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      一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法

      文檔序號(hào):10685153閱讀:502來(lái)源:國(guó)知局
      一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法
      【專利摘要】本發(fā)明涉及化學(xué)分析領(lǐng)域,具體涉及一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法。旨在解決傳統(tǒng)的酶抑制法快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥中存在的因含P=S基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶抑制能力較弱,從而造成的對(duì)含P=S基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性都較低的問(wèn)題。本發(fā)明通過(guò)在樣品前處理中增加與酶反應(yīng)兼容的氧化增敏處理過(guò)程,并在酶反應(yīng)中加入氨基甲酸酯類底物和顯色劑,根據(jù)吸光度的變化,進(jìn)而判定樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留量是否超過(guò)限量值。與現(xiàn)有的有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)方法相比,本發(fā)明通過(guò)獨(dú)特的增敏處理方法將有機(jī)磷農(nóng)藥中的P=S基團(tuán)轉(zhuǎn)化為P=O基團(tuán),從而顯著的提高了酶抑制法檢測(cè)含P=S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)能力。
      【專利說(shuō)明】
      一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速増敏檢測(cè)方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      [0001] 本發(fā)明涉及化學(xué)分析領(lǐng)域,具體涉及一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法。
      【背景技術(shù)】
      [0002] 有機(jī)磷農(nóng)藥(OPs)是指含C-P、C-0-P、C-S-P或C-N-P鍵的用于防治植物病、蟲、害得 有機(jī)化合物,多數(shù)為油狀液體,少數(shù)為固體(樂(lè)果、敵百蟲等),顯色為淡黃色至棕色,具有大 蒜氣味。大多數(shù)OPs不溶于水,而溶于有機(jī)試劑,在堿性條件下易水解失效。除了少數(shù)用作除 草劑、殺菌劑和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑外,大多數(shù)都用作農(nóng)業(yè)殺蟲劑。OPs具有高效、快速、廣譜的 優(yōu)點(diǎn),在農(nóng)藥中是極其重要的一類化合物,但是累積過(guò)多會(huì)對(duì)人和動(dòng)物有一定毒性危害,使 用中需要對(duì)安全特別注意。1941年Adrian等首次提出磷酸酯對(duì)膽堿酯酶具有抑制作用的推 斷。隨后,1949年Balls證實(shí)這種抑制作用是由于?;课坏牧柞;瘜?dǎo)致的。(蔬菜中有機(jī)磷 殺蟲劑多殘留分析方法研究)目前,OPs中毒機(jī)理是公認(rèn)的OPs對(duì)體內(nèi)膽堿酯酶的抑制性學(xué) 說(shuō),即OPs與體內(nèi)的膽堿酯酶(大量存在于神經(jīng)末梢突觸間隙,水解膽堿進(jìn)行神經(jīng)遞質(zhì)傳遞) 結(jié)合形成磷酰化膽堿酯酶,使膽堿酯酶失去活性,神經(jīng)遞質(zhì)膽堿大量積累,導(dǎo)致神經(jīng)功能嚴(yán) 重?fù)p傷,產(chǎn)生急性中毒現(xiàn)象,嚴(yán)重者甚至死亡。
      [0003] 當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,以有機(jī)磷農(nóng)藥為主的農(nóng)藥得到了廣泛的使用,也造成了環(huán)境和 食品方面嚴(yán)重安全隱患。選擇高效、快速、簡(jiǎn)單、有效的農(nóng)殘檢測(cè)方法,對(duì)農(nóng)藥殘留實(shí)施有效 的監(jiān)控,具有巨大的實(shí)際價(jià)值和潛在的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。在目前的農(nóng)殘快檢方法中,酶抑制法是應(yīng) 用最廣泛的農(nóng)殘快速檢測(cè)方法,但該方法也存在很大的弊端:如在傳統(tǒng)前處理技術(shù)的基礎(chǔ) 上進(jìn)行的酶抑制檢測(cè)方法,對(duì)部分酶敏感性偏低的農(nóng)藥(如樂(lè)果、毒死蜱等含P = S基團(tuán)的 OPs)其檢出限往往高于國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。使得這類農(nóng)藥超標(biāo)的食品不易通過(guò)酶抑制法快 速檢出,或檢出量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于農(nóng)藥實(shí)際含量,導(dǎo)致樣品假陰性,從而使得超標(biāo)產(chǎn)品直接流入市 場(chǎng)中,造成潛在的食品安全風(fēng)險(xiǎn)。因此,為了提高酶抑制法的靈敏度和準(zhǔn)確性,需要對(duì)樣品 前處理方法和檢測(cè)方法進(jìn)行改進(jìn),以提高對(duì)這部分乙酰膽堿酯酶敏感度偏低的農(nóng)藥的檢測(cè) 靈敏度和準(zhǔn)確性,從而提高食品中的農(nóng)殘含量監(jiān)控能力,更好的保證食品安全。
      [0004] 本發(fā)明在結(jié)合有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)構(gòu)差異性的基礎(chǔ)上從原理認(rèn)真分類、探究了含P = S基 團(tuán)和含P = 0基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)酯酶抑制能力的差異,通過(guò)獨(dú)特的增敏處理方法將含P = S基 團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥轉(zhuǎn)化為含P = 〇的有機(jī)磷農(nóng)藥,以提高酶抑制法檢測(cè)P = S的有機(jī)磷農(nóng)藥的檢 測(cè)能力。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0005] 本發(fā)明的目的在于解決以上技術(shù)問(wèn)題,提供一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方 法,利用膽堿酯酶催化水解的功能被有機(jī)磷農(nóng)藥抑制,其抑制效果與農(nóng)藥的濃度存在良好 的相關(guān)性,在酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中加入氨基甲酸酯類底物和顯色劑,觀察測(cè)定顏色的變化,進(jìn)而判 斷有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留量是否超過(guò)限量值。與現(xiàn)有的有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)方法相比,本發(fā)明通 過(guò)獨(dú)特的增敏處理方法將含P = S基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥轉(zhuǎn)化為含P = 0基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥,以提高酶 抑制法檢測(cè)含P=s基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥的檢測(cè)能力。
      [0006] 為解決上述問(wèn)題,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
      [0007] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,具體制備步驟如下:
      [0008] (1)樣品提取,取勻漿破碎后的樣品和丙酮混合,渦旋震蕩浸提,過(guò)濾除雜,然后吹 干丙酮濾液,加入磷酸鹽緩沖液定容,得到樣品提取液;
      [0009] (2)增敏處理,向樣品提取液中,加入次氯酸鈣溶液,氧化反應(yīng)10-40min,再加入亞 硝酸鈉溶液,還原反應(yīng)l〇-40min,得到待測(cè)液;
      [0010] ⑶酶抑制檢測(cè),取蒸餾水與待測(cè)液,加入工作酶液,30-40 °C恒溫抑制3-30min,再 加入反應(yīng)底物和顯色劑,30-40°C反應(yīng)5-30min,采用酶標(biāo)儀檢測(cè)在410nm處的吸光度值,按 以下公式計(jì)算抑制率:
      [0012]其中,A Ao為無(wú)農(nóng)藥抑制時(shí)反應(yīng)體系的吸光度;A心為有農(nóng)藥抑制時(shí)反應(yīng)體系的吸 光度。
      [0013] 進(jìn)一步地,所述步驟(1)中,樣品的用量為5-20g,丙酮用量為20-30mL,加入磷酸鹽 緩沖液定容至lOOOuL;所述步驟(2)中次氯酸鈣溶液用量為50-500uL,亞硝酸鈉溶液用量為 50-500uL;所述步驟(3)中,蒸餾水的用量為50-200uL,樣品提取液的用量為50-100uL,工作 酶液的用量為30-80uL,反應(yīng)底物的用量為30-80uL,顯色劑的用量為15-40uL;
      [0014]更進(jìn)一步地,所述次氯酸鈣溶液為質(zhì)量濃度0.02 % -0.10 %的次氯酸鈣溶液;所述 亞硝酸鈉溶液為質(zhì)量濃度5 % -20 %的亞硝酸鈉溶液;
      [0015] 更進(jìn)一步地,所述次氯酸鈣溶液為質(zhì)量濃度0.05 %的次氯酸鈣溶液;所述亞硝酸 鈉溶液為質(zhì)量濃度10%的亞硝酸鈉溶液。
      [0016] 進(jìn)一步地,所述工作酶液為乙酰膽堿酯酶;所述反應(yīng)底物為質(zhì)量濃度0.5 % -5 %碘 化硫代乙酰膽堿;所述顯色劑由0.03-0.05g的5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,加pH值為 7.71磷酸緩沖液溶解并定容至1 OOmL配制而成。
      [0017] 進(jìn)一步地,所述磷酸鹽緩沖液pH值為7.71。
      [0018] 進(jìn)一步地,所述步驟(1)中,吹干丙酮濾液是通過(guò)30-40 °C的氮?dú)獯蹈杀獮V液。
      [0019] 進(jìn)一步地,所述步驟(2)中,增敏處理的操作溫度為20-40°C。
      [0020] 本發(fā)明一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,與現(xiàn)有技術(shù)相比,其突出的特點(diǎn)和 優(yōu)異的效果在于:
      [0021] 1.本發(fā)明通過(guò)獨(dú)特的增敏處理方法將含P = S基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥轉(zhuǎn)化為含P = 0基團(tuán) 的有機(jī)農(nóng)藥,以提尚酶抑制法檢測(cè)含P = S基團(tuán)的有機(jī)農(nóng)藥的檢測(cè)能力。
      [0022] 2.本發(fā)明的檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單,靈敏度高,便于快速檢測(cè)。
      【附圖說(shuō)明】
      [0023] 圖1為12種有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制曲線;
      [0024]圖2為通過(guò)增敏處理對(duì)混合加標(biāo)樣品檢測(cè)的影響。
      【具體實(shí)施方式】
      [0025] 以下通過(guò)【具體實(shí)施方式】和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明,但不應(yīng)將此理解為 本發(fā)明的范圍僅限于以下的實(shí)施例。在不脫離本發(fā)明上述方法思想的情況下,根據(jù)本領(lǐng)域 普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段做出的各種替換或變更,均應(yīng)包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
      [0026] 實(shí)施例1
      [0027] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法:
      [0028] 樣品提取,分別稱取10g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和25mL丙酮混合,渦 旋震蕩浸提l〇min,然后過(guò)濾除雜,用35°C的氮?dú)獯蹈杀?,加入磷酸鹽緩沖液定容至 1000uL;
      [0029] 增敏處理,1000此樣品提取液中,加入300此的0.05%次氯酸鈣溶液,30°(:氧化反 應(yīng)15min,再加入300uL的10 %亞硝酸鈉溶液,30 °C還原反應(yīng)15min,得到待測(cè)液;
      [0030]酶抑制檢測(cè),在酶標(biāo)板中,取100uL的蒸餾水與75uL的待測(cè)液,再加入50uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶,混合均勻,35 °C恒溫抑制15min,再加入50uL的反應(yīng)底物ATChl和25uL的 顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,混合均勻,35°C反應(yīng)10min,采酶標(biāo)儀檢測(cè)在410nm 處的吸光度值。
      [0031] 實(shí)施例2
      [0032] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法:
      [0033]樣品提取,分別稱取5g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和20mL丙酮混合,渦 旋震蕩浸提5min,然后過(guò)濾除雜,用35°C的氮?dú)獯蹈杀?,加入磷酸鹽緩沖液定容至 1000uL;
      [0034] 增敏處理,1000uL樣品提取液中,加入50uL的0.05 %次氯酸鈣溶液,30°C氧化反應(yīng) 10min,再加入50uL的10 %亞硝酸鈉溶液,30 °C還原反應(yīng)10min,得到待測(cè)液;
      [0035]酶抑制檢測(cè),在酶標(biāo)板中,取50uL的蒸餾水與50uL的待測(cè)液,再加入30uL的工作酶 液乙酰膽堿酯酶,混合均勻,35°C恒溫抑制3min,再加入30uL的反應(yīng)底物ATChl和15uL的顯 色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,混合均勻,35 °C反應(yīng)5min,采用酶標(biāo)儀檢測(cè)在410nm處 的吸光度值。
      [0036] 實(shí)施例3
      [0037] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法:
      [0038] 樣品提取,分別稱取20g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和30mL丙酮混合,渦 旋震蕩浸提30min,然后過(guò)濾除雜,用35°C的氮?dú)獯蹈杀?,加入磷酸鹽緩沖液定容至 1000uL;
      [0039] 增敏處理,1000此樣品提取液中,加入500此的0.05%次氯酸鈣溶液,30°(:氧化反 應(yīng)40min,再加入500uL的10 %亞硝酸鈉溶液,30 °C還原反應(yīng)40min,得到待測(cè)液;
      [0040]酶抑制檢測(cè),在酶標(biāo)板中,取200uL的蒸餾水與100uL的待測(cè)液,再加入80uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶,混合均勻,35 °C恒溫抑制30min,再加入80uL的反應(yīng)底物ATChl和40uL的 顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,混合均勻,35°C反應(yīng)30min,采用酶標(biāo)儀檢測(cè)在 410nm處的吸光度值。
      [0041 ] 實(shí)施例4
      [0042] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法:
      [0043]樣品提取,分別稱取15g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和24mL丙酮混合,渦 旋震蕩浸提15min,然后過(guò)濾除雜,用35°C的氮?dú)獯蹈杀?,加入磷酸鹽緩沖液定容至 lOOOuL;
      [0044] 增敏處理,lOOOuL樣品提取液中,加入200uL的0.05 %次氯酸鈣溶液,30°C氧化反 應(yīng)20min,再加入200uL的10 %亞硝酸鈉溶液,30 °C還原反應(yīng)20min,得到待測(cè)液;
      [0045]酶抑制檢測(cè),在酶標(biāo)板中,取120uL的蒸餾水與80uL的待測(cè)液,再加入55uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶,混合均勻,35°C恒溫抑制20min,再加入55uL的反應(yīng)底物ATChl和28uL的 顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,混合均勻,35°C反應(yīng)15min,采用酶標(biāo)儀檢測(cè)在 410nm處的吸光度值。
      [0046] 實(shí)施例5
      [0047] -種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法:
      [0048]樣品提取,分別稱取12g勻漿破碎后的混合有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品和23mL丙酮混合,渦 旋震蕩浸提l〇min,然后過(guò)濾除雜,用35°C的氮?dú)獯蹈杀尤肓姿猁}緩沖液定容至 1000uL;
      [0049] 增敏處理,1000uL樣品提取液中,加入400uL的0.05 %次氯酸鈣溶液,30°C氧化反 應(yīng)25min,再加入400uL的10 %亞硝酸鈉溶液,30 °C還原反應(yīng)25min,得到待測(cè)液;
      [0050]酶抑制檢測(cè),在酶標(biāo)板中,取150uL的蒸餾水與80uL的待測(cè)液,再加入60uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶,混合均勻,35 °C恒溫抑制10min,再加入60uL的反應(yīng)底物ATChl和33uL的 顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,混合均勻,35°C反應(yīng)12min,采用酶標(biāo)儀檢測(cè)在 410nm處的吸光度值。
      [0051 ] 實(shí)施例6
      [0052]樣品提取,分別稱取10g勻漿破碎后的樣品(分別加入相同濃度樂(lè)果、毒死蜱、敵百 蟲、辛硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、三唑磷、氧化樂(lè)果、敵敵畏、乙酰甲胺磷、丙溴磷、馬拉氧磷 等有機(jī)磷農(nóng)藥的樣品,以及一個(gè)無(wú)農(nóng)藥的樣品)和25mL丙酮混合,渦旋震蕩浸提10min,然后 過(guò)濾除雜,用35°C的氮?dú)獯蹈杀?,加入磷酸鹽緩沖液定容至lOOOuL;
      [0053]樣品不經(jīng)增敏處理直接酶抑制檢測(cè),在酶標(biāo)板中,取100uL的蒸餾水與75uL的樣品 提取液,再加入50uL的工作酶液乙酰膽堿酯酶,混合均勻,35 °C恒溫抑制15min,再加入50uL 的反應(yīng)底物ATChl和25uL的顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,混合均勻,35 °C反應(yīng) 10min,采用酶標(biāo)儀檢測(cè)在410nm處的吸光度值,計(jì)算其抑制率。
      [0054]實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果如圖1,其中,含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥包括:樂(lè)果、毒死蜱、敵百蟲、 辛硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、三唑磷,含P=0基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥包括:氧化樂(lè)果、敵敵畏、乙 酰甲胺磷、丙溴磷、馬拉氧磷。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在相同濃度下含P = 〇基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)乙酰 膽堿酯酶的抑制率顯著高于含P = s基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥,如若不采取改進(jìn)措施存在部分含P =S基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥不易被檢出的可能。
      [0055] 實(shí)施例7
      [0056] 樣品提取,分別稱取10g勻漿破碎后的樣品分別加入不同濃度的樂(lè)果、毒死蜱、敵 百蟲、辛硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、三唑磷等含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥,與25mL丙酮混合, 渦旋震蕩浸提l〇min,然后過(guò)濾除雜,合并丙酮濾液,用35°C的氮?dú)獯蹈杀?,加入磷酸鹽緩 沖液定容至lOOOuL;
      [0057] 樣品等分為兩份,一份進(jìn)行增敏處理,即lOOOuL樣品提取液中,加入400uL的 0 ? 05 %次氯酸鈣溶液,30 °C氧化反應(yīng)25min,再加入400uL的10 %亞硝酸鈉溶液,30 °C還原反 應(yīng)25min;另一份不進(jìn)行增敏處理,作為對(duì)照。
      [0058]酶抑制檢測(cè),在酶標(biāo)板中,取100uL的蒸餾水與75uL的待測(cè)液,再加入50uL的工作 酶液乙酰膽堿酯酶,混合均勻,35 °C恒溫抑制15min,再加入50uL的反應(yīng)底物ATChl和25uL的 顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,混合均勻,35°C反應(yīng)lOmin,采用酶標(biāo)儀檢測(cè)在 410nm處的吸光度值。通過(guò)計(jì)算其抑制率曲線方程和IC 5Q值。比較含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥 經(jīng)增敏處理后,對(duì)乙酰膽堿酯酶敏感度的變化。
      [0059] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1,表明經(jīng)氧化處理后含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的 敏感度普遍提高了 2~4個(gè)數(shù)量級(jí),顯著的提高了酶抑制法檢測(cè)含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥的 靈敏度。
      [0060]表1含P = S基團(tuán)有機(jī)磷農(nóng)藥氧化處理前后抑制曲線方程和1(:50值
      [0062] 其中y為抑制率,x為抑制時(shí)間,R2為相關(guān)系數(shù),IC5Q(M)為半抑制率。
      [0063] 實(shí)施例8
      [0064]樣品提取,分別稱取10g勻漿破碎后的樣品(分別加入總濃度為0.02mg/kg和2mg/ kg的樂(lè)果、毒死蜱、敵百蟲、辛硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、三唑磷等含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng) 藥的混合標(biāo)準(zhǔn)品)和25mL丙酮混合,渦旋震蕩浸提lOmin,然后過(guò)濾除雜,用35°C的氮?dú)獯蹈?丙酮,加入磷酸鹽緩沖液定容至1000uL;
      [0065] 樣品等分為兩份,一份進(jìn)行增敏處理,即1000UL樣品提取液中,加入400uL的 0 ? 05 %次氯酸鈣溶液,30 °C氧化反應(yīng)25min,再加入400uL的10 %亞硝酸鈉溶液,30 °C還原反 應(yīng)25min;另一份不進(jìn)行增敏處理,作為對(duì)照;
      [0066]再將樣品進(jìn)行酶抑制檢測(cè),在酶標(biāo)板中,取100uL的蒸餾水與75uL的待測(cè)液,再加 入50uL的工作酶液乙酰膽堿酯酶,混合均勻,35°C恒溫抑制15min,再加入50uL的反應(yīng)底物 ATChl和25uL的顯色劑5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,混合均勻,35°(:反應(yīng)1〇111111,采用酶 標(biāo)儀檢測(cè)在41 Onm處的吸光度值,計(jì)算抑制率。
      [0067] 檢測(cè)結(jié)果如圖2,結(jié)果表明不論在高濃度(2mg/kg)還是低濃度(0.02mg/kg)下,經(jīng) 氧化處理后,含P = S基團(tuán)的有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率均有顯著提高。
      【主權(quán)項(xiàng)】
      1. 一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,其特征在于,具體檢測(cè)步驟如下: (1) 樣品提取,取勻漿破碎后的樣品和丙酮混合,渦旋震蕩浸提,過(guò)濾除雜,然后吹干丙 酮濾液,加入磷酸鹽緩沖液定容,得到樣品提取液; (2) 增敏處理,向樣品提取液中,加入次氯酸鈣溶液,氧化反應(yīng)10-40min,再加入亞硝酸 鈉溶液,還原反應(yīng)10-40min,得到待測(cè)液; (3) 酶抑制檢測(cè),取蒸餾水與待測(cè)液,加入工作酶液,30-40°C恒溫抑制3-30min,再加入 反應(yīng)底物和顯色劑,30-40°C反應(yīng)5-30min,采用酶標(biāo)儀檢測(cè)在410nm處的吸光度值,按以下 公式計(jì)算抑制率:其中,A Ao為無(wú)農(nóng)藥抑制時(shí)反應(yīng)體系的吸光度;A Ai為有農(nóng)藥抑制時(shí)反應(yīng)體系的吸光 度。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,其特征在于:所述步驟 (1)中,樣品的用量為5_20g,丙酮用量為20-30mL,加入磷酸鹽緩沖液定容至1000uL;所述步 驟(2)中次氯酸鈣溶液用量為50-500uL,亞硝酸鈉溶液用量為50-500uL;所述步驟(3)中,蒸 餾水的用量為50-200uL,樣品提取液的用量為50-100uL,工作酶液的用量為30-80uL,反應(yīng) 底物的用量為30-80uL,顯色劑的用量為15-40uL。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,其特征在于:所述次氯 酸鈣溶液為質(zhì)量濃度〇. 02 % -0.10 %的次氯酸鈣溶液;所述亞硝酸鈉溶液為質(zhì)量濃度5 % -20%的亞硝酸鈉溶液。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,其特征在于:所述次氯 酸鈣溶液為質(zhì)量濃度〇. 05 %的次氯酸鈣溶液;所述亞硝酸鈉溶液為質(zhì)量濃度10 %的亞硝酸 鈉溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,其特征在于:所述 工作酶液為乙酰膽堿酯酶;所述反應(yīng)底物為質(zhì)量濃度〇. 5 % -5 %碘化硫代乙酰膽堿;所述顯 色劑由0.03-0.05g的5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸,加pH值為7.71磷酸緩沖液溶解并定 容至100mL配制而成。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,其特征在于:所述 磷酸鹽緩沖液pH值為7.71。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,其特征在于:所述步驟 (1) 中,吹干丙酮濾液是通過(guò)30-40 °C的氮?dú)獯蹈杀獮V液。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速增敏檢測(cè)方法,其特征在于:所述步驟 (2) 中,增敏處理的操作溫度為20-40°C。
      【文檔編號(hào)】G01N21/78GK106053454SQ201610370322
      【公開(kāi)日】2016年10月26日
      【申請(qǐng)日】2016年5月30日
      【發(fā)明人】陳祥貴, 楊瀟, 馬敏
      【申請(qǐng)人】西華大學(xué)
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