專利名稱：同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的gc/ms內(nèi)標(biāo)檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類農(nóng)藥殘留的檢測方法，特別是涉及一種同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法。
二.
背景技術(shù)：
隨著我國加入WTO，在國外，出口農(nóng)產(chǎn)品受國外檢測技術(shù)壁壘封鎖的事件不斷發(fā)生如著名的菠菜出口日本被拒事件，茶葉出口歐盟受阻事件等；在國內(nèi)，食品安全問題也日益受到廣泛關(guān)注。為了接軌國際檢測領(lǐng)域、打破國外技術(shù)壁壘封鎖、保護(hù)食品安全、保障人民身體健康，國家以及各地區(qū)相繼出臺了一系列的質(zhì)量技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，如何能快速、高效、準(zhǔn)確地檢測出食品安全相關(guān)產(chǎn)品中所含有的有毒物質(zhì)是迫切需要解決的問題，高毒農(nóng)藥殘留的檢測更是當(dāng)務(wù)之急。
有機(jī)磷農(nóng)藥是農(nóng)藥中很重要的一類，它具有高效、殺蟲譜廣等特性，在世界各國均得到了廣泛而有效的應(yīng)用，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)防治病蟲害方面起了很大的作用。然而，這類農(nóng)藥往往具有較高的潛在毒性，對人的健康威脅極大。隨著有機(jī)磷農(nóng)藥使用量的逐年增加，對環(huán)境的污染問題也日趨嚴(yán)重。蔬菜、水果、糧食等食品是人們生活中的必需品，且恰恰正是這些必需品，一直被直接或間接地用到有機(jī)磷農(nóng)藥，如果食用了被有機(jī)磷農(nóng)藥污染并有過量殘留的農(nóng)產(chǎn)品，輕者會給人們的身體健康帶來不良影響，重者可能導(dǎo)致急性中毒甚至危及生命。因吃有毒的蔬菜而引起的傷害之事時有所聞，有機(jī)磷類農(nóng)藥引起的食物中毒事件也是所有農(nóng)藥中毒事件中最多、后果最嚴(yán)重的一種，這也引起了社會的普遍關(guān)注。因此，對農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測一直是農(nóng)業(yè)、環(huán)保、衛(wèi)生、商檢部門的重要任務(wù)，更是衛(wèi)生、公安部門應(yīng)急突發(fā)事件檢測的首要任務(wù)。傳統(tǒng)的檢測方法大多采用酶抑制法和色譜分離技術(shù)，酶抑制法測定靈敏度相對較低、并且不能對各種有機(jī)磷進(jìn)行分品種定性定量，只能作為篩選方法；色譜分離技術(shù)包括薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜等分析技術(shù)，其原理是利用特征吸收峰在色譜上的保留時間和相應(yīng)的峰信號強(qiáng)度來判定農(nóng)藥種類及其含量，這類方法操作繁瑣、耗時，因?yàn)閮H依據(jù)保留時間定性，可能會將雜質(zhì)峰誤判為是待測組分，定性可靠性和定量準(zhǔn)確度相對較差，而且不是國際公認(rèn)確證方法，不利于實(shí)地操作。
近年氣相色譜-質(zhì)譜測定方法，又稱GC/MS法開始在我國農(nóng)殘分析領(lǐng)域開發(fā)應(yīng)用，資料顯示，開發(fā)應(yīng)用最廣的是GC/MS外標(biāo)法，它是一種簡便、快速的絕對定量方法，具體作法是首先用標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列，在與欲測組分相同的色譜、質(zhì)譜條件下，等體積準(zhǔn)確量進(jìn)樣，利用質(zhì)譜圖解析分子結(jié)構(gòu)對待測物進(jìn)行定性，測量待測物峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。在測定樣品中的組分含量時，要用與繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線完全相同的色譜、質(zhì)譜條件作出色譜圖，測量色譜峰的峰面積或峰高，然后根據(jù)峰面積和峰高在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上直接查出進(jìn)入色譜柱中樣品組分的濃度。其優(yōu)點(diǎn)是定性準(zhǔn)確度高于普通色譜方法，在GC/MS儀器狀態(tài)一直保持穩(wěn)定、測定條件完全一致情況下，繪制好標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算時可直接從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上讀出樣品中含量，這對大量樣品分析十分合適。其缺點(diǎn)是每次樣品分析的色譜、質(zhì)譜條件(檢測器的響應(yīng)性能，柱溫度，流動相流速及組成，進(jìn)樣量，柱效、質(zhì)譜離子源污染程度等)很難完全相同，因此容易出現(xiàn)較大誤差；另外，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制時，一般使用欲測組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品，因此對樣品前處理過程中欲測組分的變化無法進(jìn)行補(bǔ)償，難以控制測定質(zhì)量和判斷由此產(chǎn)生的誤差大小。
針對這種情況，技術(shù)人員有時采用內(nèi)標(biāo)法檢測農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留，如中國專利(授權(quán)公告號為CN1164941C，專利號為01127140.X)公開了一種“禽蛋中微量有機(jī)氯農(nóng)藥及多氯聯(lián)苯殘留量的測定方法”，它以PCB2和PCB209為內(nèi)標(biāo)，運(yùn)用氣相色譜法進(jìn)行檢測，但是它僅僅是在上機(jī)測定的溶液中加入內(nèi)標(biāo)，以獲得相應(yīng)的校正曲線，減少測量儀器狀態(tài)變化帶來的誤差，它在樣品前處理過程中沒有加入內(nèi)標(biāo)物，無法補(bǔ)償在樣品的制備和處理過程中殘留農(nóng)藥的損失，也就無法得到準(zhǔn)確的殘留物的含量；同時由于是氣相色譜方法，同樣存在常規(guī)氣相色譜方法僅靠保留時間定性可能將雜質(zhì)峰誤判為待測物的缺陷。
三.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的克服當(dāng)前檢測方法的不足，提供一種檢測速度快、對多殘留有機(jī)磷無測定歧視，結(jié)果準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、靈敏度達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)要求的、針對食品中多殘留有機(jī)磷的、GC/MS內(nèi)標(biāo)同時測定方法，以適應(yīng)衛(wèi)生和公安應(yīng)急檢測，適應(yīng)農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、商檢、公安、技術(shù)監(jiān)督、海關(guān)、環(huán)保、教育、科研的基層分析單位日常檢測的需要。
本發(fā)明的技術(shù)方案是一種同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，包括樣品前處理過程、標(biāo)準(zhǔn)及曲線配制過程，以及氣相色譜-質(zhì)譜儀定性、定量測定過程，其中樣品前處理過程時，先將樣品混勻、細(xì)化，稱取樣品5-20g后，加入內(nèi)標(biāo)及回收率指示物，內(nèi)標(biāo)及回收率指示物加入量應(yīng)保證最終上機(jī)測定有機(jī)相中濃度為2.5-5.0mg/L，混勻后加入20-30ml混合溶劑避光超聲提取20-30分鐘，濾渣用20-30ml混合溶劑振搖提取，剩余殘?jiān)儆?0-30ml有機(jī)溶劑洗滌，所得全部濾液脫水后抽濾濃縮，后用混合溶劑定容至2.5-5ml，高速離心，取上清液進(jìn)行測定，所述內(nèi)標(biāo)為氘代屈、氘代蓖和氘代菲中的一種或兩種或三種，所述回收率指示物為1，3二甲基-2-硝基苯或氘代蓖，所述混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝4～8∶0.3～0.7∶0.8～1.5；標(biāo)準(zhǔn)及曲線配制過程配制各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制過程中同時添加所述內(nèi)標(biāo)及回收率指示物，并保證所述內(nèi)標(biāo)及回收率指示物的添加量與樣品最終上機(jī)測定的有機(jī)相中濃度一致，然后分別注入氣相色譜-質(zhì)譜儀中進(jìn)行測定，以標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)化合物定量離子與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)定量離子峰面積比值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
所述氘代屈對色譜保留時間在15分鐘以前的有機(jī)磷類化合物進(jìn)行測定質(zhì)控或進(jìn)行誤差校正，氘代蓖對色譜保留時間在15-25分鐘之間的有機(jī)磷類化合物進(jìn)行測定質(zhì)控或進(jìn)行誤差校正，氘代菲對色譜保留時間在25分鐘以后的有機(jī)磷類化合物進(jìn)行測定質(zhì)控或進(jìn)行誤差校正。
所述回收率指示物1，3二甲基-2-硝基苯對物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)相對較不穩(wěn)定的有機(jī)磷的測定準(zhǔn)確度進(jìn)行質(zhì)量控制，回收率指示物氘代蓖對物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)相對穩(wěn)定的有機(jī)磷的測定準(zhǔn)確度進(jìn)行質(zhì)量控制，兩種回收率指示物同時對測定全過程進(jìn)行質(zhì)量控制。
所述的混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝6∶0.5∶1.0，所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷。
所述的脫水、凈化過程為所得的全部濾液過無水硫酸鈉、硅藻土柱脫水、凈化，濃縮過程在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行。
所述的離心過程為首先將濃縮后的有機(jī)相用混合溶劑定容至2.5-5ml，然后在3500r/min以上轉(zhuǎn)速條件下離心3～10分鐘，然后再取上清液在16000r/min條件下，高速離心2～4分鐘。
所述氣相色譜-質(zhì)譜儀定性、定量測定過程中氣相色譜-質(zhì)譜儀的測定工作條件為a.色譜條件色譜柱為DB5-MS柱(DB17-MS，DB-1)，30m×0.32mm(0.25mm)×0.25μm，載氣為氦氣，進(jìn)樣口溫度為270℃，進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣時間1min，進(jìn)樣量2μl，柱流量為1.78ml/min，以壓力控制模式，分流比為10，升溫程序?yàn)?0℃保持1.0min，以40℃/min升到110℃，以5.0℃/min升到190℃，以3℃/min升到210℃，以5.0℃/min升到220℃，以40℃/min升到265℃保持5min；b.質(zhì)譜條件離子源溫度200℃，接口溫度250℃，電子轟擊能70eV，檢測器電壓1.09Kv，溶劑切除時間3.0min，檢測方式SCAN(全掃描)，掃描時間段3.50-33.00min，掃描質(zhì)量范圍40-440，掃描間隔0.5sec。
所述的氣相色譜-質(zhì)譜儀的全掃描方式定性方法是采用全掃描譜庫檢索與相應(yīng)保留時間提取質(zhì)量色譜圖進(jìn)行特征選擇離子指紋圖譜定性相結(jié)合的方法定性；選擇離子檢測模式定性標(biāo)準(zhǔn)，要求相應(yīng)保留時間下，特征鑒定離子中，至少3個特征離子的豐度比例變化不大于標(biāo)準(zhǔn)的相同離子豐度比例的±20％。
所述的氣相色譜-質(zhì)譜儀的定量方法為選擇各目標(biāo)化合物特征離子中豐度較高噪聲相對較低的離子為定量離子，測定時，吸取添加有內(nèi)標(biāo)及回收率指示物的試劑空白溶液及樣品溶液，分別注入氣相色譜-質(zhì)譜儀中，定性確證有機(jī)磷農(nóng)藥品種后，對定量離子進(jìn)行峰積分，再配制對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品測得比值與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量；或者以內(nèi)標(biāo)法配制與待測目標(biāo)化合物濃度接近的單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)，將樣品測得比值與單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)比較定量。
本發(fā)明的有益效果是1.本發(fā)明克服了GC/MS外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法中，每次樣品分析時色譜、質(zhì)譜條件很難完全相同而引起的誤差把內(nèi)標(biāo)和回收率指示物加到標(biāo)準(zhǔn)和樣品中，使欲測組分、內(nèi)標(biāo)和回收率指示物在同一色譜條件下進(jìn)行分析，通過進(jìn)行誤差校正，可使定量的準(zhǔn)確度提高。
2.本發(fā)明克服了GC/MS外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法中由于進(jìn)樣量不準(zhǔn)確產(chǎn)生的誤差因?yàn)閮?nèi)標(biāo)法測定中的欲測組分、內(nèi)標(biāo)和回收率指示物在同一檢測條件下響應(yīng)值之比與進(jìn)樣量多少無關(guān)，而內(nèi)標(biāo)法的定量依據(jù)是響應(yīng)值之比。
3.本發(fā)明在一定程度上克服了GC/MS外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法中樣品前處理過程產(chǎn)生的誤差在樣品前處理開始即加入內(nèi)標(biāo)和回收率指示物，這樣可以對包括樣品前處理過程在內(nèi)的整個操作過程進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，可以對操作失誤和儀器狀態(tài)異常變化帶來的偶然誤差進(jìn)行正確判斷，可以通過回收率指示物的回收率判斷和校正測定誤差。
4.本發(fā)明采用多內(nèi)標(biāo)分段質(zhì)控法，克服了普通內(nèi)標(biāo)法采用單一內(nèi)標(biāo)對多種化合物同時進(jìn)行測定質(zhì)控時，由于難以兼顧造成質(zhì)控效果不佳，甚至使部分化合物失控的問題本發(fā)明內(nèi)標(biāo)法同時加入氘代屈，氘代蓖，氘代菲多個內(nèi)標(biāo)指示物，其中氘代屈對色譜保留時間在15分鐘以前(色譜柱溫度在130℃-150℃之間)的有機(jī)磷類化合物進(jìn)行測定質(zhì)控或進(jìn)行誤差校正，氘代蓖對色譜保留時間在15-20分鐘之間(色譜柱溫度在150℃-200℃之間)的有機(jī)磷類化合物進(jìn)行測定質(zhì)控或進(jìn)行誤差校正，氘代菲對色譜保留時間在25分鐘以后(色譜柱溫度在210℃-265℃之間)的有機(jī)磷類化合物進(jìn)行測定質(zhì)控或進(jìn)行誤差校正，即使一次同步測定有機(jī)磷的種類提高到30多種，也不會出現(xiàn)失控現(xiàn)象，對提高多成份同時定量分析的準(zhǔn)確度和精度做出了貢獻(xiàn)。
5.本發(fā)明采用添加回收率指示物的內(nèi)標(biāo)法，克服了普通內(nèi)標(biāo)法對樣品操作失誤和儀器狀態(tài)偶然異常變化造成的偶然誤差難以及時進(jìn)行正確判斷的缺點(diǎn)，提高了方法回收率的穩(wěn)定性，解決了測定失控的判斷問題采用氘代比作為回收率指示物，對性質(zhì)相對穩(wěn)定的有機(jī)磷化合物測定準(zhǔn)確度進(jìn)行質(zhì)量控制或進(jìn)行誤差校正，采用1，3二甲基-2硝基苯作為回收率指示物，對性質(zhì)相對較不穩(wěn)定的有機(jī)磷化合物測定準(zhǔn)確度進(jìn)行質(zhì)量控制或進(jìn)行誤差校正，由于針對不同性質(zhì)有機(jī)磷采用不同的回收率指示物，使測定誤差直接反映在回收率指示物的測定結(jié)果上，不僅可使操作人員及時了解測定過程產(chǎn)生的誤差大小、測定結(jié)果的準(zhǔn)確度，并可根據(jù)回收率指示物的回收率在一定程度上對測定結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼`差校正，對提高多成份同時定量分析的準(zhǔn)確度做出了貢獻(xiàn)。
6.本發(fā)明研發(fā)了較大口徑(30m×0.32mm×0.25μm)毛細(xì)管柱測定多種有機(jī)磷目標(biāo)化合物的色譜-質(zhì)譜技術(shù)。由于改用較大口徑毛細(xì)管柱對目標(biāo)化合物進(jìn)行色譜分離，解決了多種有機(jī)磷目標(biāo)化合物同時測定色譜分離難的問題，改善了含N化合物在常規(guī)毛細(xì)管柱上色譜峰拖尾帶來的相近峰部分重疊現(xiàn)象，促進(jìn)了有機(jī)磷化合物之間、有機(jī)磷化合物與樣品基質(zhì)之間的分離，使得簡化、優(yōu)化的前處理方法得以實(shí)施，可大大提高樣品前處理速度，對應(yīng)急有機(jī)磷毒檢十分有利。
7.本發(fā)明研發(fā)的多種有機(jī)磷農(nóng)殘的GC/MS法SCAN\SIM檢測方式的全面、詳細(xì)的檢測技術(shù)，適用于不同儀器狀態(tài)、不同溶劑介質(zhì)、常見樣品基質(zhì)中的多種有機(jī)磷目標(biāo)化合物的同時測定。該發(fā)明SIM檢測方式指紋圖譜技術(shù)對定性確證提供了可靠質(zhì)量保證，不僅解決了常量多殘留有機(jī)磷同時準(zhǔn)確定性測定中存在的問題，也解決了低濃度有機(jī)磷多殘留的定性問題，為最大限度地減少復(fù)雜樣品基質(zhì)雜質(zhì)帶來的測定干擾，提高測定技術(shù)方法的靈敏度作出了貢獻(xiàn)。
8.本發(fā)明的發(fā)明人通過大量試驗(yàn)確定了多種有機(jī)磷目標(biāo)化合物和內(nèi)標(biāo)及回收率指示物的可靠定量離子，解決了復(fù)雜樣品基質(zhì)下多殘留有機(jī)磷質(zhì)譜準(zhǔn)確定量問題。其技術(shù)原理是，保留時間內(nèi)真正由殘留農(nóng)藥裂解的特征離子碎片，是質(zhì)譜儀定量的依據(jù)。
9.本發(fā)明研發(fā)了適用于普通實(shí)驗(yàn)室的混合溶劑、分步提取的快速前處理方法，并研發(fā)了適用于常規(guī)樣品的簡單優(yōu)化的前處理凈化過程，解決了基層應(yīng)用單位在前處理設(shè)備落后情況下，因?yàn)榍疤幚磉^程復(fù)雜、周期長而出現(xiàn)樣品污染、樣品損失，造成測定回收率不穩(wěn)定、結(jié)果不準(zhǔn)確，不能正常大量開展工作的問題，提高了測定效率、測定方法靈敏度和準(zhǔn)確度。單樣品前處理測定時間由原來的幾個小時縮短為20-40分鐘。其技術(shù)原理是，在樣品前處理方面，只有處理樣品的過程簡單、處理速度快、引進(jìn)的誤差小、對欲測定組分的選擇性高，樣品回收率才會好，才能保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確。
10.本發(fā)明具有廣泛的社會應(yīng)用價值。它不僅能滿足衛(wèi)生部門、公安部門應(yīng)對與有機(jī)磷中毒有關(guān)的突發(fā)事件的應(yīng)急檢測的需要，也可應(yīng)用于農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)，為鑒定農(nóng)藥組分、定量農(nóng)藥純度服務(wù)，可應(yīng)用于環(huán)保等公用事業(yè)單位進(jìn)行環(huán)境有機(jī)磷污染調(diào)查，應(yīng)用于大專院校為有機(jī)磷生命科學(xué)的研究服務(wù)，還可應(yīng)用于其他研究機(jī)構(gòu)進(jìn)行與有機(jī)磷分析有關(guān)的研究技術(shù)服務(wù)，是一種快速、準(zhǔn)確、有效的定性、定量確證檢驗(yàn)技術(shù)。
本發(fā)明有益效果的具體數(shù)據(jù)說明參見表一、表二、表三。表一和表二是用同一臺儀器，在同樣的實(shí)驗(yàn)條件下，對不同濃度的目標(biāo)化合物混合標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行測定的結(jié)果，分別以外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行結(jié)果比較。從表二外標(biāo)法結(jié)果可以看出甲拌磷等十余種目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)系列線性很差，這是由于不同濃度混合標(biāo)準(zhǔn)放置時間不同、測定時儀器狀態(tài)變化、不同人員進(jìn)樣差別等引起的測定誤差帶來的結(jié)果；由于同時進(jìn)行了內(nèi)標(biāo)法測定，同樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果以內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行校正后，上述外標(biāo)法的缺點(diǎn)即得以克服，標(biāo)準(zhǔn)系列線性良好，見表一。表三是以回收率指示物氘代蓖為代表進(jìn)行的方法精密度測定實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對同一濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)(5mg/L)，每天測定一次，連續(xù)25天的測定中，作為回收率指示物的氘代蓖峰面積與內(nèi)標(biāo)氘代屈峰面積比值范圍0.497±0.0337，氘代蓖峰面積與內(nèi)標(biāo)氘代菲的峰面積比值范圍2.230±0.056，氘代蓖峰面積與內(nèi)標(biāo)氘代屈、氘代菲的峰面積比值的RSD分別為7.05％和4.84％，證明該內(nèi)標(biāo)法具有良好的精密度；同樣的標(biāo)準(zhǔn)若以外標(biāo)法進(jìn)行測定定量，氘代蓖峰面積絕對值范圍為83383-3548244單位，同一標(biāo)準(zhǔn)不同時間測定定量結(jié)果最大誤差達(dá)到55％，測定精度與內(nèi)標(biāo)法根本無法相比。
四.
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一.試驗(yàn)儀器島津GCMS-QP2010氣相色譜質(zhì)譜儀，EI源；粉碎機(jī)；組織搗碎機(jī)；超聲波提取器；電動振蕩器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；具塞錐形瓶，250mL；分液漏斗250mL。臺式離心機(jī)(4000r/min以上)；GL--16高速臺式離心機(jī)(16000r/min以上)；旋渦式振蕩器；加樣槍(100μl-1000ul；10μl---100μl；2μl-20μl；)槍頭用前以二氯甲烷及混合溶劑處理。
標(biāo)準(zhǔn)化合物及試劑內(nèi)標(biāo)指示物及回收率指示物為氘代屈、氘代蓖、氘代菲和1，3二甲基-2-硝基苯，有機(jī)溶劑為二氯甲烷，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝6∶0.5∶1。氘代屈、氘代蓖、氘代菲分別用D8、D10、D12表示。
小麥樣品的制備方法取1公斤有代表性的小麥樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過40目篩后，備用。
提取和凈化過程稱取上述試樣20g，精確至0.001g，置于具塞錐形瓶中，分別加入內(nèi)標(biāo)及回收率指示物氘代屈、氘代蓖、氘代菲和1，3二甲基-2-硝基苯，各25μg，混勻，加入30mL混合溶液，避光超聲提取0.5h，抽濾，殘?jiān)?0mL混合溶劑振搖提取、洗滌一次，合并濾液，剩余殘?jiān)儆?0mL二氯甲烷分?jǐn)?shù)次洗滌，過濾，合并所有濾液，過無水硫酸鈉，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，用混合溶劑定容至5mL，3500r/min以上離心10分鐘；取上清液1mL轉(zhuǎn)入1.5ml一次性離心試管中，16000r/min，高速離心2分鐘；取澄清有機(jī)相2μl進(jìn)樣。
氣相色譜--質(zhì)譜儀測定條件及定性定量方法1.色譜條件色譜柱DB5-MS柱(DB17-MS，DB-1)30m×0.32mm(0.25mm)×0.25μm載氣氦氣；進(jìn)樣口溫度270℃；進(jìn)樣方式不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣時間1min；進(jìn)樣量2μl；柱流量1.78(1.0)ml/min，壓力控制模式；分流比10；升溫程序60℃保持1.0min，以40℃/min升到110℃，以5.0℃/min升到190℃，以3℃/min升到210℃，以5.0℃/min升到220℃，以40℃/min升到265℃保持5min。
2.質(zhì)譜條件離子源溫度200℃；接口溫度250℃；電子轟擊能70eV；檢測器電壓1.09Kv，溶劑切除時間3.0min
檢測方式SCAN(全掃描)，掃描時間段3.50-33.00min；SIM(選擇離子掃描)，掃描時間段、選擇離子見表四；掃描質(zhì)量范圍40-440；掃描間隔0.5sec；3.氣相色譜--質(zhì)譜儀定性定量方法全掃描檢測模式定性標(biāo)準(zhǔn)采用全掃描譜庫檢索與相應(yīng)保留時間提取質(zhì)量色譜圖進(jìn)行特征選擇離子定性相結(jié)合的方法定性；選擇離子檢測模式定性標(biāo)準(zhǔn)按歐盟殘留分析要求選確認(rèn)鑒定點(diǎn)數(shù)，相應(yīng)保留時間下，要求特征離子中，至少3個特征離子的豐度變化，不大于標(biāo)準(zhǔn)的相同離子豐度的±20％。
定量計(jì)算選擇豐度較高樣品及溶劑基質(zhì)中噪聲相對較低的離子為定量離子。以標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)化合物定量離子與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)定量離子峰面積比值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；待測目標(biāo)化合物定量離子峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)定量離子峰面積比值，扣除空白后，與相應(yīng)目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線或與待測目標(biāo)化合物濃度接近的單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)的比值比較定量。各待測目標(biāo)化合物對應(yīng)參照內(nèi)標(biāo)、對應(yīng)回收率指示物見表五。
樣品的測定及分析結(jié)果表述測定吸取2.0μl添加有內(nèi)標(biāo)及回收率指示物的試劑空白溶液及樣品溶液，分別注入GC/MS中，定性確證有機(jī)磷農(nóng)藥品種后，對定量離子進(jìn)行峰積分；再分別配制各種濃度的對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液(配制同時添加內(nèi)標(biāo)及回收率指示物)，分別注入GC/MS中，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品測得比值與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量；或者以單點(diǎn)法定量。
分析結(jié)果的表述X＝A×V×1000/m式中X----樣品中有機(jī)磷的含量，mg/kg；A----進(jìn)樣樣液中有機(jī)磷的含量(由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出)，μg；V----樣品提取液濃縮定容體積，mL；m----樣品質(zhì)量，g。
上述小麥樣品中測定結(jié)果為檢出氧化樂果0.0411mg/kg，甲胺磷0.0052mg/kg，未檢出其他有機(jī)磷農(nóng)藥。
實(shí)施例二本實(shí)施例與實(shí)施例一基本相同，相同之處不重述，不同之處在于取有代表性的大米為樣品，加入的內(nèi)標(biāo)及回收率指示物氘代屈、氘代蓖、氘代菲，各25μg，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝7∶0.6∶1.5。
上述大米樣品測定結(jié)果為檢出氧化樂果0.0356mg/kg，未檢出其他有機(jī)磷農(nóng)藥。
實(shí)施例三本實(shí)施例與實(shí)施例一基本相同，相同之處不重述，不同之處在于取有代表性的玉米為樣品，分別加入內(nèi)標(biāo)及回收率指示物氘代屈、氘代蓖、和1，3二甲基-2-硝基苯，各25μg，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝5∶0.4∶0.8。
上述玉米樣品測定結(jié)果為檢出甲胺磷0.0032mg/kg，未檢出其他有機(jī)磷農(nóng)藥。
實(shí)施例四菜花樣品中有機(jī)磷的測定。本實(shí)施例與實(shí)施例一基本相同，相同之處不重述，不同之處在于取有代表性的菜花樣品1公斤左右，丟掉非可食用部分后，剁碎或經(jīng)組織粉碎制成試樣，稱取試樣20g，精確至0.001g，置于具塞錐形瓶中，分別加入內(nèi)標(biāo)及回收率指示物各25μg，混勻，加無水硫酸鈉吸水至混合樣品干燥成散狀，其余同實(shí)施例一。
上述菜花樣品測定結(jié)果為檢出甲基對硫磷0.0067mg/kg，未檢出其他有機(jī)磷農(nóng)藥。
實(shí)施例五西紅柿樣品中有機(jī)磷的測定。本實(shí)施例與實(shí)施例四基本相同，相同之處不重述，不同之處在于加入的內(nèi)標(biāo)及回收率指示物氘代屈、氘代蓖、氘代菲，各25μg，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝4∶0.3∶1.5。上述西紅柿樣品測定結(jié)果為檢出二嗪農(nóng)0.0581mg/kg，未檢出其他有機(jī)磷農(nóng)藥。
實(shí)施例六青菜樣品中有機(jī)磷的測定。本實(shí)施例與實(shí)施例四基本相同，相同之處不重述，不同之處在于加入的內(nèi)標(biāo)及回收率指示物氘代屈、氘代蓖，各25μg，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝8∶0.8∶1.5。上述青菜樣品測定結(jié)果為檢出殺撲磷0.1491mg/kg，未檢出其他有機(jī)磷農(nóng)藥。
實(shí)施例七食物中毒樣品中有機(jī)磷的測定。本實(shí)施例與實(shí)施例一基本相同，相同之處不重述，不同之處在于取中毒患者的嘔吐物5克，所有濾液過無水硫酸鈉及硅藻土柱凈化。其測定結(jié)果為檢出甲胺磷10.5491mg/kg，未檢出其他有機(jī)磷農(nóng)藥。
表一內(nèi)標(biāo)、回收率指示物和目標(biāo)化合物內(nèi)標(biāo)法測定曲線



表四選擇離子掃描時間通帶及選擇離子


權(quán)利要求
1.一種同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，包括樣品前處理過程、標(biāo)準(zhǔn)及曲線配制過程，以及氣相色譜-質(zhì)譜儀定性、定量測定過程，其特征是樣品前處理過程時，先將樣品混勻、細(xì)化，稱取樣品5-20g后，加入內(nèi)標(biāo)及回收率指示物，內(nèi)標(biāo)及回收率指示物加入量應(yīng)保證最終上機(jī)測定有機(jī)相中濃度為2.5-5.0mg/L，混勻后加入20-30ml混合溶劑避光超聲提取20-30分鐘，濾渣用20-30ml混合溶劑振搖提取，剩余殘?jiān)儆?0-30ml有機(jī)溶劑洗滌，所得全部濾液脫水后抽濾濃縮，后用混合溶劑定容至2.5-5ml，高速離心，取上清液進(jìn)行測定，所述內(nèi)標(biāo)為氘代屈、氘代蓖和氘代菲中的一種或兩種或三種，所述回收率指示物為1，3二甲基-2-硝基苯或氘代蓖，所述混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝4～8∶0.3～0.7∶0.8～1.5；標(biāo)準(zhǔn)及曲線配制過程配制各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制過程中同時添加所述內(nèi)標(biāo)及回收率指示物，并保證所述內(nèi)標(biāo)及回收率指示物的添加量與樣品最終上機(jī)測定的有機(jī)相中濃度一致，然后分別注入氣相色譜-質(zhì)譜儀中進(jìn)行測定，以標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)化合物定量離子與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)定量離子峰面積比值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，其特征是所述氘代屈對色譜保留時間在15分鐘以前的有機(jī)磷類化合物進(jìn)行測定質(zhì)控或進(jìn)行誤差校正，氘代蓖對色譜保留時間在15-25分鐘之間的有機(jī)磷類化合物進(jìn)行測定質(zhì)控或進(jìn)行誤差校正，氘代菲對色譜保留時間在25分鐘以后的有機(jī)磷類化合物進(jìn)行測定質(zhì)控或進(jìn)行誤差校正。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，其特征是所述回收率指示物1，3二甲基-2-硝基苯對物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)相對較不穩(wěn)定的有機(jī)磷的測定準(zhǔn)確度進(jìn)行質(zhì)量控制，回收率指示物氘代蓖對物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)相對穩(wěn)定的有機(jī)磷的測定準(zhǔn)確度進(jìn)行質(zhì)量控制，兩種回收率指示物同時對測定全過程進(jìn)行質(zhì)量控制。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，其特征是所述的混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝6∶0.5∶1.0，所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，其特征是所述的脫水、凈化過程為所得的全部濾液過無水硫酸鈉、硅藻土柱脫水、凈化，濃縮過程在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，其特征是，所述的離心過程為首先將濃縮后的有機(jī)相用混合溶劑定容至2.5-5ml，然后在3500r/min以上轉(zhuǎn)速條件下離心3～10分鐘，然后再取上清液在16000r/min條件下，高速離心2～4分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，其特征是所述氣相色譜-質(zhì)譜儀定性、定量測定過程中氣相色譜-質(zhì)譜儀的測定工作條件為a.色譜條件色譜柱為DB5-MS柱(DB17-MS，DB-1)，30m×0.32nm(0.25mm)×0.25μm，載氣為氦氣，進(jìn)樣口溫度為270℃，進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣時間1min，進(jìn)樣量2μl，柱流量為1.78ml/min，以壓力控制模式，分流比為10，升溫程序?yàn)?0℃保持1.0min，以40℃/min升到110℃，以5.0℃/min升到190℃，以3℃/min升到210℃，以5.0℃/min升到220℃，以40℃/min升到265℃保持5min；b.質(zhì)譜條件離子源溫度200℃，接口溫度250℃，電子轟擊能70eV，檢測器電壓1.09Kv，溶劑切除時間3.0min，檢測方式SCAN(全掃描)，掃描時間段3.50-33.00min，掃描質(zhì)量范圍40-440，掃描間隔0.5sec。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，其特征是所述的氣相色譜-質(zhì)譜儀的全掃描方式定性方法是采用全掃描譜庫檢索與相應(yīng)保留時間提取質(zhì)量色譜圖進(jìn)行特征選擇離子指紋圖譜定性相結(jié)合的方法定性；選擇離子檢測模式定性標(biāo)準(zhǔn)，要求相應(yīng)保留時間下，特征鑒定離子中，至少3個特征離子的豐度比例變化不大于標(biāo)準(zhǔn)的相同離子豐度比例的±20％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，其特征是所述的氣相色譜-質(zhì)譜儀的定量方法為選擇各目標(biāo)化合物特征離子中豐度較高噪聲相對較低的離子為定量離子，測定時，吸取添加有內(nèi)標(biāo)及回收率指示物的試劑空白溶液及樣品溶液，分別注入氣相色譜-質(zhì)譜儀中，定性確證有機(jī)磷農(nóng)藥品種后，對定量離子進(jìn)行峰積分，再配制對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品測得比值與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量；或者以內(nèi)標(biāo)法配制與待測目標(biāo)化合物濃度接近的單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)，將樣品測得比值與單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)比較定量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種同時測定食品中殘留的多種有機(jī)磷的GC/MS內(nèi)標(biāo)檢測方法，該方法在樣品前處理過程開始即加入內(nèi)標(biāo)及回收率指示物，所述內(nèi)標(biāo)為氘代屈、氘代蓖和氘代菲中的一種或兩種或三種，回收率指示物為1，3二甲基－2－硝基苯或氘代蓖，混合溶劑由環(huán)己烷、丙酮、異辛烷按一定比例混合而成；標(biāo)準(zhǔn)曲線配制過程中同時添加所述內(nèi)標(biāo)及回收率指示物，經(jīng)GC/MS測定后，以標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)化合物定量離子與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)定量離子峰面積比值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品經(jīng)GC/MS定性后，峰面積比值與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。本發(fā)明對測定全過程進(jìn)行質(zhì)量控制，通過內(nèi)標(biāo)和回收率指示物進(jìn)行結(jié)果定量、誤差判斷和校正，提高測量精度和準(zhǔn)確度。
文檔編號G01N30/06GK1693890SQ20051001753
公開日2005年11月9日 申請日期2005年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月22日
發(fā)明者李永香, 李玉秦, 李多多, 明佳佳, 房其美, 周麗娟 申請人:鄭州市疾病預(yù)防控制中心