；圖2為氮酮的紫外—可見光譜；圖3為氮酮的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，a.流動相甲醇—水(92∶8，v/v)；b.流動相乙腈—水(90∶10，v/v)；圖4為氮酮對照品和高滲三唑磷乳油樣品的色譜圖，a.氮酮標(biāo)準(zhǔn)品(S/N＝1000)，流動相甲醇—水(92∶8，v/v)；b.氮酮標(biāo)準(zhǔn)品(S/N＝4500)，流動相乙腈—水(90∶10，v/v)；c.高滲三唑磷乳油(S/N＝1000)，流動相甲醇—水(92∶8，v/v)；d.高滲三唑磷乳油(S/N＝4500)，流動相乙腈—水(90∶10，v/v)。峰1為氮酮峰。
具體實施例方式
1儀器、試劑與藥品1.1儀器Varian5060型高效液相色譜儀，配有Rheodyne7725i六通進樣閥，Waters486型紫外—可見分光光度檢測器；大連江申分離科學(xué)技術(shù)公司JS-3050色譜工作站；四川儀表廠Type3066筆式記錄儀。Waters Alliance2695型高效液相色譜儀，996型二極管陣列檢測器(PAD)。
1.2試劑與藥品氮酮對照品(95％)；高滲三唑磷乳油(1.5％)；甲醇(HPLC級)；乙腈(HPLC級)；實驗中流動相和溶液用水均為娃哈哈純凈水。
1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制準(zhǔn)確稱取50.00mg氮酮對照品，置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為2.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別精密移取適量儲備液，用甲醇逐級稀釋成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
1.4樣品的配制將樣品搖勻后，移取38μL三唑磷乳油(約30mg)，置于25mL的容量瓶中，準(zhǔn)確稱取其質(zhì)量后，用甲醇溶解，定容至刻度，搖勻備用。
2.色譜條件的選擇2.1有機溶劑濃度的優(yōu)化和比較流動相中甲醇和乙腈比例對氮酮的保留值有明顯的影響，圖1比較了氮酮的容量因子k’與甲醇和乙腈濃度的關(guān)系。
從圖中可以看出，對于甲醇—水體系，隨著甲醇比例的下降，氮酮的保留時間迅速增大；相比較，在乙腈—水體系下，隨著乙腈比例的下降，氮酮的保留時間增大的趨勢要平緩得多。兩條線在約90％的地方相交。以甲醇—水為流動相，當(dāng)體積比為92∶8時，氮酮和高滲三唑磷乳油中的成分能夠完全分離，保留時間較短；而以乙腈—水為流動相，當(dāng)體積比為92∶8時，乳油中有一個雜質(zhì)峰靠近氮酮的峰，干擾測定，當(dāng)體積比為90∶10時，該雜質(zhì)能夠夠與氮酮分離，但出峰時間較長。綜合考慮分離度和保留時間兩個因素，我們選擇的流動相分別為甲醇—水(92∶8)和乙腈—水(體積比為90∶10)。
2.2檢測波長的選擇用二極管陣列檢測器(PAD)采集氮酮的紫外—可見光譜(圖2)，從圖2中可以看出，氮酮的最大吸收波長為202.6nm，但考慮到在該最大吸收波長下基線噪聲較大，信噪比S/N較小，我們選擇210nm作為檢測波長。
2.3靈敏度和最低檢出限的比較本實驗在210nm下檢測，以甲醇—水體系作為流動相，背景吸收值大，基線噪音大，導(dǎo)致達到平衡狀態(tài)所需要的時間長，因此靈敏度比較低，最低檢出限為5.0×10-4mg/mL；以在乙腈—水體系為流動相，背景吸收值較小，基線噪音也小，達到平衡狀態(tài)需要的時間短，得到了更低的檢出限1.25×10-5mg/mL。
3樣品的測定3.1色譜條件色譜柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流動相甲醇—水(體積比92∶8)或乙腈—水(體積比為90∶10)；流速1.0mL/min；柱溫30℃；檢測波長210nm；進樣量10μL。
3.2氮酮的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線分別以甲醇—水(體積比為92∶8)、乙腈—水(體積比為90∶10)為流動相，在氮酮標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度0.001～0.1mg/mL、0.00005～0.1mg/mL范圍內(nèi)進行實驗，標(biāo)準(zhǔn)曲線均有良好的線性(r＝0.9998)(圖3)，回歸方程分別為Aazone＝-2344.74996+9.89565E7CAzone和A＝-4117.3892+8.71622E7CAzone。當(dāng)信噪比S/N＝3時，測得氮酮的最低檢出限分別為2.5×10-4mg/mL和1.25×10-5mg/mL。
3.3色譜圖在3.1的色譜條件下，氮酮對照品和高滲三唑磷乳油樣品的色譜圖如圖4所示。
3.4樣品的測定結(jié)果平行配制高滲三唑磷乳油樣品溶液三份，在相同的色譜條件下對每一份溶液重復(fù)進樣五次，測得峰面積取平均值，用外標(biāo)法計算含量，結(jié)果如表1所示。
表1樣品的測定結(jié)果(n＝3，％)樣品序號 甲醇+水(92∶8，v/v) 乙腈+水(90∶10，v/v)含量平均含量RSD含量 平均含量 RSD11.78 1.7221.781.780.32 1.72 1.72 0.3431.77 1.733.5回收率試驗對三唑磷乳油樣品進行氮酮的標(biāo)準(zhǔn)添加回收率試驗，測定結(jié)果見表2。結(jié)果表明，兩種流動相下氮酮的回收率分別為100.6％～102.4％和99.5％～102.8％。
表2氮酮的回收率(n＝3)流動相 本底濃度加入濃度測得濃度 回收率(％) RSD(％)(mg/L) (mg/L) (mg/L)甲醇+水20.43 10.00 30.56 100.6 0.14(92∶8，v/v) 20.57 20.00 40.75 100.9 0.1920.28 30.00 60.76 102.4 0.09乙腈+水19.80 10.00 29.85 100.3 0.13(90∶10，v/v) 19.94 20.00 39.83 99.50.0319.65 30.00 60.20 102.8 0.534結(jié)語本發(fā)明的高效液相色譜分析法，在兩種不同的流動相條件下，測定了高滲三唑磷乳油中氮酮的含量，操作簡單，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好。與甲醇—水流動相相比，乙腈—水流動相背景吸收較小，可以得到更低的最低檢出限，而且基線比較平穩(wěn)，盡管氮酮出峰時間稍長，但達到平衡狀態(tài)需要的時間較短，整體有效分析時間較短。考慮到乙腈的價格比甲醇要高出很多，所以對于一般的企業(yè)控制分析，使用甲醇—水體系更為經(jīng)濟。
權(quán)利要求
1.一種高滲三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色譜分析法，其特征是高效液相色譜的條件是色譜柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流動相甲醇—水，體積比甲醇∶水＝92∶8；或乙腈—水，體積比乙腈∶水＝90∶10；流速1.0mL/min；柱溫30℃；檢測波長210nm；進樣量10μL。
全文摘要
一種高滲三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色譜分析法，其高效液相色譜的條件是色譜柱Kromasil C
文檔編號G01N30/26GK1632561SQ200410065980
公開日2005年6月29日 申請日期2004年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月29日
發(fā)明者練鴻振, 蔡秀蘭 申請人:南京大學(xué)