專利名稱:酶法測定β-丁酮酸試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
;本發(fā)明涉及一種酶法測定β-丁酮酸試劑盒背景技術(shù);糖尿病酮癥酸中毒是一臨床常見病,多發(fā)病,原因是血酮體增高引起,β-丁酮酸是酮體重要組成部分,占酮體總量28%,酮癥診斷治療不及時將有生命危險(xiǎn),酶法測定β-丁酮酸測定有硝普鈉化學(xué)顯色法,氣相色譜法,放射化學(xué)法,毛細(xì)管等速電泳法等。放射化學(xué)法因有射線,化學(xué)品難于接受,毛細(xì)管等速電泳操作時間長,復(fù)雜不適于批量檢測。氣相色譜特導(dǎo)性差。目前,在《臨床化學(xué)診斷方法大全》中介紹了酶法測定β-丁酮酸方法,但未涉及β-丁酮酸試劑盒,文獻(xiàn)介紹的方法只能現(xiàn)配現(xiàn)用,不能長期保存,本試劑盒可冷藏保存一年以上,長期使用。
發(fā)明內(nèi)容
;本發(fā)明的目的在于提供一種長期保存的酶法測定β-丁酮酸試劑盒。
1本發(fā)明的技術(shù)方案一種酶法測定β-丁酮酸試劑盒。其特征在于試劑盒中含有D-3-羥基丁酸脫氫酶、還原型輔酶I、3羥甲基氨基甲烷、吐溫-80、2-甲基-4-異噻唑-3-酮、蔗糖。各組份含量最佳毫摩爾比為每升3羥甲基氨基甲烷60-140,還原型輔酶I 0.26-0.38,D-3-羥基丁酸脫氫酶30-100IU,保護(hù)劑蔗糖1-5克,2-甲基-4-異噻唑-3-酮0.1-0.6活性單位、吐溫-80 0.1-0.6克。上述成分加水至一升,調(diào)PH在6.5-7.1
2.意義陳述;本發(fā)明配方中,3羥甲基氨基甲烷作為緩沖劑有維持PH的作用,吐溫-80有乳化作用,D-3-羥基丁酸脫氫酶起催化劑作用、2-甲基-4-異噻唑-3-酮起防腐作用,保護(hù)劑蔗糖既對D-3-羥基丁酸脫氫酶有保護(hù)作用,還原型輔酶I參與底物反應(yīng),以上各成分含量濃度為測量β-丁酮酸最佳濃度值。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明配方中3羥甲基氨基甲烷作為緩沖劑有維持PH的作用,吐溫-80有乳化作用,D-3-羥基丁酸脫氫酶起催化劑作用、2-甲基-4-異噻唑-3-酮起防腐作用,保護(hù)劑蔗糖對D-3-羥基丁酸脫氫酶有保護(hù)作用、還原型輔酶I參與底物反應(yīng),試劑抗干擾能力強(qiáng),中等程度溶血,乳糜血,血糖20mmOl/l以下,膽紅素100umol/l以下對測定不產(chǎn)生干擾,本試劑盒為液體試劑,有效期一年。冷藏一年試劑盒中酶活力損失小于5%。
具體實(shí)施例方式
;取超純水一升用前將水加熱至沸,密封備用。將3羥甲基氨基甲烷60-140mmol,D-3-羥基丁酸脫氫酶30-100IU,還原型輔酶I 0.26-0.38mmol保護(hù)劑蔗糖1-5克,2-甲基-4-異噻唑-3-酮0.1-0.6活性單位、吐溫-80 0.1-0.6克。上述成分加水至一升,調(diào)PH在6.5-7.1,將試劑溶液分裝成5-10毫升/瓶,隨時備用。本試劑盒比原來試劑盒的優(yōu)越性是省去了冷凍干燥工藝,降低成本,使用方便。
權(quán)利要求
本發(fā)明涉及一種酶法測定β-丁酮酸試劑盒試劑盒。1.一種酶法測定β-丁酮酸試劑盒試劑盒,其特征在于含有D-3-羥基丁酸脫氫酶、還原型輔酶I、3羥甲基氨基甲烷、吐溫-80、2-甲基-4-異噻唑-3-酮、蔗糖。各組份含量最佳毫摩爾比為每升3羥甲基氨基甲烷60-140,還原型輔酶I 0.26-0.38,D-3-羥基丁酸脫氫酶30-100IU,保護(hù)劑蔗糖1-5克,2-甲基-4-異噻唑-3-酮0.1-0.6活性單位、吐溫-80 0.1-0.6克。PH6.6-7.2。意義陳述;本發(fā)明配方中3羥甲基氨基甲烷作為緩沖劑有維持PH的作用,吐溫-80有乳化作用,D-3-羥基丁酸脫氫酶起催化劑作用、2-甲基-4-異噻唑-3-酮起防腐作用,保護(hù)劑蔗糖對D-3-羥基丁酸脫氫酶有保護(hù)作用,還原型輔酶I參與底物反應(yīng),試劑抗干擾能力強(qiáng),中等程度溶血,乳糜血,血糖20mmol/l以下,膽紅素100umol/l以下對測定不產(chǎn)生干擾,本試劑盒為液體試劑,有效期一年。冷藏一年試劑盒中酶活力損失小于5%,還原型輔酶I小于10%,本試劑盒線性范圍達(dá)5.0mmol/l,正常參考范圍0.038-0.286mmol/l,回收率96.5-103.8%之間,變異系數(shù)CV=5.7%,X=0.26mmol/l,SD=0.015,n=20。由3-羥-甲基氨基苯甲烷組成的緩沖系統(tǒng)作為緩沖劑PH6.8-7.2以上各成分含量濃度為測量β-丁酮酸最佳濃度值。本發(fā)明的有益效果3羥甲基氨基甲烷作為緩沖劑有維持PH的作用,吐溫-80有乳化作用,D-3-羥基丁酸脫氫酶起催化劑作用、2-甲基-4-異噻唑-3-酮可防腐,本試劑盒使用的保護(hù)劑可有效穩(wěn)定還原型輔酶I。試劑抗干擾能力強(qiáng),中等程度溶血,乳糜血,血糖20mmol/l以下,膽紅素100umol/l以下對測定不產(chǎn)生干擾,凍干試劑冷藏一年,試劑盒中活力損失小于5%,還原型輔酶I破壞小于10%,本試劑盒線性范圍達(dá)5.0mmol/l,正常參考范圍0.038-0.286mmol/l,回收率96.5-103.8%之間,變異系數(shù)CV=5.7%,X=0.26mmol/l,SD=0.015,n=20。本項(xiàng)產(chǎn)品為液體試劑無需冷凍干燥,冷藏有效期一年。
全文摘要
技術(shù)領(lǐng)域;本發(fā)明涉及一種酶法測定β-丁酮酸試劑盒。本產(chǎn)品是生物工程領(lǐng)域高科技產(chǎn)品,是一種體外診斷試劑。本產(chǎn)品經(jīng)檢索填補(bǔ)了國際空白,本產(chǎn)品經(jīng)多年研究,解決了酶試劑盒的穩(wěn)定性問題,省略了原來試劑盒需要冷凍干燥的工藝,降低成本,使用者更加方便。為解決這些問題試劑盒使用了新型防腐劑2-甲基-4-異噻唑-3-酮、抗干擾試劑吐溫-80、新型緩沖劑3羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖系統(tǒng),酶穩(wěn)定劑蔗糖。這種配方可以使試劑盒由凍干型改為液體型,本產(chǎn)品主要提供全國大中小醫(yī)院檢驗(yàn)科使用,糖尿病酮癥酸中毒是一臨床常見病,多發(fā)病,原因是血酮體增高引起,D-3-羥基丁酸酮體重要組成部分,占酮體總量28%,酮癥診斷治療不及時將有生命危險(xiǎn),β-丁酮酸檢測對糖尿病酮癥酸中毒具有特異的診斷價(jià)值。
文檔編號G01N33/64GK1966715SQ200610151020
公開日2007年5月23日 申請日期2006年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月13日
發(fā)明者于永光 申請人:于永光