專利名稱：燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，屬于對藥品生產(chǎn)過程中的質(zhì)量進行控制的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病如冠心病、腦血栓、高血壓、腦梗塞等均是當今世界上最常見和危害最大的疾病之一，也是危害我國人民健康的常見病、多發(fā)病，已成為人口死亡的主要原因之一；據(jù)報告，近年來的發(fā)病率有逐年增高趨勢，而且中、青年患者不斷增加。為了達到防治的目的，本申請人曾遞交了一份專利申請?zhí)枮椤?00410022790X”，名稱為“一種治療心腦血管疾病的中藥制劑及其制備方法”的申請，涉及一種由燈盞花素與雙嘧達莫組方制成的治療心腦血管疾病中藥注射劑，但是藥物制劑必須要在保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控安全的基礎(chǔ)之上，才能不短的更新發(fā)展，為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品質(zhì)地，需要研究控制該注射液質(zhì)量的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，針對由燈盞花素∶雙嘧達莫＝1∶0.3-3組方制成的藥物進行質(zhì)量控制。這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供了檢測的指標、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品質(zhì)地。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)燈莫注射劑的指紋圖譜測試，包括以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜；(2)野黃芩苷、雙嘧達莫中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、雙嘧達莫中全部或部分成分的含量測試方法。
所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下指紋圖譜采用液相色譜法測試以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測燈莫注射制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量野黃芩苷、雙嘧達莫中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇-pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉水溶液或pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀水溶液或pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸氫二鈉水溶液或水或0.1％～5％冰醋酸溶液或0.1％～5％甲酸溶液或0.02％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有1～5個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.待測注射劑指紋圖譜中有40％～100％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±50％。
(共有峰面積的比值是指以參照物峰面積作為1，計算各共有指紋峰面積與參照物峰面積的比值)優(yōu)選為(1)供試品溶液的制備精密稱取待測燈莫注射制劑適量，加甲醇制成每1ml含0.01-0.1mg雙嘧達莫的溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為pH值3.5的0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由50％降至18％，從18分鐘至60分鐘，流動相A的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2～3個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.待測注射劑指紋圖譜中有60％～100％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±30％。
所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑的鑒別方法為野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測燈莫注射制劑適量，加甲醇或水或乙醇溶解并稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；另取野黃芩苷、雙嘧達莫對照品中的一種或兩種，分別加甲醇或乙醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷-甲酸或冰醋酸-水5～60∶0.5～5∶0.2～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁-乙醇試液，60～150℃烘至斑點顯色清晰，置目光或紫外燈365nm或254nm下檢測，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點。
優(yōu)選為取待測燈莫注射制劑適量，加甲醇溶解并稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；另取野黃芩苷、雙嘧達莫對照品中的一種或兩種，分別加甲醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以20∶2.5∶1.5的乙酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁-乙醇試液，105℃烘5分鐘，置紫外燈365nm下檢測，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑含量的測試方法為野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種的含量測定取待測燈莫注射制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種的水或甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈或甲醇-pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉水溶液或pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀水溶液或pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸氫二鈉水溶液或水或0.1％～5％冰醋酸溶液或0.1％～5％甲酸溶液或0.02％～5％磷酸溶液為流動相，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測燈莫注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4.0mg；(2)每單位量含雙嘧達莫的限度應(yīng)為制劑標示量的80-120％。
優(yōu)選為取待測燈莫注射制劑適量，加甲醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。以野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為pH值3.5的0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由50％降至18％，從18分鐘至25分鐘，流動相A的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，待測燈莫注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含野黃芩苷的限度不得少于8.0mg；(2)每單位量含雙嘧達莫的限度應(yīng)為制劑標示量的90-110％。
所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑中的燈盞花素、雙嘧達莫及其它所有可測成分的總含量占制劑中扣除輔料量和水分量的總固體量的80％以上。
(總固體量是指內(nèi)容物的重量減去輔料量和水分量后的重量)與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更加完善的控制以燈盞花素、雙嘧達莫制成的注射劑產(chǎn)品的質(zhì)量。燈莫注射劑成分復(fù)雜，如果只用其中一、兩種成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更無法判斷其藥效的指標成分。因此本申請人制定了以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜來全面控制注射劑的質(zhì)量。但是由于燈莫注射劑所含的化學成分復(fù)雜，對指紋圖譜的制定造成干擾，導(dǎo)致部分指紋圖譜特征不穩(wěn)定，所以必須控制流動相等色譜條件，才能得到良好的指紋圖譜。也就是說，燈莫制劑的指紋圖譜不是將燈盞花素、雙嘧達莫的指紋圖譜簡單疊加就能得到的；由于處方中兩部分所含成分相互之間的干擾影響，導(dǎo)致燈莫制劑中燈盞花素、雙嘧達莫的指紋圖譜特征峰發(fā)生改變，采用常規(guī)的檢測燈盞花素或者雙嘧達莫的液相色譜條件，無法使制劑中的主要特征成分在一個條件下出峰，并滿足分離度等方面的質(zhì)控要求，只有采用本發(fā)明的條件，選用適宜的參數(shù)進行梯度洗脫，才能得到專屬、準確、穩(wěn)定、可操作性強的理想的指紋圖譜。
在常規(guī)的檢測燈盞花素的液相色譜條件乙腈或甲醇-0.1％磷酸水溶液條件下，雙嘧達莫出峰時間晚，且峰型差；在常規(guī)的檢測雙嘧達莫的液相色譜條件甲醇-0.1％磷酸氫二鈉(磷酸調(diào)節(jié)pH＝4.6)下，野黃芩苷出峰時間過早，與溶劑峰有重疊，為了增加指紋圖譜檢測方法的便捷和可操作性，我們考察了多種條件，力爭在滿足準確性、專屬性和穩(wěn)定性的前提下，采用一個液相條件檢測到樣品中全部的特征成分，最終，得到了滿意的結(jié)論。實驗證明，本發(fā)明的含量測定和指紋圖譜檢測方法對以燈盞花素、雙嘧達莫制成的注射劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
實驗例1以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的制備1、實驗儀器、試劑及樣品對照品野黃芩苷中國藥品生物制品檢定所2、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實驗2.1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均為C18，4.6mm×200mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號的色譜柱均可達到較好的分離效果，其中Diamonsil ODS色譜柱分離效果最好，柱效最高。故最終選用Diamonsil ODS色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)為實驗研究柱。
2.2.流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-1％冰醋酸溶液(30∶70)，(2)乙腈-1％冰醋酸溶液(17∶73)，(3)乙腈-0.2％磷酸溶液(26∶74)(4)甲醇-0.2％磷酸溶液(30∶70)，(5)乙腈-0.02moL/L磷酸二氫鈉(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，乙腈的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，乙腈的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，乙腈的比例由50％降至18％，從18分鐘至25分鐘，乙腈的比例為18％五種流動相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動相(1)條件下，峰形較差，1小時內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(2)流動相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴重，出峰不完全；(4)條件下，峰拖尾嚴重，出峰不完全；流動相(5)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
2.3.檢測波長的確定研究中在乙腈-0.02moL/L磷酸二氫鈉(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)(梯度洗脫)流動相條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、230、250、283、335下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在283nm下色譜峰較多，峰形較好，故最終選用283nm作為檢測波長。
2.4.儀器、色譜柱及積分參數(shù)2.4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的Agilent 1100系列高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站。色譜柱為Diamonsil ODS(4.6mm×200mm，5μm)；柱溫30℃，流速1.0ml/min。
2.4.2積分參數(shù)Slope Sensitivity1，peak width0.05，最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的5％，最小峰高為S峰峰高的5％。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計算，同時保證與參照物的相關(guān)性。
3、供試品溶液的制備取待測燈莫注射劑適量，加甲醇制成每1ml含0.04mg雙嘧達莫的溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
4、參照物溶液的制備野黃芩苷為燈盞花素主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占比例較大且較穩(wěn)定，因此選定野黃芩苷作為參照物。
5、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批樣品制定標準指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標準指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實驗例2燈莫注射劑中野黃芩苷、雙嘧達莫的薄層色譜鑒別方法為了突出燈莫注射劑的特征，選擇了野黃芩苷、雙嘧達莫作為其特征斑點，但是由于注射劑中存在較多與野黃芩苷、雙嘧達莫結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對野黃芩苷、雙嘧達莫進行了展開

經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，醋酸乙酯-甲酸-水(20-2.5-1.5)為展開劑，在此條件下，野黃芩苷、雙嘧達莫的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例3燈莫注射劑中野黃芩苷、雙嘧達莫的含量測定方法1儀器與試藥(1)主要儀器高效液相色譜儀1100series Agilent高效液相色譜儀LC-2010AHT SHIMADZU電子分析天平 BP211D SARTORIUS超聲波清洗儀 KQ250DB昆山超聲儀器有限公司(2)試藥野黃芩苷 中國藥品生物制品檢定所雙嘧達莫 中國藥品生物制品檢定所甲醇 分析純北京市通廣精細化工公司乙腈 色譜純CALEDON磷酸 優(yōu)級純北京化工廠磷酸二氫鈉分析純上海市振欣試劑廠2色譜條件色譜儀SHIMADZU LC-2010ATH色譜柱Diamonsil(TM)C18，250×4.6mm 5μm；流動相乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉(25％磷酸調(diào)PH＝3.5)，梯度洗脫(見下表)


檢測波長283nm；柱溫30℃；流速1.0ml/min；進樣量10μl。
3系統(tǒng)適用性試驗對照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷、雙嘧達莫對照品適量，加甲醇制成每1ml含野黃芩苷0.06mg、雙嘧達莫0.05mg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 取本品，混勻，從中取約20mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
根據(jù)上述條件得到野黃芩苷、雙嘧達莫、混合對照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)按野黃芩苷峰計算大于3500。樣品中對照品峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5。
4陰性干擾排除試驗 為考察輔料是否干擾野黃芩苷與雙嘧達莫的測定，除燈盞花素和雙嘧達莫外，按處方比例稱取其它輔料與供試品溶液同法制成陰性對照品溶液并測定。結(jié)果表明，陰性樣品對野黃芩苷和雙嘧達莫的含量測定無干擾。
5線性關(guān)系的考察 精密量取野黃芩苷、雙嘧達莫混合溶液(每1ml分別含野黃芩苷0.6288mg、雙嘧達莫0.5404mg)0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分置5ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。分別以野黃芩苷、雙嘧達莫的量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標做圖，繪制標準曲線。
野黃芩苷線性關(guān)系


回歸方程y＝1328159.51x+2697.69相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明，野黃芩苷在0.242365μg～1.211823μg范圍之內(nèi)線性關(guān)系良好。
雙嘧達莫線性關(guān)系

回歸方程y＝2016621.78x+3817.10相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明，雙嘧達莫在0.21616μg～1.08080μg范圍之內(nèi)線性關(guān)系良好。
經(jīng)過計算，野黃芩苷、雙嘧達莫標準曲線均為過原點的直線，因此選擇外標一點法測定燈莫注射劑中野黃芩苷、雙嘧達莫的含量。
6對照品溶液精密度和穩(wěn)定性試驗精密吸取野黃芩苷、雙嘧達莫對照品混和溶液每1ml分別含野黃芩苷0.06288mg、雙嘧達莫0.05404mg)10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，分別在0、2、6、10、24小時進樣測定。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好，在24小時內(nèi)穩(wěn)定。
7供試品溶液穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液(2.017mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，分別在0、2、6、10、24小時進樣測定。
供試品溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果


結(jié)果表明，供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8重復(fù)性試驗 取本品裝量差異項下內(nèi)容物，混勻，從中取約20mg(共5份)，精密稱定，分置10ml量瓶中，按正文供試品溶液制備和測定項下進行操作。
重復(fù)性試驗

野黃芩苷平均含量＝4.84mg/支；RSD＝1.00％；雙嘧達莫平均含量＝4.07mg/支；RSD＝1.13％。
結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
9加樣回收率試驗 取本品裝量差異項下內(nèi)容物，混勻，從中取約10mg(共6份)，分置10ml量瓶中；精密稱取野黃芩苷對照品15.72mg，雙嘧達莫對照品13.51mg，共置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，從中精密量取0.5ml(共6份)，分置上述10ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
燈莫注射劑中野黃芩苷、雙嘧達莫的含量分別為3.0215％、2.5409％。野黃芩苷加樣回收率試驗

野黃芩苷平均回收率＝96.54％，RSD＝1.48％；雙嘧達莫加樣回收率試驗

雙嘧達莫平均回收率＝100.49％，RSD＝1.71％；10樣品含量測定 取三批燈莫凍干粉針(5mg雙嘧達莫/瓶)中試樣品，按正文所述方法處理，進行測定。
含量測定結(jié)果

根據(jù)上述結(jié)果擬定該燈莫凍干粉針中野黃芩苷的含量不低于4mg/支，雙嘧達莫的含量為3.6-4.4mg/支。
具體實施例方式實施例1按照本申請人遞交的專利申請?zhí)枮椤?00410022790X”，名稱為“一種治療心腦血管疾病的中藥制劑及其制備方法”的技術(shù)制備的制劑；采用液相色譜法測試燈莫注射液中以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密量取供試品適量，加甲醇制成每1ml含0.04mg雙嘧達莫的溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由50％降至18％，從18分鐘至60分鐘，流動相A的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射液中以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射液指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求計算待測凍干粉針的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00。
實施例2采用液相色譜法測試燈莫粉針中以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測凍干粉針適量，加乙醇制成每1ml含0.04mg雙嘧達莫的溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由50％降至18％，從18分鐘至60分鐘，流動相A的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測凍干粉針中以以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測凍干粉針指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求計算待測凍干粉針的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00。
實施例3采用液相色譜法測試燈莫注射液中以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密量取取待測注射液，加水，搖勻，制成每ml含雙嘧達莫0.08mg的溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取雙嘧達莫適量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為甲醇，流動相B為0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由22％升至35％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由35％升至55％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由55％降至22％，從18分鐘至60分鐘，流動相A的比例為22％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射液中以以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射液的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測注射液指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.待測注射液指紋圖譜中雙嘧達莫與野黃芩苷峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±30％。
實施例4凍干粉針中野黃芩苷、雙嘧達莫的薄層色譜鑒別方法取待測凍干粉針適量，加甲醇溶解并稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；另取野黃芩苷、雙嘧達莫對照品，分別加甲醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(20∶2.5∶1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁-乙醇試液，105℃烘5分鐘，置紫外燈365nm下檢測，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
實施例5凍干粉針中野黃芩苷、雙嘧達莫的薄層色譜鑒別方法取待測凍干粉針適量，加乙醇溶解并稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；另取野黃芩苷、雙嘧達莫對照品，分別加乙醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(16∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁-乙醇試液，105℃烘5分鐘，置紫外燈365nm下檢測，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
實施例6注射液中野黃芩苷、雙嘧達莫的薄層色譜鑒別方法取注射液1ml，至蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷、雙嘧達莫對照品，分別加乙醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以甲酸乙酯-冰醋酸-水(20∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鋁-乙醇試液，105℃烘5分鐘，置紫外燈365nm下檢測，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
實施例7凍干粉針(每瓶含雙嘧達莫4mg)中野黃芩苷、雙嘧達莫的含量測定取待測凍干粉針適量，加甲醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。以野黃芩苷、雙嘧達莫甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由50％降至18％，從18分鐘至25分鐘，流動相A的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，含量限度應(yīng)為以下幾項(1)每單位量含野黃芩苷的限度不得少于8.0mg(2)每單位量含雙嘧達莫的限度為制劑標示量的90-110％。
實施例8凍干粉針中野黃芩苷、雙嘧達莫的含量測定取待測凍干粉針適量，加乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。以野黃芩苷、雙嘧達莫乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，流功相A的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由50％降至18％，從18分鐘至25分鐘，流動相A的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下幾項(1)每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4.0mg(2)每單位量含雙嘧達莫的限度應(yīng)為制劑標示量的80-120％。
實施例9注射液中野黃芩苷、雙嘧達莫的含量測定取待測注射液1ml，置10ml量瓶中，加水定至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。以野黃芩苷、雙嘧達莫甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為甲醇，流動相B為0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(25％磷酸調(diào)pH＝3.0)，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由22％升至35％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由35％升至55％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由55％降至22％，從18分鐘至25分鐘，流動相A的比例為22％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，待測注射液以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下幾項(1)每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4.0mg；(2)每單位量含雙嘧達莫的限度應(yīng)為制劑標示量的85-115％。
實施例10燈莫注射液(每支含雙嘧達莫4mg)中野黃芩苷、雙嘧達莫的含量測定取待測注射液適量，加甲醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。以野黃芩苷、雙嘧達莫甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由50％降至18％，從18分鐘至25分鐘，流動相A的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，含量限度應(yīng)為以下幾項(1)每單位量含野黃芩苷的限度不得少于8.0mg；(2)每單位量含雙嘧達莫的限度為制劑標示量的90-110％。
權(quán)利要求
1.一種燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)燈莫注射劑的指紋圖譜測試，包括以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜；(2)野黃芩苷、雙嘧達莫中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、雙嘧達莫中全部或部分成分的含量測試方法。
2.按照權(quán)利要求1所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下指紋圖譜采用液相色譜法測試以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測燈莫注射制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量野黃芩苷、雙嘧達莫中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇-pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉水溶液或pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀水溶液或pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸氫二鈉水溶液或水或0.1％～5％冰醋酸溶液或0.1％～5％甲酸溶液或0.02％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有1～5個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.待測注射劑指紋圖譜中有40％～100％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±50％。
3.按照權(quán)利要求2所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下指紋圖譜采用液相色譜法測試以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測燈莫注射制劑適量，加甲醇制成每1ml含0.01-0.1mg雙嘧達莫的溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為pH值3.5的0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由50％降至18％，從18分鐘至60分鐘，流動相A的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2～3個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.待測注射劑指紋圖譜中有60％～100％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±30％。
4.按照權(quán)利要求1所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑的鑒別方法為野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測燈莫注射制劑適量，加甲醇或水或乙醇溶解并稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；另取野黃芩苷、雙嘧達莫對照品中的一種或兩種，分別加甲醇或乙醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷-甲酸或冰醋酸-水5～60∶0.5～5∶0.2～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁-乙醇試液，60～150℃烘至斑點顯色清晰，置日光或紫外燈365nm或254nm下檢測，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點。
5.按照權(quán)利要求4所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑的鑒別方法為野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測燈莫注射制劑適量，加甲醇溶解并稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；另取野黃芩苷、雙嘧達莫對照品中的一種或兩種，分別加甲醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以20∶2.5∶1.5的乙酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁-乙醇試液，105℃烘5分鐘，置紫外燈365nm下檢測，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
6.按照權(quán)利要求1所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑含量的測試方法為野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種的含量測定取待測燈莫注射制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種的水或甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈或甲醇-pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉水溶液或pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀水溶液或pH值為5.0～2.0的0.01mol/L～2mol/L磷酸氫二鈉水溶液或水或0.1％～5％冰醋酸溶液或0.1％～5％甲酸溶液或0.02％～5％磷酸溶液為流動相，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測燈莫注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4.0mg；(2)每單位量含雙嘧達莫的限度應(yīng)為制劑標示量的80-120％。
7.按照權(quán)利要求6所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑含量的測試方法為野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種的含量測定取待測燈莫注射制劑適量，加甲醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷、雙嘧達莫中一種或兩種甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為pH值3.5的0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，流動相A的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，流動相A的比例由50％降至18％，從18分鐘至25分鐘，流動相A的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，待測燈莫注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含野黃芩苷的限度不得少于8.0mg；(2)每單位量含雙嘧達莫的限度應(yīng)為制劑標示量的90-110％。
8.按照權(quán)利要求6或7所述的燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑中的野黃芩苷、雙嘧達莫及其它所有可測成分的總含量占制劑中扣除輔料量和水分量的總固體量的80％以上。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種燈莫注射劑的質(zhì)量控制方法，該方法包括燈莫注射劑的指紋圖譜測試(以燈盞花素、雙嘧達莫成分特征為主的指紋圖譜)，野黃芩苷、雙嘧達莫中全部或部分成分的鑒別測試方法，野黃芩苷、雙嘧達莫中全部或部分成分的含量測試方法；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的含量測定和指紋圖譜檢測方法對以燈盞花素、雙嘧達莫制成的注射劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為完善、有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
文檔編號G01N33/00GK1808114SQ200610200039
公開日2006年7月26日 申請日期2006年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月7日
發(fā)明者于文勇 申請人:貴陽云巖西創(chuàng)藥物科技開發(fā)有限公司