專利名稱：檢測子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及子宮內(nèi)膜異位癥診斷領域，尤其是利用SELDI技術在體外檢測子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)的方法。本發(fā)明還涉及由此獲得的一系列可作為子宮內(nèi)膜異位癥的潛在生物標志物的血漿蛋白質(zhì)及其在診斷子宮內(nèi)膜異位癥中的應用。

背景技術：
子宮內(nèi)膜異位癥是育齡婦女的多發(fā)病，引發(fā)多種臨床癥狀。近年發(fā)病率呈明顯上升趨勢，已達10％-15％，占婦科手術的30％以上。子宮內(nèi)膜異位癥所引起的痛經(jīng)、下腹痛和不孕嚴重影響婦女的健康和生活質(zhì)量。盡管子宮內(nèi)膜異位癥是一種良性疾病，但其病變廣泛、形態(tài)多樣，極具侵襲和復發(fā)性，對臟器結構和功能的破壞與惡性腫瘤相當，故有“良性癌”之稱。子宮內(nèi)膜異位癥的臨床表現(xiàn)與疾病程度不成正比，因此缺乏有效的臨床診斷方法。
郎等[14]發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜在粘附、侵襲和血管形成等多方面有別于正常內(nèi)膜。據(jù)此，我們提出了子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的分子機制假說“在位內(nèi)膜決定論”，即子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜之間存在本質(zhì)差別，子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病與否取決于患者在位內(nèi)膜的特性，經(jīng)血逆流只是實現(xiàn)這一由潛能到發(fā)病的橋梁。這一理論是我們作出本發(fā)明的理論基礎。由于子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜相比，其理化性質(zhì)和生物學行為存在明顯異常，這些異常就會反映到患者的體液中，使子宮內(nèi)膜異位癥患者的體液中的一些物質(zhì)尤其是蛋白質(zhì)的表達出現(xiàn)了質(zhì)或量上的改變，即特異性的生物標志物。它對于疾病的早期診斷、治療方案的選擇、個體化和預見性治療、臨床預后評價和疾病發(fā)病機理的研究都具有重要意義。
對于子宮內(nèi)膜異位癥，盡管目前有部分應用于臨床的標志物，如癌胚抗原125(CA125)、胎盤蛋白14(PP14)、子宮內(nèi)膜抗體和白細胞介素6(IL-6)等，它們對于臨床診斷和跟蹤復發(fā)等方面具有一定的參考價值，但仍缺乏特異性(見下表1)。
表1.已發(fā)表的子宮內(nèi)膜異位癥血清診斷標志物及其敏感性和特異性
因此，尋找敏感、特異的子宮內(nèi)膜異位癥生物標志物是目前急需解決的問題。
SELDI-TOF-MS(表面增強激光解吸電離-飛行時間-質(zhì)譜，Surface Bnhanced Laser Desorption Ionization-Time ofFlight-Mass Spectrometry)是最近發(fā)展起來的一種嶄新的蛋白質(zhì)組學研究方法。該技術通過經(jīng)過特殊處理的固相支持物或層析表面，根據(jù)蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì)不同，可以選擇性地從樣品中捕捉蛋白質(zhì)配體，與芯片結合。經(jīng)過孵育和洗脫后，進入質(zhì)譜儀進行分析。在SELDI-TOF質(zhì)譜儀中，用激光轟擊與芯片結合并與基質(zhì)混合的蛋白質(zhì)后，蛋白質(zhì)經(jīng)過軟離子化后，帶有電荷并進入電場。由于不同質(zhì)荷比的蛋白在電場中飛行時間不同，因此接收裝置可以據(jù)此將蛋白質(zhì)的質(zhì)和量用位置不同、強弱不等的圖譜表現(xiàn)出來并可以進一步分析。
SELDI技術適合臨床蛋白質(zhì)組學研究的要求，具有很高的靈敏度、特異性和重復性。另外從臨床應用的角度來看，標本處理簡單、分析方法簡便迅速。SELDI技術通過把蛋白質(zhì)結合在芯片上直接進行TOF-MS分析，避免了復雜的樣品處理過程以及由此引起的蛋白質(zhì)降解和丟失，樣品無須純化，可以直接檢測人體的血液、尿液、腦脊液、胸腔積液、關節(jié)腔滑液等體液以及支氣管灌洗液、細胞裂解液和各種分泌物。該方法還具有樣品用量小、操作簡便、高度靈敏、高通量的優(yōu)點，可以檢測到fmol(10-15mol)數(shù)量級的微量蛋白，可以同時獲得樣品中成千上萬個蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)。該技術克服了傳統(tǒng)雙向電泳中的諸多問題如膜蛋白分離、強極性蛋白、低分子量和低豐度蛋白質(zhì)難以檢測等問題[1-3]。尤其是對于血漿中疾病相關的分泌型蛋白時，雙向電泳就更加困難了。從傳統(tǒng)的生物標志物研究的經(jīng)驗和已有的研究結果來看，存在于血漿中的疾病相關標志性分子多為小分子量的蛋白質(zhì)或者多肽，分子量多在10000D以下，這正是傳統(tǒng)雙向電泳技術所無法覆蓋的分子量范圍。
同時SELDI技術產(chǎn)生的海量信息必須借助先進的數(shù)學模型和生物學信息技術進行分析。由于上述優(yōu)點，SELDI技術一經(jīng)推出就受到了臨床研究工作者的高度青睞和關注，國內(nèi)外學者已經(jīng)利用這一技術對多種疾病進行診斷，如卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等惡性腫瘤，并開展了多項腫瘤標志物研究和發(fā)病機理研究，取得了可喜的成果(見下表2)。
表2.利用SELDI技術對多種腫瘤進行診斷的敏感性和特異性
SELDI有可能成為最先進入臨床蛋白質(zhì)組檢測的技術。蛋白質(zhì)芯片技術可以描繪出患者某些體液(血漿、尿液等)中所有蛋白質(zhì)的表達情況，從而建立該疾病的指紋譜(finger print profile)，通過與正常人蛋白指紋譜的比較，可以較早地反映體內(nèi)疾病的發(fā)生、發(fā)展狀況。其優(yōu)點在于對患者體內(nèi)整體蛋白質(zhì)表達異常的把握，而不受任何單個標志物的特異性、靈敏性的限制。挑選患者指紋譜中異常表達的多個蛋白質(zhì)，依靠生物信息學和各種數(shù)學模型進行組合研究并建立診斷模型，可以作為臨床診斷的指標，然后通過雙盲法驗證其準確性及特異性，此后再在不同類型、不同階段的病變中進行比較性研究，以確定其臨床意義，從而用于疾病的早期診斷、療效監(jiān)測及預后判斷等，甚至可將其作為靶蛋白指導臨床治療。此外，也有報道蛋白質(zhì)芯片技術用于多種疾病發(fā)病機制的研究，已發(fā)現(xiàn)了一系列新的癌癥相關蛋白[9-13]。SELDI技術是目前蛋白質(zhì)組技術中最有希望用于臨床應用的技術之一。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明采用SELDI蛋白芯片質(zhì)譜技術，篩選出一種在子宮內(nèi)膜異位癥血漿中有特異性捕獲蛋白質(zhì)的芯片。對35例健康人和36例子宮內(nèi)膜異位癥患者的血漿標本進行了蛋白質(zhì)質(zhì)譜的監(jiān)測，進行了成組資料平均數(shù)t檢驗。我們發(fā)現(xiàn)了21個在子宮內(nèi)膜異位癥組異常表達的蛋白質(zhì)峰(P＜0.05)，這些蛋白質(zhì)峰可以作為子宮內(nèi)膜異位癥血漿候選的生物標志物。可以進一步對這些蛋白質(zhì)進行鑒定和功能研究，一方面可以發(fā)現(xiàn)這些蛋白質(zhì)在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病、發(fā)展及轉歸中的作用；另一方面則可以研究其在臨床診斷、個體化治療方案選擇、病情監(jiān)測及藥物篩選中的意義。
由此，本發(fā)明在一方面提供了在體外檢測子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟獲得患者的血漿標本；對該標本進行蛋白質(zhì)質(zhì)譜的檢測；并將獲得的結果與在正常人中獲得的結果進行比較，結合生物信息學方法確定子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)。
在一個實施方案中，對蛋白質(zhì)質(zhì)譜的檢測利用SELDI-TOF-MS技術進行。
本發(fā)明的研究結果顯示子宮內(nèi)膜異位癥患者血漿中存在一組特異性標志性蛋白，它們之間相互關聯(lián)構成了子宮內(nèi)膜異位癥血漿特殊的蛋白指紋圖譜。利用這些標志物作為診斷依據(jù)，成功地建立了子宮內(nèi)膜異位癥血漿蛋白指紋診斷模型。本研究同時對71例血漿標本的血漿蛋白指紋數(shù)據(jù)輸入人工神經(jīng)網(wǎng)絡系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)分析。選擇全部差異表達的蛋白質(zhì)峰進行人工網(wǎng)絡訓練，得到了一個確定模型。經(jīng)過內(nèi)部的盲篩得到診斷子宮內(nèi)膜異位癥的敏感性為91.7％，特異性為82.9％。
由此，本發(fā)明在另一方面涉及可通過上述方法獲得的子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)。在一個實施方案中，所述血漿標志蛋白質(zhì)包括以下3個蛋白質(zhì)質(zhì)荷比峰(m/z)3956、6986和11710，其中質(zhì)荷比為3956的蛋白質(zhì)峰在子宮內(nèi)膜異位癥血漿中表達下調(diào)，而質(zhì)荷比為11710和6986的蛋白質(zhì)峰表達上調(diào)。
本發(fā)明的另一方面涉及用于檢測可通過上述方法獲得的子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)的相關檢測試劑在制備診斷子宮內(nèi)膜異位癥的產(chǎn)品中的應用。基于本發(fā)明的教導，這樣的相關檢測試劑及其制備和應用對于本領域技術人員而言是常規(guī)的，其具體實例包括但不限于例如抗體、核酸探針等。在一個具體實施方案中，所述檢測試劑為芯片的形式，包括但不限于例如物理芯片、化學芯片和生物芯片等。
本發(fā)明利用SELDI技術通過檢測健康人及子宮內(nèi)膜異位癥患者血漿蛋白指紋圖譜，建立基于人工神經(jīng)網(wǎng)絡的診斷模型，提高了子宮內(nèi)膜異位癥的診斷率。



圖1顯示由三個蛋白質(zhì)峰構成的子宮內(nèi)膜異位癥診斷模型的圖示(EM子宮內(nèi)膜異位癥；Control對照)。
圖2顯示質(zhì)荷比分別為3956、11710和6986的蛋白質(zhì)峰在子宮內(nèi)膜異位癥(EM)和對照(Control)健康婦女血漿中的表達。

具體實施例方式 現(xiàn)將結合具體實施例對本發(fā)明作進一步例示說明，應理解這些實施例僅用于舉例說明目的，而絕非限制本發(fā)明的范圍。
材料和方法 1.標本的采集和處理 手術中診斷明確的子宮內(nèi)膜異位癥患者術前血漿取自中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)院，所有患者術前未服任何藥物。與子宮內(nèi)膜異位癥對照的健康配對血漿取自北京協(xié)和醫(yī)院血庫。詳細臨床資料見下表。
表3.子宮內(nèi)膜異位癥患者和健康婦女的臨床資料
將患者術前和健康志愿者外周血采集入含有0.1wt％肝素的試管中，4℃4000rpm離心8分鐘。分裝后，-80℃冰箱保存。
2.試劑和緩沖液 硫酸銅、尿素、乙酸鈉、乙腈、三氟乙酸、CHAPS購自Sigma公司； SPA購自Ciphergen公司； Tris、HCL為國產(chǎn)分析純； HPLC級水購自ALDRICH公司； U9緩沖液 9M尿素2％CHAPS 50mMTris-HCL pH9.0 3.儀器和軟件 ProteinChip Biology System(PBS-II)、ProteinChip Software、Biomarker Pattern Software為Ciphergen公司產(chǎn)品； 芯片購自Ciphergen公司； 臺式離心機為Sigma公司產(chǎn)品； 4.方法 1)血漿樣品稀釋和預處理 i.-80℃冰箱取出樣品，室溫融化，4℃10000rpm離心10分鐘； ii.將血漿樣品3μl與6μl U9緩沖液混合，振蕩使混合均勻； iii.置冰浴30分鐘，每5分鐘用手輕彈一次使樣品充分混勻； iv.9μl樣品溶液內(nèi)加入108μl結合緩沖液I，振蕩混勻； 2)芯片處理 i.將蛋白芯片正確安裝于Bioprocessor中； ii.在每孔中加入200μl結合緩沖液I，搖床孵育5分鐘，重復一次； 3)上樣和洗脫 i.每孔中加入100μl稀釋血漿樣品，搖床孵育1小時； ii.棄去血漿樣品，每孔中加入200μl結合緩沖液I，搖床孵育5分鐘； iii.棄去結合緩沖液I，重復上步驟2次； iv.棄去結合緩沖液I，每孔中加入200μl HPLC水，搖床孵育5分鐘； v.棄去水，重復上步驟1次； vi.棄水，自然干燥； vii.每點上加0.5μl SPA，重復1次； viii.拆除Bioprocessor，取出芯片放入ProteinChip BiologySystem(PBS-II)中進行檢測分析。
4)數(shù)據(jù)采集程序的優(yōu)化 經(jīng)過3次預實驗，將ProteinChip Biology System(PBS-II)閱讀芯片時的參數(shù)優(yōu)化為如下設置 i.分子量檢測范圍2000-20000Dalton，最高分子量50000Dalton； ii.激光強度195； iii.檢測器靈敏度8； iv.數(shù)據(jù)讀取方式定量讀取‘ v.芯片上每個點采集150次。
5)數(shù)據(jù)采集 ProteinChip Software3.0數(shù)據(jù)采集軟件從ProteinChip BiologySystem(PBS-II)上采集數(shù)據(jù)，同時用加有肽分子量標準All-In-One校正閱讀器。選取分子量為2-40kD區(qū)域讀取血漿蛋白，該區(qū)涵蓋了血漿中絕大部分可分辨的蛋白質(zhì)，同時避免了基質(zhì)分子和潛在化學物質(zhì)污染。
選取質(zhì)譜峰(trace view)的方式讀取芯片上的蛋白數(shù)據(jù)。首先調(diào)整基線(base line)，然后才檢測數(shù)據(jù)。
經(jīng)過對SELDI的五種芯片實驗后，初步確定其中的一種存在明顯差異峰作為建立模型的芯片。
6)生物信息學分析 所有原始數(shù)據(jù)先用ProteinChip Software3.0進行校正。對每個圖譜的蛋白質(zhì)峰做相應的調(diào)整，以減少不同芯片、儀器狀態(tài)等因素引起的誤差。對于檢測范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)峰應用Biomarker Wizard進行噪音過濾。選擇信噪比＞8和在所有圖譜中出現(xiàn)頻率超過10％的蛋白質(zhì)峰為有效蛋白質(zhì)峰。得到初篩結果后，依照蛋白質(zhì)峰做子宮內(nèi)膜異位癥與正常健康人兩組數(shù)據(jù)比較t檢驗，得到P值。
7)診斷模型的建立和驗證 用Biomarker Pattern Software對子宮內(nèi)膜異位癥與正常健康人兩組相同的蛋白質(zhì)峰做線性分類分析，經(jīng)過進一步優(yōu)化實驗參數(shù)，確定最佳分類模型為診斷模型。該模型對去除噪音后的訓練集建立分類決策樹，在判斷某一質(zhì)荷比峰強度與另一臨界點關系時，把數(shù)據(jù)收集分為兩個節(jié)點，這兩個節(jié)點再分別用新的質(zhì)荷比峰作為判斷，產(chǎn)生新的節(jié)點，如此反復直到節(jié)點不能再分為止，就建立了一個穩(wěn)定的決策樹。然后擴大樣本量，用此診斷模型進行雙盲分析其它子宮內(nèi)膜異位癥與正常健康人血漿中的SELDI質(zhì)譜數(shù)據(jù)，根據(jù)分析結果評價該模型的準確性。
結果 1.初步篩選有意義的M/Z峰 35份正常血漿和36份子宮內(nèi)膜異位癥患者血漿的原始蛋白指紋圖譜標準化后，在分子量為0-20000范圍內(nèi)共檢測到77個蛋白質(zhì)峰，在分子量為20000-300000范圍內(nèi)共檢測到9個蛋白質(zhì)峰，其中21個在子宮內(nèi)膜異位癥組和對照組之間有顯著差異(P＜0.05)。下表列出了P＜0.01的蛋白質(zhì)峰 表4.子宮內(nèi)膜異位癥組與對照組血漿差異表達的蛋白質(zhì)峰(P＜0.01)Mean- Mean- M/Z pcontrol SD-control patient SD-patient 3956.318691 1.297E-0710.42976885 11.24571392 0.910646302 0.548924398 5476.696296 1.08544E-05 8.144608267 6.700228556 1.384642669 0.779190977 4477.889593 1.68367E-05 11.36578721 11.90443966 2.205652354 1.990182477 8600.533603 5.95809E-05 13.70805285 11.41386179 22.33842745 8.426494684 4964.089049 0.00024183 4.487536605 4.093167167 8.336781759 5.458662985 4091.32438 0.000455267 32.24191927 35.88618095 1.117948944 0.906219964 3932.962387 0.000684291 16.72941121.34021815 1.341534029 2.036975718 4282.333931 0.001120757 19.67193614 12.73847544 11.8250491 4.027617463 4133.25733 0.001803398 9.485161073 4.81239537 7.195225635 7.777258813 4818.539113 0.003561318 7.253981904 5.686316289 14.36115739 12.46482269 1006.525596 0.005966198 34.91292117 8.659768722 28.01279551 9.598838257 5633.019639 0.006221273 14.47722191 17.78311117 2.497683891 1.652315979 1072.201638 0.008299217 10.34544628 2.685473843 8.371831875 2.649032797 1135.116848 0.008642024 8.450502459 3.030595185 6.338910526 2.553574375 注M/Z為質(zhì)荷比，Mean-control為對照組峰值，SD-control為對照組標準差；Mean-patient為子宮內(nèi)膜異位癥組峰值，SD-patient為子宮內(nèi)膜異位癥組標準差。
2.人工神經(jīng)網(wǎng)絡模型的建立 應用Biomarker Pattern Software對子宮內(nèi)膜異位癥與正常健康人兩組相同的蛋白質(zhì)峰做線性分類分析，經(jīng)過進一步優(yōu)化實驗參數(shù)，結果顯示子宮內(nèi)膜異位癥患者血漿中存在一組特異性標志性蛋白，它們之間相互關聯(lián)構成了子宮內(nèi)膜異位癥血漿特殊的蛋白指紋圖譜。
利用這些標志物作為診斷依據(jù)，成功地建立了子宮內(nèi)膜異位癥血漿蛋白指紋診斷模型，其包括為質(zhì)荷比為3956m/z，6986m/z和11710m/z的蛋白質(zhì)峰，其中在子宮內(nèi)膜異位癥血漿中質(zhì)荷比為3956m/z的蛋白質(zhì)峰表達下調(diào)，而質(zhì)荷比為11710m/z和6986m/z的蛋白質(zhì)峰則表達上調(diào)(見圖2)。
圖1顯示由三個蛋白質(zhì)峰構成的子宮內(nèi)膜異位癥診斷模型的圖示。根據(jù)質(zhì)荷比為3956的蛋白質(zhì)峰的相對豐度將兩組71例進行分類。結點1診斷為正常人，其中26例診斷正確，2例子宮內(nèi)膜異位癥患者漏診；對其余43例病人再用質(zhì)荷比為11710的蛋白質(zhì)峰進一步分類。結點2診斷為子宮內(nèi)膜異位癥患者，其中25例診斷正確，2例正常人誤診；剩余16例用質(zhì)荷比為6986的蛋白質(zhì)峰分類，結點3診斷為正常人，其中5例診斷正確，2例子宮內(nèi)膜異位癥患者漏診；結點4診斷為子宮內(nèi)膜異位癥患者，其中7例診斷正確，2例正常人誤診。
該模型對19例III-IV期子宮內(nèi)膜異位癥患者全部診斷正確，而對17例I-II期患者14例診斷正確，3例漏診?？傮w而言，該模型診斷子宮內(nèi)膜異位癥診斷的敏感性為91.7％，特異性為82.9％，陽性預測值為84.6％，陰性預測值為90.6％?？紤]到我們所選擇的健康人并未排除子宮內(nèi)膜異位癥，而在育齡婦女中子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病率為5-15％，因此在健康對照組內(nèi)有部分子宮內(nèi)膜異位癥患者，這就是該模型診斷特異性降低的主要原因。進一步擴大樣本量，盡可能排除健康對照組中的子宮內(nèi)膜異位癥病例，將會使模型診斷的敏感性和特異性進一步提高。
表5.蛋白指紋質(zhì)譜模型診斷的敏感性和特異性
3.盲法驗證 用子宮內(nèi)膜異位癥、肌腺癥、卵巢畸胎瘤、卵巢顆粒細胞瘤、子宮肌瘤及宮頸病變患者血漿進行盲法驗證模型診斷的敏感性和特異性。結果表明8例子宮內(nèi)膜異位癥患者有7例被正確診斷，8例健康人及子宮肌瘤和卵巢良性腫瘤患者6例被排除。
上面已結合具體實施例和附圖對本發(fā)明進行了例示說明，但本領域技術人員應理解，本發(fā)明的實施不限于以上詳細描述的細節(jié)，不偏離本發(fā)明構思的多種變化和改動都在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
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權利要求
1.在體外檢測子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟獲得患者的血漿標本；對該標本進行蛋白質(zhì)質(zhì)譜的檢測；并將獲得的結果與在正常人中獲得的結果進行比較，結合生物信息學方法確定子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)。
2.權利要求1的方法，其中對蛋白質(zhì)質(zhì)譜的檢測利用SELDI-TOF-MS技術進行。
3.可通過權利要求1或2的方法獲得的子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)。
4.權利要求3的血漿標志蛋白質(zhì)，其包括以下3個蛋白質(zhì)質(zhì)荷比峰3956m/z，6986m/z和11710m/z。
5.用于檢測權利要求3或4的血漿標志蛋白質(zhì)的相關檢測試劑在制備診斷子宮內(nèi)膜異位癥的產(chǎn)品中的應用。
6.權利要求5的應用，其中所述檢測試劑選自抗體和核酸探針。
7.權利要求5的應用，其中所述檢測試劑為芯片的形式。
全文摘要
本發(fā)明提供了在體外檢測子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟獲得患者的血漿標本；對該標本進行蛋白質(zhì)質(zhì)譜的檢測，特別是利用SELDI-TOF-MS技術進行檢測；并將獲得的結果與在正常人中獲得的結果進行比較，結合生物信息學方法確定子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)。本發(fā)明還涉及可通過上述方法獲得的子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)及其相關檢測試劑在制備診斷子宮內(nèi)膜異位癥的產(chǎn)品中的應用。
文檔編號G01N33/68GK101210929SQ200610156138
公開日2008年7月2日 申請日期2006年12月29日 優(yōu)先權日2006年12月29日
發(fā)明者劉海元, 郎景和 申請人:中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)院